實(shí)驗(yàn)三微生物的分離純化與觀察課件

實(shí)驗(yàn)二

微生物的分離純化、

接種培養(yǎng)與保藏

平板分離的方法主要有：1、平板劃線分離法；2.稀釋涂布平板法。除能有效分離純化微生物外,還可用于測(cè)定樣品中活菌數(shù)量。土壤中微生物數(shù)量眾多,在肥沃土壤中固氮菌數(shù)量也很多,自然界中多數(shù)氮素養(yǎng)料是由微生物固氮的結(jié)果,固氮菌一般可分為自生固氮菌和共生固氮菌兩類。要分離自生固氮菌,常用阿斯畢無氮培養(yǎng)基這種選擇培養(yǎng)基,控制其適宜環(huán)境條件,使它在培養(yǎng)基上大量繁殖,然后通過稀釋法和劃線分離純化法,使它在培養(yǎng)基上形成單菌落,如分離所得不純,需要進(jìn)一步純化,直到得到純種.三實(shí)驗(yàn)材料1、培養(yǎng)基：阿斯畢無氮培養(yǎng)基。2、菜園土。3.滅菌培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、接種針、酒精燈等。四方法與步驟（一）富集培養(yǎng)：1、用已滅菌后冷卻至50oC左右的阿斯畢培養(yǎng)基倒成平板。2、用已滅菌的鑷子將黃豆粒大的菜園土擺入已冷凝的平板培養(yǎng)基上。3.正面放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，28oC培養(yǎng)3~4天后，在土粒周圍有混濁半透明的膠狀菌落出現(xiàn)，有的在后期會(huì)產(chǎn)生褐色的色素。（二）劃線分離純化:(下次實(shí)驗(yàn))1、用已溶化至50oC阿斯畢培養(yǎng)基倒入平板。2.用接種環(huán)挑取上述菌落少許，在冷凝平板上進(jìn)行劃線分離，而后置28oC培養(yǎng)4天。劃線方法如圖：1234（三）純化、鏡檢，得到純種培養(yǎng)（下次實(shí)驗(yàn)）1、平板上出現(xiàn)單菌落，按無菌操作移入阿斯畢培養(yǎng)基斜面試管中，28oC培養(yǎng)4天。2、鏡檢：將斜面菌株進(jìn)行涂片、染色、鏡檢。如是粗短桿狀或球狀的單一形態(tài)的菌體細(xì)胞較大，常呈單個(gè)或“8”字排列，在細(xì)胞表面有較厚的莢膜者，即為自生固氮菌。如有雜菌，需要進(jìn)一步劃線純化。3.將得到純化菌株，移接到另一阿斯畢培養(yǎng)基斜面管，28oC培養(yǎng)3~4天，即獲得純培養(yǎng)菌，可冷凍保存，備用。五注意事項(xiàng)在微生物分離、純化每一操作環(huán)節(jié),要嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行。平板劃線時(shí),劃線部位不可重疊。劃線時(shí),每次都要將接種環(huán)上多余菌體燒掉。培養(yǎng)皿要貼標(biāo)簽,包括班級(jí)、姓名六思考題1、分析阿斯畢培養(yǎng)基成分，說明其適用于分離自生固氮菌的原因。2、劃線分離時(shí)，為什么每次都要將接種環(huán)上