病毒感染性疾病的檢驗(yàn)診斷及方法

病毒感染性疾病的檢驗(yàn)診斷及方法病毒性疾病檢驗(yàn)診斷應(yīng)首先根據(jù)臨床特征和流行病學(xué)資料，初步判斷可能感染的病毒。然后根據(jù)可疑病毒的生物學(xué)特點(diǎn)、機(jī)體免疫應(yīng)答和臨床過(guò)程，結(jié)合患者當(dāng)前所處的時(shí)機(jī)，確定檢驗(yàn)診斷的方法。有些病毒感染潛伏期較短，發(fā)病時(shí)機(jī)體免疫系統(tǒng)尚未完全應(yīng)答，沒(méi)有抗體產(chǎn)生，因此可選擇測(cè)定病毒顆粒、病毒抗原或病毒核酸。對(duì)于潛伏期超過(guò)10天的病毒感染，可檢測(cè)特異性的IgM抗體來(lái)進(jìn)行早期快速診斷、區(qū)別初次和再次感染。對(duì)可在機(jī)體內(nèi)形成持續(xù)感染或潛伏感染的病毒，可檢測(cè)急性期和恢復(fù)期雙份血清的IgG抗體滴度有無(wú)4倍以上升高，或直接檢測(cè)病毒核酸。對(duì)原因不明，可能有新病毒感染時(shí)，應(yīng)采集相應(yīng)部位的標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，同時(shí)應(yīng)采取雙份血清以確認(rèn)分離的病毒為病原病毒。對(duì)同一癥狀可由多種病毒引起的情況，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)幾種相關(guān)病毒的病毒顆粒、抗原或抗體，對(duì)由多個(gè)型別組成的病毒可測(cè)定它們的共同抗原。病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢查包括病毒分離與鑒定、病毒核酸與抗原的直接檢出以及特異性抗體的檢測(cè)。1標(biāo)本的采集與送檢臨床醫(yī)師根據(jù)流行病學(xué)資料，疾病的癥狀與體征綜合判斷可能為何種病毒感染，留取適宜的標(biāo)本送檢。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)診斷病毒感染的價(jià)值，很大程度上取決于標(biāo)本的采集和處理的方式是否恰當(dāng)。正確采集標(biāo)本，及時(shí)運(yùn)送和處理，是極為重要的。1.1采集標(biāo)本的時(shí)間盡可能在發(fā)病的初期，急性期或患者入院的當(dāng)天進(jìn)行。疾病后期由于機(jī)體產(chǎn)生免疫力，開(kāi)始清除病毒，使病毒數(shù)量減少或消失，不易檢出。1.2標(biāo)本種類的選擇根據(jù)臨床感染的癥狀及流行病學(xué)資料，判斷可能感染病毒種類，選擇相應(yīng)部位采取標(biāo)本。處理標(biāo)本時(shí)要考慮病毒的生物學(xué)特性，如有包膜病毒凍融易被滅活。某些病毒如麻疹病毒吸附茬白細(xì)胞上，為了有效分離病毒，血液標(biāo)本應(yīng)加抗凝劑。1.2.1心臟疾病可采取咽拭子、糞便、心臟組織或心包液標(biāo)本。分離相關(guān)的腸道病毒，包括埃可病毒、柯薩奇A組和B組病毒，也可采取血液標(biāo)本進(jìn)行血清學(xué)診斷。1.2.2中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染可采取咽拭子、糞便標(biāo)本、腦脊液標(biāo)本進(jìn)行腸道病毒的分離；采取咽拭子、腦膜組織分離單純皰疹病毒，亦可采取腦脊液進(jìn)行PCR檢查；采取咽拭子，尿液、腦脊液或唾液標(biāo)本用于分離腮腺炎病毒。另外，蟲(chóng)媒病毒、人類免疫缺陷病毒、麻疹病毒、狂犬病毒等也可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染，可通過(guò)血清學(xué)或測(cè)定抗原、核酸來(lái)診斷。應(yīng)在入院時(shí)采取第1次血標(biāo)本5～10ml，第2次在2～3周后或出院前采取，用于雙份血清學(xué)診斷。1.2.3先天或新生兒感染采取咽拭子、尿液分離人類巨細(xì)胞病毒，血清學(xué)方法測(cè)定IgM有助于診斷；采取咽拭子、皮膚、尿液、腦脊液、糞便或直腸拭子分離腸道病毒；采用喉拭子、皮損、尿液標(biāo)本分離HSV，腦脊液標(biāo)本用于PCR測(cè)定，皮損標(biāo)本亦可用直接熒光抗體測(cè)定，測(cè)定血清中IgM有助于診斷。采集咽拭子、皮損等標(biāo)本用于分離帶狀皰疹病毒。HBV、HIV和微小病毒B19也可引起宮內(nèi)感染，可以進(jìn)行血清學(xué)診斷。1.3常見(jiàn)標(biāo)本的采集方法1.3.1血液以無(wú)菌操作抽取抗凝血10ml。抗凝劑可選用100U／ml肝素鈉，常用于分離CMV和HSV，亦可用于蟲(chóng)媒病毒、EBV、HIV-1及新生兒腸道病毒的分離；如欲進(jìn)行PCR檢測(cè)核酸，則需使用EDTA抗凝；為了血清學(xué)檢查的需要，應(yīng)抽取另一管5ml血液，不抗凝送檢。1.3.2腦脊液以無(wú)菌手續(xù)抽取腦脊液1～2ml，置無(wú)菌試管內(nèi)，在冰浴中應(yīng)立即送檢。在4℃可存放72小時(shí)。常用于分離柯薩奇病毒、ECHO病毒、腸道病毒、腮腺炎病毒等。1.3.3宮頸或陰道拭子采取病灶部位分泌物，將拭子置運(yùn)送液中；如無(wú)病損部位，則清理宮頸口粘液，將拭子伸入宮頸約1cm停留5秒以上取出，置運(yùn)送液中4℃冰浴立即送檢。常用于HSV、CMV的分離。1.3.4糞便標(biāo)本取2～4g糞便標(biāo)本在無(wú)菌的容器中，加8～10ml運(yùn)送液立即送檢，常用于腺病毒、腸道病毒的分離，亦用于輪狀病毒的分離及抗原檢測(cè)。2病毒檢驗(yàn)的結(jié)果評(píng)價(jià)通過(guò)實(shí)驗(yàn)手段，從標(biāo)本中獲得有關(guān)病毒感染的證據(jù)，從而確定病毒感染和臨床疾病之間的因果關(guān)系，是病毒檢驗(yàn)診斷的目標(biāo)。通過(guò)分離和鑒定獲得致病性病毒，發(fā)現(xiàn)病毒感染的特異性改變，如機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體、細(xì)胞內(nèi)包涵體的形成等，即說(shuō)明有病毒感染的存在。由于各種病毒感染在不同機(jī)體內(nèi)導(dǎo)致的結(jié)局差別很大，因此感染病毒的臨床意義必須結(jié)合流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、病毒種類及機(jī)體的病理變化作綜合分析才能判定。對(duì)于一些引起急性感染性疾病的病毒而言，在疾病流行季節(jié)從人體內(nèi)各種組織、腦脊液、血液、水皰液中分離到的病毒的致病特征，與患者的臨床特征相符時(shí)，可作出病原學(xué)診斷；或患者急性期和恢復(fù)期雙份血清中相應(yīng)的特異性抗體滴度有4倍以上的升高，也可得出病原學(xué)診斷，如乙型流行性腦炎病毒、出血熱病毒等。從呼吸道分離到的流行性感冒病毒，副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒和呼吸道合胞病毒等病毒，由于感染后通常都為急性發(fā)病，很少有無(wú)癥狀攜帶者和長(zhǎng)期排毒現(xiàn)象，因而具有臨床診斷意義。巨細(xì)胞病毒、腸道病毒、單純皰疹病毒、腺病毒等病毒，雖然分離到了病毒，但與臨床癥狀并不一定密切相關(guān)，則需考慮健康帶毒、隱性感染、混合感染和持續(xù)感染狀態(tài)等情況。可尋求血清學(xué)特異性抗體滴度是否升高來(lái)幫助診斷。臨床上疑為病毒感染，而分離培養(yǎng)陰性，在確認(rèn)標(biāo)本采集正確、無(wú)污染，并采用了敏感的細(xì)胞株，而且通過(guò)可靠的識(shí)別方法確認(rèn)無(wú)病毒存在，則可排除可疑病毒感染的可能性。如果可疑病毒為無(wú)法培養(yǎng)或難以分離的病毒，則不能排除感染的可能性，可采用血清學(xué)檢查特異性抗體以助診斷。急性期和恢復(fù)期雙份血清的總抗體滴度如有4倍以上的升高，有助于明確診斷，但不適合于早期診斷。IgM抗體的測(cè)定有助于早期診斷，但在感染的早期機(jī)體產(chǎn)生IgM有明顯的個(gè)體差異，如腮腺炎患者發(fā)病三日內(nèi)有部分患者血清中無(wú)特異性IgM抗體；僅有45％的風(fēng)疹患者在出疹后第一天特異性IgM抗體陽(yáng)性。此外，有少數(shù)患者產(chǎn)生的特異性IgM抗體可持續(xù)1～2年。在評(píng)價(jià)IgM抗體檢查的可靠性方面需引起注意。免疫缺陷的患者、局部感染、多種血清型病毒引起的感染，特異性抗體檢查可能為陰性。分子生物學(xué)診斷是通過(guò)測(cè)定病毒核酸而實(shí)現(xiàn)的，利用southern雜交可根據(jù)病毒核酸分子量的大小觀察整合型和游離型病毒。PCR方法有極高的靈敏度，但仍然有假陽(yáng)性。另外檢出病毒核酸并不等于檢出具有傳染性的病毒顆粒，其臨床意義有待進(jìn)一步確認(rèn)。參考文獻(xiàn)[1]伊強(qiáng)，歐啟水.利用EB病毒診斷鼻咽癌的研究進(jìn)展[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008年02期.[2]謝正德,劉亞誼,張輝