DB21T 2410-2015 養(yǎng)殖水體中氯霉素殘留量的測定高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法　　

ICS71.040.40DB21DB21/T2410—2015養(yǎng)殖水體中氯霉素殘留量的測定高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法DeterminationofchloramphenicolresiduesinaquaculturewaterbyHPLC-MS/MSmethod遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB21/T2410—2015本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由大連市水產(chǎn)技術(shù)推廣總站提出。本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省海洋與漁業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：大連市水產(chǎn)技術(shù)推廣總站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張秀妍、王駿、丁勇、劉彤、馬琳、郝佳。1DB21/T2410—2015本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了養(yǎng)殖水體中氯霉素殘留量的測定原理、試劑制備、測定步驟和結(jié)果計(jì)算。本標(biāo)準(zhǔn)適用于漁業(yè)生產(chǎn)養(yǎng)殖水體中氯霉素殘留量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法樣品中的氯霉素用乙酸乙酯液液萃取，反相色譜柱分離，質(zhì)譜檢測器檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。4試劑4.1乙酸乙酯：色譜純4.2甲醇：色譜純4.3甲醇水溶液[1+1]:100mL甲醇加入100mL水中，超聲混勻。4.4標(biāo)準(zhǔn)品：氯霉素，純度≥99.5%。4.5氘代氯霉素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：100μg/mL。4.6標(biāo)準(zhǔn)溶液4.6.1氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液[1.0mg/mL]：準(zhǔn)確稱取25.00mg的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容到25.00mL，配制成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，該溶液于-18℃避光保存，有效期為6個(gè)月。4.6.2氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間溶液[1μg/mL]:準(zhǔn)確量取100μL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（4.6.1）于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。該溶液于-18℃避光保存，有效期為2周～3周。4.6.3氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液[50ng/mL]:準(zhǔn)確量取0.5mL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.6.2）于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。該溶液于4℃保存，有效期為1周。2DB21/T2410—20154.6.4氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液[10ng/mL]:準(zhǔn)確量取100μL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.6.2）于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。該溶液于4℃保存，有效期為1周。4.6.5氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間溶液[1μg/mL]：準(zhǔn)確量取1mL氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL）于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。該溶液于-18℃避光保存，有效期為2～3周。4.6.6氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液[100ng/mL]：準(zhǔn)確量取10mL氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（4.6.5）于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。該溶液于4℃避光保存，有效期為1周。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀。5.2電子天平：感量0.01mg。5.3溶劑過濾器。5.4混合纖維素酯水性濾膜：孔徑0.45μm。5.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.6旋渦振蕩器。5.7超聲振蕩器。6測定步驟6.1樣品處理6.1.1將水樣經(jīng)混合纖維素酯濾膜過濾。6.1.2量取過濾的水樣250.0mL，置于500mL分液漏斗中。向分液漏斗中加入50.0μL氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（4.6.6），振搖混勻。6.1.3加入50mL乙酸乙酯，劇烈振搖3min，靜置分層。將下層水樣放入燒杯中。用濾紙卷吸干錐形分液漏斗管頸內(nèi)水分，乙酸乙酯萃取液放入125mL雞心瓶中。6.1.4將萃取過的燒杯中的水樣倒回原分液漏斗，重復(fù)萃取步驟（6.1.2）一次。合并乙酸乙酯萃取液于上述125mL雞心瓶中，45℃±2℃水浴中減壓濃縮至近干。6.1.5向雞心瓶中加入1.0mL甲醇水溶液（4.3），渦旋振蕩1min、超聲振蕩1min，樣液經(jīng)0.22μm針孔式有機(jī)相濾膜過濾后供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。6.2空白試驗(yàn)量取250.0mL純水，按樣品處理步驟（6.1）進(jìn)行。6.3測定6.3.1色譜條件6.3.1.1色譜柱：C18柱，100mm×3.0mm（內(nèi)徑），粒度1.8μm。3DB21/T2410—20156.3.1.2流動(dòng)相：甲醇:水為60:40（V/V）。6.3.1.3流速：0.3mL/min。6.3.1.4柱溫：35℃。6.3.1.5進(jìn)樣量：20μL。6.3.2質(zhì)譜條件6.3.2.1離子源：電噴霧ESI源。6.3.2.2掃描方式：負(fù)離子掃描。6.3.2.3檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。6.3.2.4霧化氣壓力：0.28MPa。6.3.2.5霧化氣溫度：350℃。6.3.2.6霧化氣、干燥氣為高純氮?dú)?，氣體流量：10L/min。6.3.2.7碰撞氣為高純氮?dú)猓瑲怏w壓力：0.15MPa。6.3.2.8監(jiān)測離子對：氯霉素m/z321/257、321/152；氘代氯霉素m/z326/157。6.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制分別準(zhǔn)確移取10ng/mL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（4.6.4）0.00mL、0.50mL、1.00mL和50ng/mL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（4.6.3）0.25mL、0.50mL、1.00mL于6個(gè)10.00mL容量瓶中，每個(gè)容量瓶中加入0.5mL氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(4.6.6)，用流動(dòng)相（6.3.1.2）定容至10mL。配制成的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度分別為0.00ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/mL、1.25ng/mL、2.50ng/mL和5.00ng/mL，每毫升該溶液含有氘代氯霉素5.0ng。將此標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按6.3的儀器條件測定，氯霉素以氘代氯霉素為內(nèi)標(biāo)物，通過儀器工作站制定內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.5定性依據(jù)在相同測定條件下，待測組分與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在±5%以內(nèi)，離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)男Ｕ龢?biāo)準(zhǔn)的相對豐度一致，可判斷為陽性樣品。6.6定量測定將樣品制備液按6.3測定，通過儀器工作站計(jì)算制備液中氯霉素的濃度。在上述條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液中氯霉素、氘代氯霉素的參考保留時(shí)間分別為2.450min、2.476min，標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖及質(zhì)譜圖參見附錄A。7結(jié)果計(jì)算7.1制備液中氯霉素的濃度Ci由儀器工作站依據(jù)內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算。7.2樣品中氯霉素的含量按式（1）計(jì)算。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。4DB21/T2410—2015......................................Xi—樣品中氯霉素的含量，單位為微克每升(μg/L）；Ci—制備液中氯霉素的濃度，單位為微克每升(μg/LV1—最終定容體積，單位為毫升（mL）；V2—樣品體積，單位為毫升（mL）。8檢出限氯霉素的檢出限為2ng/L，定量限為4ng/L。9線性范圍氯霉素的線性范圍為0.5μg/L～5.0μg/L。氯霉素添加濃度為2ng/L～20ng/L時(shí)