輸血相容性檢測

輸血相容性檢測演示文稿當(dāng)前1頁，共33頁，星期一。第一頁，共三十三頁。優(yōu)選輸血相容性檢測當(dāng)前2頁，共33頁，星期一。第二頁，共三十三頁。內(nèi)容提要一二三紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)抗體的篩選及鑒定交叉配血四抗篩和配血結(jié)果分析五案例分析當(dāng)前3頁，共33頁，星期一。第三頁，共三十三頁。紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)?zāi)郯吩囼?yàn)微柱凝膠免疫試驗(yàn)當(dāng)前4頁，共33頁，星期一。第四頁，共三十三頁。鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)鹽水介質(zhì)中紅細(xì)胞上的抗原決定簇與相應(yīng)抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。用于IgM抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗(yàn)以及血型的鑒定。當(dāng)特異性的IgG類抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。當(dāng)前5頁，共33頁，星期一。第五頁，共三十三頁。方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗(yàn)陽性，并在37℃也有活性的抗體有意義。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。優(yōu)點(diǎn)：簡便、快捷、直觀。缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)當(dāng)前6頁，共33頁，星期一。第六頁，共三十三頁。抗人球蛋白試驗(yàn)是1945年由Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗(yàn)。抗人球蛋白試驗(yàn)的建立在血型血清學(xué)上有著非常重要的意義。分為直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）和間接抗人球蛋白試驗(yàn)（IAT）。抗人球蛋白試驗(yàn)當(dāng)前7頁，共33頁，星期一。第七頁，共三十三頁。IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。補(bǔ)體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含補(bǔ)體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗(yàn)?？谷饲虻鞍自囼?yàn)原理當(dāng)前8頁，共33頁，星期一。第八頁，共三十三頁。DAT是檢測體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的一種方法，用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏，尤其是IgG和C3d包被的紅細(xì)胞。應(yīng)用：HDN和自身免疫性溶血性貧血的診斷紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查直接抗人球蛋白試驗(yàn)當(dāng)前9頁，共33頁，星期一。第九頁，共三十三頁。當(dāng)前10頁，共33頁，星期一。第十頁，共三十三頁。IAT是檢測血清中不完全抗體的一種，用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。應(yīng)用：血型的鑒定，如Rh血型抗體的檢出和鑒定交叉配血間接抗人球蛋白試驗(yàn)當(dāng)前11頁，共33頁，星期一。第十一頁，共三十三頁。當(dāng)前12頁，共33頁，星期一。第十二頁，共三十三頁。原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，是紅細(xì)胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的間距，使IgG抗體分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集常用的酶（0.5%）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)當(dāng)前13頁，共33頁，星期一。第十三頁，共三十三頁。優(yōu)點(diǎn)：酶法能顯著增強(qiáng)一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性，Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯缺點(diǎn)：①酶法處理RBC，蛋白酶會(huì)使RBC的抗原結(jié)構(gòu)破壞和變性（M、N、Fya、Fyb）②操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)當(dāng)前14頁，共33頁，星期一。第十四頁，共三十三頁。原理：凝聚胺是一種多價(jià)陽離子聚合物，在溶液中有多個(gè)陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，并借助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞的非特異性凝集。當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，IgG抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合在凝聚胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會(huì)消失。凝聚胺試驗(yàn)當(dāng)前15頁，共33頁，星期一。第十五頁，共三十三頁。當(dāng)前16頁，共33頁，星期一。第十六頁，共三十三頁。微柱凝膠試驗(yàn)原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。當(dāng)前17頁，共33頁，星期一。第十七頁，共三十三頁。且肝素對其有影響,易引起假陰性.先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。當(dāng)前26頁，共33頁，星期一。操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的大批量工作驗(yàn)陽性及紅細(xì)胞緡錢狀凝集②譜紅細(xì)胞檢查第二十頁，共三十三頁。驗(yàn)陽性及紅細(xì)胞緡錢狀凝集操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的大批量工作試管法-適用于不同溫度、便于洗滌凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會(huì)消失。第十六頁，共三十三頁。④病人血清異常，如白蛋白／球蛋白比例不正常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合物的血漿擴(kuò)容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗(yàn)來解決）。當(dāng)特異性的IgG類抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)?？贵w篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)：凝集反應(yīng)紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細(xì)胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。當(dāng)前18頁，共33頁，星期一。第十八頁，共三十三頁。微柱凝膠試驗(yàn)特異性膠：抗A、抗B、抗D中性膠：對照孔、反定型抗人球蛋白膠：抗篩、交叉配血當(dāng)前19頁，共33頁，星期一。第十九頁，共三十三頁。幾種方法的比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)鹽水法操作方便,費(fèi)用低廉只能檢出不相配合完全抗體,不能檢出不相配合的不完全抗體抗球蛋白法檢測不完全抗體最靈敏的方法操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的大批量工作酶法增強(qiáng)Rh、Kidd系統(tǒng)破壞M、N、S、s、Fy(a)、Fy(b)抗原結(jié)構(gòu),易失活,壽命短,反應(yīng)時(shí)間長凝聚胺法方便、應(yīng)用最廣Kell系統(tǒng)部分抗體如抗K、抗kp(a)、抗kp(b)檢測不出,需要抗球蛋白試驗(yàn).且肝素對其有影響,易引起假陰性.微柱凝膠法國際安全輸血檢查的推薦方法，靈敏度高、重復(fù)性好、特異性好、檢測結(jié)果可較長時(shí)間保存費(fèi)用高當(dāng)前20頁，共33頁，星期一。第二十頁，共三十三頁。抗體的篩選及鑒定有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少的在37℃有反應(yīng)的同種異型抗體不規(guī)則抗體：抗A，抗B以外的抗體包括：同種抗體和自身抗體當(dāng)前21頁，共33頁，星期一。第二十一頁，共三十三頁。抗體篩選方法鹽水介質(zhì)凝集法抗人球蛋白法凝聚胺法微柱凝膠法當(dāng)前22頁，共33頁，星期一。第二十二頁，共三十三頁。結(jié)果的判讀與解釋溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對照?？贵w篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢。當(dāng)前23頁，共33頁，星期一。第二十三頁，共三十三頁?？贵w鑒定通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。①自身細(xì)胞檢查-

排除非特異性②譜紅細(xì)胞檢查當(dāng)前24頁，共33頁，星期一。第二十四頁，共三十三頁?？贵w鑒定譜紅細(xì)胞：一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。方法：在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。當(dāng)前25頁，共33頁，星期一。第二十五頁，共三十三頁。鹽水介質(zhì)中紅細(xì)胞上的抗原決定簇與相應(yīng)抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。①酶法處理RBC，蛋白酶會(huì)使RBC的抗原結(jié)構(gòu)破壞和變性（M、N、Fya、Fyb）當(dāng)特異性的IgG類抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。①病人或供血者ABO血型錯(cuò)誤在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。③患者血清中有抗體，但篩選細(xì)胞上無相應(yīng)抗原→對患者血清進(jìn)行抗體鑒定在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。第二十八頁，共三十三頁。②操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏當(dāng)前22頁，共33頁，星期一。原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，是紅細(xì)胞相互排斥的原理。一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。當(dāng)前11頁，共33頁，星期一。自身對照：受血者紅細(xì)胞+受血者血清交叉配血主側(cè)：受血者血清+供者紅細(xì)胞檢測對供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體次側(cè)：受血者紅細(xì)胞+供者血清檢測對受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體自身對照：受血者紅細(xì)胞+受血者血清排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性及紅細(xì)胞緡錢狀凝集當(dāng)前26頁，共33頁，星期一。第二十六頁，共三十三頁。緡錢狀凝集也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細(xì)胞像許多錢幣堆積在一起。血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉擴(kuò)容。將血清適當(dāng)稀釋。當(dāng)前27頁，共33頁，星期一。第二十七頁，共三十三頁?？购Y和配血結(jié)果分析主側(cè)交叉配血不相合的原因：

①病人或供血者ABO血型錯(cuò)誤②病人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供血者紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。③供血者紅細(xì)胞上已經(jīng)包被了抗體，導(dǎo)致抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。④病人血清異常，如白蛋白／球蛋白比例不正常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合物的血漿擴(kuò)容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗(yàn)來解決）。⑤試驗(yàn)系統(tǒng)被污染。

當(dāng)前28頁，共33頁，星期一。第二十八頁，共三十三頁?？购Y和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對照：-，抗篩：-

①患者或供血者ABO血型錯(cuò)誤→重新定型②患者血清中可能含ABO抗體→檢查病人亞型、輸血史及移植史③患者血清中有抗體，但篩選細(xì)胞上無相應(yīng)抗原→對患者血清進(jìn)行抗體鑒定

④供血者紅細(xì)胞直抗試驗(yàn)陽性→檢查供血者直抗試驗(yàn)當(dāng)前29頁，共33頁，星期一。第二十九頁，共三十三頁?？购Y和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對照：-，抗篩：+

患者血清中的同種抗體與供血者紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原反應(yīng)→對患者血清進(jìn)行抗體鑒定，選擇無相應(yīng)抗原的血當(dāng)前30頁，共33頁，星期一。第三十頁，共三十三頁。抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對照：+，抗篩：+

①病人血清中可能同時(shí)存在自身抗體和同種抗體→對病人血清進(jìn)行抗體吸收及鑒定，用吸收后血清配血②病人血清不正常：白/球比不正常、血漿擴(kuò)容物→鹽水添加試驗(yàn)

③試驗(yàn)系統(tǒng)污染→重新抽樣檢測當(dāng)前31頁，共33頁，星期一。第三十一頁，共三十三頁?？购Y和配血結(jié)果分析