《Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范》

ICS83.180

CCSG39

T/CASME

中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會團體標準

T/CASMEXXX—2024

Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范

TechnicalspecificationsforthepreparationoftypeIandtypeVcollagen

（征求意見稿）

2024-XX-XX發(fā)布2024-XX-XX實施

中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會發(fā)布

T/CASMEXXX—2024

Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備的總體要求、制備技術和記錄。

本文件適用于以魚皮為原料制備Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB1886.10食品安全國家標準食品添加劑冰乙酸（又名冰醋酸）

GB1886.20食品安全國家標準食品添加劑氫氧化鈉

GB1886.174食品安全國家標準食品添加劑食品工業(yè)用酶制劑

GB2721食品安全國家標準食用鹽

GB2733食品安全國家標準鮮、凍動物性水產品

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準

GB14881食品安全國家標準食品生產通用衛(wèi)生規(guī)范

GB/T27304食品安全管理體系水產品加工企業(yè)要求

中華人民共和國藥典（2020年版）

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

膠原蛋白collagen

以純化的（非交聯(lián)的）Ⅰ型膠原蛋白為原料制備的左手螺旋的重復Gly-X-Y序列的3條肽鏈相互盤繞

成右手超螺旋結構特征的結構蛋白。

注：Gly是甘氨酸，X通常是脯氨酸，Y通常是羥脯氨酸或羥賴氨酸。

[來源：GB/T38482—2021，3.1]

Ⅰ型膠原蛋白typeⅠcollagen

由2條1鏈和1條2肽鏈組成的具有完整三螺旋結構的膠原蛋白。

[來源：GB/T38482—2021，3.2]

Ⅴ型膠原蛋白typeⅤcollagen

由1條1鏈、1條2和1條3肽鏈組成的具有完整三螺旋結構的膠原蛋白。

4總體要求

1

T/CASMEXXX—2024

選址

選址符合下列要求：

a)宜靠近有加工副產物的水產品加工生產區(qū)；

b)所在地應有工業(yè)廢水集中排放的處理區(qū)；

c)周圍環(huán)境不應影響或污染產品；

d)有充足的電力供應。

設施和生產人員

應符合GB14881的要求。

安全管理

應符合GB/T27304的要求。

容器和設備

4.4.1直接接觸原料、半成品、成品的器具應由無毒耐腐蝕的材料制成，易清洗。

4.4.2至少應配有以下設備：

a)烘干機；

b)粉碎機；

c)攪拌設備；

d)離心機。

4.4.3所有電氣設備的控制器應組裝在一起，由一個主控制箱操縱，且遠離排水區(qū)。

4.4.4設備應保持完好、清潔、確保正常運轉，定期檢查和維護保養(yǎng)。

質量檢驗室

應建有相應的質量檢驗室，至少應配備恒壓或恒流電源、垂直板電泳槽和制膠模具及相關技術人員。

原輔料要求

4.6.1魚皮應符合GB2733的規(guī)定。

4.6.2水應符合GB5749的規(guī)定。

4.6.3氫氧化鈉應符合GB1886.20的規(guī)定。

4.6.4氯化鈉應符合GB2721的規(guī)定。

4.6.5冰乙酸應符合GB1886.10的規(guī)定。

4.6.6胃蛋白酶應符合GB1886.174的規(guī)定。

5制備技術

工藝流程

Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備工藝流程見圖1。

2

T/CASMEXXX—2024

開始

預處理

粗提

分離

純化

不合格

檢驗再純化

合格

結束

圖1Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備工藝流程圖

預處理

5.2.1使用溫度不高于20℃的水清洗魚皮，除去夾雜的頭、鰭、魚肉、內臟和其它附于表面的血污、

泥沙等雜質，并剔除魚鱗。

5.2.2瀝干，剪碎至（1cm±0.2cm）×（1cm±0.2cm），于55℃±5℃烘干2h，粉碎至50目，按

200g魚皮15L0.1mol/L氫氧化鈉溶液的比例浸泡30h，期間持續(xù)攪拌，于2500g離心10min取沉淀，

用水沖洗至pH為7.0，于55℃±5℃烘干2h。

粗提

在4℃±1℃環(huán)境下進行粗提，按100g魚皮、10L4℃±1℃水、150mL冰乙酸、10g胃蛋白酶的比例

混合，連續(xù)攪拌42h后，100000g離心60min取上清液，緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為

2.0mol/L，鹽析過夜，100000g離心15min，取白色沉淀，為膠原蛋白粗品。

分離

在4℃±1℃環(huán)境下進行分離，將膠原蛋白粗品溶解于含有1.0mol/LNaCl的0.05mol/LTris-HC1緩

沖液中（pH7.5），100000g離心60min取上清液，緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為2.4

mol/L，鹽析過夜，100000g離心15min，分別收集沉淀和上清液。

純化

5.5.1在4℃±1℃環(huán)境下進行純化。

5.5.2將沉淀溶解于0.25mol/L冰乙酸中，裝入截留分子量為10kDa的透析袋，用0.025mol/L冰乙

酸溶液透析60h，真空冷凍干燥，所得無臭無味白色海綿狀固體即為Ⅰ型膠原蛋白。

5.5.3向上清液中緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為4.0mol/L，鹽析過夜，100000g離

心15min，同5.5.1操作，所得無臭無味白色海綿狀固體即為Ⅴ型膠原蛋白。

檢驗

3

T/CASMEXXX—2024

按《中華人民共和國藥典》（2020年版）四部通則0541中規(guī)定的第五法SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法

（SDS法）進行測定。Ⅰ型、Ⅴ型膠原蛋白純度應不低于95％，典型的Ⅰ型和Ⅴ型膠原蛋白電泳圖

譜見附錄A。

再純化

若達不到5.6要求，可將5.5所得Ⅰ型/Ⅴ型膠原蛋白再次溶解于預冷至4℃±1℃的0.5mo1/L冰乙酸

（1:100，w/v）中，100000g離心60min，緩慢加入氯化鈉粉末至混合液中氯化鈉濃度為2.4mol/L，鹽

析過夜，100000g離心15min，分別收集沉淀和上清液。按5.5再純化后，按5.6檢驗。

6記錄

制備過程中應記錄并保存以下內容：

a)執(zhí)行各階段操作人員的姓名；

b)操作時間、地點；

c)執(zhí)行的具體操作內容；

d)操作結果或觀察到的現(xiàn)象；

e)其他。

4

T/CASMEXXX—2024

A

A

附錄A

（資料性）

魚皮Ⅰ型和Ⅴ型膠原蛋白SDS圖譜

魚皮Ⅰ型和Ⅴ型膠原蛋白SDS圖譜見圖1。

說明：

泳道1——蛋白質分子量標準；

泳道2——Ⅴ型膠原蛋白；

泳道3——Ⅰ型膠原蛋白。

圖A.1魚皮Ⅰ型和Ⅴ型膠原蛋白SDS圖譜

5

T/CASMEXXX—2024

參考文獻

[1]GB/T38482—2021動物源性I型膠原蛋白成分測定聚丙烯酰胺凝膠電泳法

6

《Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范》

編制說明

團標制定工作組

二零二四年四月

1

一、工作簡況

（一）任務來源

根據(jù)2024年全國標準化工作要點，大力推動實施標準化戰(zhàn)略，

持續(xù)深化標準化工作改革，加強標準體系建設，提升引領高質量發(fā)展

的能力。依據(jù)《中華人民共和國標準化法》，以及《團體標準管理規(guī)

定》相關規(guī)定，中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會決定立項并聯(lián)合杭州紐曲星生

物科技有限公司等相關單位共同制定《Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術

規(guī)范》團體標準。于2024年3月30日，中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會發(fā)布

了《Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范》團體標準立項通知，正式立

項。為響應需求，需要制定完善的Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范

產品標準，對產品質量進行管理，滿足質量提升需要。

（二）編制背景及目的

膠原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，

因此在食品、醫(yī)藥、組織工程、化妝品等領域獲得廣泛的應用。我國

是一個漁業(yè)大國,但加工技術水平較低,大量的加工廢棄物造成了嚴

重的資源浪費和環(huán)境污染，且近年來瘋牛病、口蹄疫、豬鏈球菌、禽

流感等傳染病的頻繁暴發(fā)，使傳統(tǒng)畜禽來源膠原蛋白的安全性越來越

讓人擔心。因此,利用水產品加工廢棄物生產可以替代畜禽來源的膠

原蛋白，對于減少環(huán)境污染、提高漁業(yè)效益、促進產品安全具有重要

意義。

目前,研究人員已經鑒定出了至少29種膠原蛋白（I-XXIX）。I

型膠原蛋白在脊椎動物體內含量最多,廣泛分布于機體的各個組織,

也是當前各領域應用最多的一種。V型膠原蛋白常常伴隨著1型膠原

蛋白表達,但含量較少,具有其獨特的生理功能,如抑制表皮、內皮、

平滑肌、癌細胞的粘附和增殖，結合肝素、胰島素、骨礦化結合素、

2

血管內皮抑制因子、巨噬細胞集落刺激因子等生物活性物質，可用于

醫(yī)藥、材料和生物醫(yī)學等領域。

水產動物體內膠原蛋白含量高于陸生動物，如鰱魚、鳙魚和草魚

魚皮的蛋白質含量分別為25.9%、23.6%和29.8%，均高于各自相應魚

肉的蛋白質含量：17.8%、15.3%和16.6%。而魚皮中的膠原含量最高

可超過其蛋白質總量的80%，較魚體的其它部位要高許多。但水產動

物膠原蛋白的種類對比陸生動物要少得多，已從魚類中分離鑒定出的

膠原類型有：廣泛分布在真皮、骨、鱗、鰾、肌肉等處的I型、軟骨

和脊索的Ⅱ型和Ⅺ型以及肌肉的V型。而魚皮和魚骨所含的Ⅰ型膠原

蛋白是其主要膠原蛋白。此外，還發(fā)現(xiàn)ⅩⅧ型膠原，然而哺乳動物中

含量比較豐富的Ⅲ型膠原，在水產動物中尚未發(fā)現(xiàn)

（三）編制過程

1、項目立項階段

在目前發(fā)現(xiàn)的膠原蛋白中，Ⅰ型膠原蛋白的價格較低，易被群眾

接受，其它類型的膠原如Ⅲ、Ⅳ等僅在研究中制備，價格昂貴不宜于

大量生產，且目前，無I型及V型膠原蛋白制備技術規(guī)范相關標準，

因此，I型及V型膠原蛋白制備技術的規(guī)范化尤為重要?！禝型及V型

膠原蛋白制備技術規(guī)范》團體標準的制定將結合杭州紐曲星生物科技

有限公司的I型及V型膠原蛋白制備技術，提出規(guī)范化的要求。

2、理論研究階段

標準起草組成立伊始就Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術進行了深

入的調查研究，同時廣泛搜集相關標準和國外技術資料，進行了大量

的研究分析、資料查證工作，確定了標準的制定原則，結合現(xiàn)有實際

應用經驗，為標準的起草奠定了基礎。

標準起草組進一步研究了Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備的主要技術

3

特點，為標準的具體起草指明方向。

3、標準起草階段

在理論研究基礎上，起草組在標準編制過程中充分借鑒已有的理

論研究和實踐成果，基于我們基本國情，經過數(shù)次修改，形成了《Ⅰ

型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范》標準草案稿。

4、標準征求意見階段

形成標準草案稿之后，起草組召開了多次專家研討會，從標準框

架、標準起草等角度廣泛征求多方意見，從理論完善和實踐應用方面

提升標準的適用性和實用性。經過理論研究和方法驗證，明確和規(guī)范

Ⅰ型及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范的技術要求。起草組形成了《Ⅰ型

及Ⅴ型膠原蛋白制備技術規(guī)范》（征求意見稿）。

（四）主要起草單位及起草人所做的工作

主要起草單位：中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會、杭州紐曲星生物科技有

限公司等多家單位的專家成立了規(guī)范起草小組，開展標準的編制工作。

經工作組的不懈努力，在2024年4月，完成了標準征求意見稿的編

寫工作。

2、廣泛收集相關資料。

在廣泛調研、查閱和研究國際標準、國家標準、行業(yè)標準的基礎

之上，形成本標準征求意見稿。本標準的制定引用的標準如下：

GB1886.10食品安全國家標準食品添加劑冰乙酸（又名冰

醋酸）

GB1886.20食品安全國家標準食品添加劑氫氧化鈉

GB1886.174食品安全國家標準食品添加劑食品工業(yè)用酶

制劑

GB2721食品安全國家標準食用鹽

4

GB2733食品安全國家標準鮮、凍動物性水產品

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準

GB14881食品安全國家標準食品生產通用衛(wèi)生規(guī)范

GB/T27304食品安全管理體系水產品加工企業(yè)要求

中華人民共和國藥典（2020年版）

二、標準編制原則和主要內容

（一）標準制定原則

本標準依據(jù)相關行業(yè)標準，標準編制遵循“前瞻性、實用性、統(tǒng)

一性、規(guī)范性”的原則，