《白肋煙煙堿轉(zhuǎn)化株鑒定規(guī)程》研究報(bào)告

YC/T《白肋煙煙堿轉(zhuǎn)化株鑒定規(guī)程》研究報(bào)告 “白肋煙煙堿轉(zhuǎn)化株鑒定規(guī)程”項(xiàng)目來(lái)源于國(guó)家煙草專賣局文件國(guó)煙科〔2013〕115號(hào)《國(guó)家煙草專賣局關(guān)于印發(fā)2013年度煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目計(jì)劃的通知》。該項(xiàng)目牽頭單位為國(guó)家煙草栽培生理生化研究基地，協(xié)作單位包括中國(guó)煙草白肋煙試驗(yàn)站、四川省煙草公司、云南省煙草公司大理州公司和云南省煙草農(nóng)業(yè)研究院。該項(xiàng)目任務(wù)下達(dá)后，按照合同約定，制定了項(xiàng)目實(shí)施方案。各承擔(dān)單位積極開展了研究工作。國(guó)家煙草栽培生理生化研究基地初步起草了白肋煙煙堿轉(zhuǎn)化株鑒定標(biāo)準(zhǔn)，并與四川省煙草公司和云南省煙草公司大理州公司聯(lián)合進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)和驗(yàn)證，通過(guò)在大田設(shè)置田間試驗(yàn)比較不同鑒別標(biāo)準(zhǔn)對(duì)降低后代群體煙堿轉(zhuǎn)化株和煙草特有亞硝胺含量的效果，取得預(yù)期結(jié)果，證實(shí)了該標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性和有效性。中國(guó)煙草白肋煙試驗(yàn)站和云南省煙草農(nóng)業(yè)研究院也采用該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所選育的白肋煙品種進(jìn)行驗(yàn)證，取得了較好的應(yīng)用效果。現(xiàn)將主要研究結(jié)果報(bào)告如下：一、白肋煙煙堿轉(zhuǎn)化株的鑒定時(shí)期由于轉(zhuǎn)化株的煙堿轉(zhuǎn)化主要發(fā)生在煙葉的調(diào)制期，因此要對(duì)轉(zhuǎn)化株進(jìn)行早期鑒定，必須首先對(duì)轉(zhuǎn)化性狀進(jìn)行誘導(dǎo)。鑒定時(shí)期需在開花前完成，以便選擇單株進(jìn)行雜交授粉或自交留種。研究表明，乙烯利或碳酸氫鈉水溶液處理可以有效激活轉(zhuǎn)化株的煙堿去甲基酶活性，使煙堿轉(zhuǎn)化達(dá)到基因型所規(guī)定的程度。對(duì)轉(zhuǎn)化株的鑒定從苗期到開花前都可以進(jìn)行，苗期鑒定的好處在于可以提前在移栽前將轉(zhuǎn)化株去除，避免其進(jìn)入大田，但由于苗期鑒定葉片小，樣品量少，加大了分析測(cè)定的難度，因而以移栽后4-6周取樣測(cè)定為好，便于大批量處理和檢測(cè)。在國(guó)內(nèi)系統(tǒng)研究了煙草生長(zhǎng)發(fā)育不同時(shí)期煙葉對(duì)乙烯利處理的反應(yīng)。煙草從育苗到移栽再到現(xiàn)蕾開花要經(jīng)歷漫長(zhǎng)的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，為了明確不同生育階段煙株的煙葉對(duì)乙烯利誘導(dǎo)處理的反應(yīng)，在溫室條件下分別種植不同轉(zhuǎn)化類型煙株的的后代煙苗，于不同時(shí)期取樣進(jìn)行煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)，結(jié)果表明，不同生育時(shí)期進(jìn)行煙堿轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)可以取得較為一致的定性結(jié)果，高轉(zhuǎn)化株在5個(gè)時(shí)期測(cè)定所得到的煙堿轉(zhuǎn)化率均在90%以上，低轉(zhuǎn)化株的煙堿轉(zhuǎn)化率在30%到43%之間，而非轉(zhuǎn)化株各時(shí)期測(cè)定煙堿轉(zhuǎn)化率均在3%以下（圖1）。同時(shí)，我們注意到在苗期取樣進(jìn)行轉(zhuǎn)化株誘導(dǎo)可以得到較高的煙堿轉(zhuǎn)化率，但由于苗期葉片小，生物堿測(cè)定難度較大。由于轉(zhuǎn)化株的煙堿轉(zhuǎn)化主要發(fā)生在煙葉的調(diào)制期，因此要對(duì)轉(zhuǎn)化株進(jìn)行早期鑒定，必須首先對(duì)轉(zhuǎn)化性狀進(jìn)行誘導(dǎo)。研究表明，乙烯利處理可以有效激活轉(zhuǎn)化株的煙堿去甲基酶活性，使煙堿轉(zhuǎn)化達(dá)到基因型所規(guī)定的程度。對(duì)轉(zhuǎn)化株的鑒定從苗期到開花前都可以進(jìn)行，苗期鑒定的好處在于可以提前在移栽前將轉(zhuǎn)化株去除，避免其進(jìn)入大田，但由于苗期鑒定葉片小，樣品量少，加大了分析測(cè)定的難度，因而以移栽后4-6周取樣測(cè)定為好，便于大批量處理和檢測(cè)。高轉(zhuǎn)化株低轉(zhuǎn)化株非轉(zhuǎn)化株Highconverterlowconverternon-converter圖1不同時(shí)期取樣進(jìn)行轉(zhuǎn)化株誘導(dǎo)的效果二、煙株取樣部位研究表明，煙株不同部位的葉片都可以用來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)化性狀誘導(dǎo)，但下部葉發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)，誘導(dǎo)所需時(shí)間短，效率高，宜用下部葉進(jìn)行誘導(dǎo)和檢測(cè)。為了明確不同葉位的煙葉對(duì)乙烯利處理誘導(dǎo)煙堿轉(zhuǎn)化的反應(yīng)，我們以高轉(zhuǎn)化株為材料，在移栽后第7周同時(shí)對(duì)所有部位的煙葉取樣，雙數(shù)葉片在乙烯利處理后保濕晾制，單數(shù)葉片噴清水后保濕晾制，10d后測(cè)定煙堿轉(zhuǎn)化率。結(jié)果如圖2所示，雖然不同葉位的葉片生理年齡和發(fā)育程度存在很大差異，但在乙烯利處理后均可以使煙堿轉(zhuǎn)化得到充分的誘導(dǎo)，基本達(dá)到基因型所規(guī)定的最大煙堿轉(zhuǎn)化程度，各部位葉片的煙堿轉(zhuǎn)化率都達(dá)到95%以上，這表明任何部位的煙葉，即使是未充分發(fā)育的葉片也可使用乙烯利處理的方法進(jìn)行煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)和轉(zhuǎn)化株的鑒別。但考慮到煙堿轉(zhuǎn)化是與煙葉的衰老過(guò)程相伴隨的，下部葉片發(fā)育時(shí)間較長(zhǎng)，誘導(dǎo)所需時(shí)間較短，對(duì)煙葉產(chǎn)量影響小，所以以選用下部葉為宜。結(jié)果還表明，未經(jīng)乙烯利處理的自然晾制葉片在不同部位間存在顯著的煙堿轉(zhuǎn)化程度差異，隨著葉位的升高，在自然晾制條件下的煙葉的煙堿轉(zhuǎn)化率呈明顯的下降趨勢(shì)，這主要與不同部位葉片的成熟度有關(guān)。圖2乙烯利處理對(duì)轉(zhuǎn)化株不同部位葉片煙堿轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)的影響三、轉(zhuǎn)化性狀的誘導(dǎo)方法和技術(shù)（一）大田生長(zhǎng)條件下乙烯處理對(duì)轉(zhuǎn)化株早期鑒定效果首先利用乙烯利處理方法對(duì)大田生長(zhǎng)的煙株進(jìn)行煙堿轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)和轉(zhuǎn)化株的早期鑒定。于移栽后3周對(duì)大田煙株進(jìn)行掛牌定株，每株摘取1片煙葉用濃度為0.3%乙烯利水溶液均勻噴灑，使葉片充分濕潤(rùn)，然后在保濕條件下進(jìn)行晾制，在葉片完全變黃后烘干磨碎，測(cè)定樣品的煙堿、降煙堿含量，計(jì)算煙堿轉(zhuǎn)化率。在煙株成熟后，在同一煙株上摘取相鄰1片煙葉進(jìn)行自然晾制，晾制結(jié)束后烘干粉碎，測(cè)定生物堿含量并計(jì)算煙堿轉(zhuǎn)化率。圖3表示了白肋煙開花前進(jìn)行乙烯利處理對(duì)煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)和轉(zhuǎn)化株的鑒定效果。多數(shù)煙株為非轉(zhuǎn)化株，其煙堿轉(zhuǎn)化率較低，而且乙烯利處理煙葉和自然晾制煙葉的煙堿轉(zhuǎn)化率沒(méi)有顯著差異。但同時(shí)采用乙烯利處理方法鑒別出一些低轉(zhuǎn)化株，這些轉(zhuǎn)化株在正常的自然晾制后煙堿轉(zhuǎn)化率并沒(méi)有顯著升高，因此如果不進(jìn)行乙烯處理誘導(dǎo)很難被鑒別出來(lái)。對(duì)于轉(zhuǎn)化程度較高的轉(zhuǎn)化株，乙烯利處理后，煙堿轉(zhuǎn)化率顯著高于未經(jīng)乙烯利處理的煙葉，一般比自然晾制的煙葉高出2-3倍。圖3乙烯利處理對(duì)大田生長(zhǎng)煙株煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)和鑒別效果進(jìn)一步分析表明，根據(jù)自然晾制后煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率的測(cè)定結(jié)果并不能有效和完全鑒別群體中的轉(zhuǎn)化株，一些轉(zhuǎn)化程度較低的低轉(zhuǎn)化株由于煙堿轉(zhuǎn)化不完全，煙堿轉(zhuǎn)化率沒(méi)有顯著升高，因此往往被劃定為非轉(zhuǎn)化株而保留。采用乙烯利處理可以使轉(zhuǎn)化株的煙堿轉(zhuǎn)化性狀得以充分表達(dá)，從而鑒別出一些在常規(guī)晾制方法中無(wú)法鑒別出來(lái)的低轉(zhuǎn)化株，因而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化株的更有效的鑒別。以我國(guó)白肋煙TN90為材料，研究了乙烯利處理進(jìn)行轉(zhuǎn)化株早期鑒定結(jié)果與調(diào)制后煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率的一致性。在移栽后30d選60棵正常煙株掛牌定株，摘取1片下部葉，用乙烯利水溶液均勻噴灑，保濕晾制7d后，進(jìn)行煙堿和降煙堿含量測(cè)定，計(jì)算煙堿轉(zhuǎn)化率。在煙株成熟后，按常規(guī)方法進(jìn)行半整株晾制，38d后采樣進(jìn)行第二次煙堿和降煙堿含量測(cè)定，計(jì)算煙堿轉(zhuǎn)化率。對(duì)60棵煙株用乙烯利處理方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化株的誘導(dǎo)鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)23株煙葉的煙堿轉(zhuǎn)化率達(dá)到5%以上，為煙堿轉(zhuǎn)化株，占總測(cè)定株數(shù)的38.3%，其中10株的煙堿轉(zhuǎn)化率超過(guò)20%，為高轉(zhuǎn)化株，占總測(cè)定株數(shù)的16.7%。在煙葉成熟后，按正常方式進(jìn)行半整株晾制，干葉期對(duì)田間定株的煙株進(jìn)行第二次取樣，測(cè)定煙堿和降煙堿含量，計(jì)算煙堿轉(zhuǎn)化率。結(jié)果表明，在所測(cè)煙株群體中有18株煙葉的煙堿轉(zhuǎn)化率達(dá)到5%以上。圖4為兩次測(cè)定結(jié)果的比較，從中可以看出，通過(guò)乙烯利處理早期鑒定的轉(zhuǎn)化株包括了所有18株在調(diào)制后自然形成的轉(zhuǎn)化株，而且兩次測(cè)定所得的煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布趨勢(shì)具有較高的一致性，說(shuō)明通過(guò)誘導(dǎo)方法早期鑒定轉(zhuǎn)化株是十分有效的。結(jié)果還表明，早期轉(zhuǎn)化株的誘導(dǎo)后所得到的煙堿轉(zhuǎn)化率一般高于煙葉自然晾制后的煙堿轉(zhuǎn)化率，進(jìn)一步說(shuō)明乙烯利處理可以刺激和促進(jìn)具有煙堿去甲基能力煙株的煙堿向降煙堿轉(zhuǎn)化，這對(duì)提高轉(zhuǎn)化株鑒定的準(zhǔn)確性和有效性十分有利。更有意義的是，采用乙烯利處理方法進(jìn)行誘導(dǎo)，可以鑒別出一些在正常晾制條件下無(wú)法有效鑒別的低轉(zhuǎn)化株。本試驗(yàn)中，有5個(gè)低轉(zhuǎn)化株只在早期誘導(dǎo)條件下才被鑒別出來(lái)，因此，通過(guò)乙烯利處理可以有效地鑒別低轉(zhuǎn)化株，從而提高鑒定的效果。圖4乙烯利早期誘導(dǎo)后與調(diào)制后煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率的比較目前我國(guó)栽培上應(yīng)用的白肋煙品種主要有兩類，一是利用雄性胞質(zhì)不育系配制的雜交種，如鄂煙1號(hào)、鄂煙3號(hào)、達(dá)白1號(hào)等，另一類為系統(tǒng)選育的常規(guī)品種，如TN90、TN86等，它們普遍存在煙堿轉(zhuǎn)化株比例較高的問(wèn)題，因此對(duì)其進(jìn)行改良是當(dāng)務(wù)之急。對(duì)于雜交種的改良，主要是對(duì)親本材料進(jìn)行轉(zhuǎn)化株的早期鑒定，并嚴(yán)格選擇非轉(zhuǎn)化株進(jìn)行雜交制種；對(duì)于常規(guī)品種的改良，主要是在早期鑒定的基礎(chǔ)上去除轉(zhuǎn)化株，留取非轉(zhuǎn)化株進(jìn)行種子生產(chǎn)。本試驗(yàn)表明，乙烯利處理進(jìn)行轉(zhuǎn)化株的早期鑒定對(duì)品種的改良效果非常明顯，非轉(zhuǎn)化株的自交后代群體中，非轉(zhuǎn)化株的比例達(dá)到91.4%，而未改良的品種群體非轉(zhuǎn)化株的比例僅為60%。由于在非轉(zhuǎn)化株的自交后代中仍會(huì)出現(xiàn)少量的低轉(zhuǎn)化株，這些轉(zhuǎn)化株會(huì)在以后的世代中積累擴(kuò)散，因此，轉(zhuǎn)化株的鑒別和品種的改良應(yīng)成為一項(xiàng)經(jīng)常性的工作。（二）碳酸氫鈉對(duì)離體葉片煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)作用以溫室栽培的白肋煙TN90轉(zhuǎn)化株和非轉(zhuǎn)化株作為試驗(yàn)材料。分別在移栽后1周的煙苗及移栽后4周的煙株上摘取葉片進(jìn)行試驗(yàn)，每株取相鄰葉片2片，其中幼株取自上而下第4和第5片，成株為自下而上第4和第5片，每株所取的2片葉其中1片用碳酸氫鈉水溶液噴灑處理，另1片葉僅噴灑清水作為對(duì)照。碳酸氫鈉的濃度幼株葉片為0.8%，成株葉片為1%。噴后葉片在溫度為33℃，濕度為80%的恒溫恒濕箱中保濕晾制6天，之后烘干磨碎，測(cè)定葉片生物堿含量和煙堿轉(zhuǎn)化率，測(cè)定結(jié)果見表1。從結(jié)果可以看出，對(duì)于非轉(zhuǎn)化株，在碳酸氫鈉處理后6天，葉片煙堿轉(zhuǎn)化率與對(duì)照葉片沒(méi)有顯著差異，但對(duì)于轉(zhuǎn)化株，碳酸氫鈉處理的葉片煙堿轉(zhuǎn)化率比對(duì)照葉片一般高出2-3倍，表明碳酸氫鈉對(duì)轉(zhuǎn)化株的煙堿轉(zhuǎn)化有明顯的促進(jìn)和誘導(dǎo)作用。值得注意的是高轉(zhuǎn)化株在經(jīng)碳酸氫鈉處理6天后，煙堿轉(zhuǎn)化率達(dá)到93%表1NaHCO3處理對(duì)不同類型煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率的影響NaHCO3處理對(duì)照材料類型煙堿（%）降煙堿（%）煙堿轉(zhuǎn)化率(%)煙堿（%）降煙堿(%)煙堿轉(zhuǎn)化率（%）幼株非轉(zhuǎn)化株0.3690.0122.85（0.42）0.4280.0112.49（0.39）低轉(zhuǎn)化株0.2590.15036.67（5.82）0.3540.0328.28（3.25）高轉(zhuǎn)化株0.0180.32594.75（4.09）0.2470.11832.42（5.23）成株非轉(zhuǎn)化株1.1320.0211.85（0.32）1.0890.0221.99（0.41）低轉(zhuǎn)化株0.8010.42934.88（5.24）0.8850.18016.92（3.56）高轉(zhuǎn)化株0.0410.59693.56（5.59）0.5230.39943.29（6.18）以上數(shù)據(jù)為10-15株煙的平均值，括號(hào)內(nèi)的數(shù)據(jù)為標(biāo)準(zhǔn)差（三）碳酸氫鈉濃度對(duì)煙堿轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)效果的影響試驗(yàn)所用材料包括非轉(zhuǎn)化株、低轉(zhuǎn)化株和高轉(zhuǎn)化株的幼株（移栽后1周）和成株（移栽后4周），目的是找出可達(dá)到最佳誘導(dǎo)效果的碳酸氫鈉水溶液濃度。對(duì)于幼株的處理濃度分別為0(H2Oonly),0.5%,0.8%和1.0%，對(duì)于成株采用的處理濃度分別為0(H2Oonly),0.5%,1.0%和1.5%，煙株第4和第5片葉摘掉后進(jìn)行處理，在恒溫恒濕箱中晾制。結(jié)果表明，不同碳酸氫鈉濃度對(duì)煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)效果有顯著影響。對(duì)成株來(lái)說(shuō)，最適宜的處理濃度為1%，在此濃度下，所得到的煙堿轉(zhuǎn)化率最高，且達(dá)到最大轉(zhuǎn)化率的處理時(shí)間也最短。圖5表示了不同處理濃度對(duì)煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)作用，經(jīng)1%濃度碳酸氫鈉水溶液處理的煙葉在處理后4天進(jìn)行測(cè)定，煙堿轉(zhuǎn)化率已達(dá)到95%。濃度較低時(shí)，會(huì)造成煙堿轉(zhuǎn)化不完全，而且需要較長(zhǎng)的時(shí)間進(jìn)行晾制以達(dá)到一定的轉(zhuǎn)化程度。濃度過(guò)高時(shí)，會(huì)造成葉組織傷害，進(jìn)而抑制煙堿轉(zhuǎn)化過(guò)程的進(jìn)行。碳酸氫鈉處理后對(duì)煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)和促進(jìn)作用伴隨著葉片衰老過(guò)程的加快，煙堿轉(zhuǎn)化達(dá)到最大時(shí)，在葉片外觀上一般表現(xiàn)為完全變黃，并開始變褐。幼株葉片相對(duì)較為柔嫩，因此對(duì)碳酸氫鈉處理更為敏感，最佳的處理濃度為0.8%，濃度過(guò)高時(shí)，葉片壞死斑增多，造成煙堿去甲基活動(dòng)終止，煙堿轉(zhuǎn)化進(jìn)行不完全，煙堿轉(zhuǎn)化率降低（圖6）。圖5碳酸氫鈉不同濃度處理對(duì)成株煙葉煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)效果圖6碳酸氫鈉不同濃度處理對(duì)幼株煙葉煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)效果（四）環(huán)境溫度對(duì)碳酸氫鈉誘導(dǎo)效果的影響碳酸氫鈉處理后煙葉晾制的環(huán)境溫度對(duì)能否取得最佳的煙堿轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)效果至關(guān)重要。煙堿轉(zhuǎn)化是一種酶促反應(yīng)，酶的活性高低受溫度的直接影響。為了探索溫度對(duì)煙堿轉(zhuǎn)化的影響，摘取具有相同葉齡的35片轉(zhuǎn)化株葉片，分成5組，在經(jīng)1%濃度的碳酸氫鈉水溶液處理后，分別在設(shè)置不同溫度的恒溫箱中晾制。結(jié)果表明，在37C環(huán)境中晾制3天，轉(zhuǎn)化株的煙堿轉(zhuǎn)化率達(dá)到了最大值，隨著環(huán)境溫度降低，在晾制后相同時(shí)間內(nèi)煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率降低，達(dá)到相同煙堿轉(zhuǎn)化率所需的晾制時(shí)間延長(zhǎng)(圖7)。在23C條件下，晾制3天后煙葉的煙堿轉(zhuǎn)化率只有32%，晾制9天后，煙堿轉(zhuǎn)化率仍然低于90%。溫度超過(guò)37C同樣對(duì)煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)不利，在40C條件下，死青斑在葉片上出現(xiàn)，在43維持適宜的相對(duì)濕度同樣非常重要，在一定的濕度條件下可避免葉片失水過(guò)快，以保證煙堿去甲基酶保持正?；钚浴８鶕?jù)實(shí)驗(yàn)觀察，為保證煙堿轉(zhuǎn)化充分進(jìn)行，葉片經(jīng)碳酸氫鈉處理后晾制環(huán)境的相對(duì)濕度要保持在75%以上。圖7不同晾制溫度下碳酸氫鈉處理葉片的煙堿轉(zhuǎn)化率（五）無(wú)機(jī)鹽處理對(duì)大田轉(zhuǎn)化株煙堿轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)和鑒別將未經(jīng)純化的白肋煙TN90在大田種植，移栽后1個(gè)月定株100株。其中50株用1.2%碳酸氫鈉處理進(jìn)行轉(zhuǎn)化株早期鑒定，另外50株用1.2%氯化鈉進(jìn)行早期鑒定。結(jié)果分別發(fā)現(xiàn)18株和21株煙葉的煙堿轉(zhuǎn)化率達(dá)到5%以上（圖8和圖9）。在煙葉成熟后，按正常方式進(jìn)行半整株晾制，干葉期對(duì)田間定株的煙株進(jìn)行第二次取樣，測(cè)定煙堿和降煙堿含量，計(jì)算煙堿轉(zhuǎn)化率。結(jié)果表明，在所測(cè)2個(gè)煙株群體中分別有12和16株煙葉的煙堿轉(zhuǎn)化率達(dá)到5%以上。從兩次測(cè)定結(jié)果的比較可以看出，通過(guò)碳酸氫鈉和氯化鈉處理早期鑒定的轉(zhuǎn)化株包括了所有在調(diào)制后自然形成的轉(zhuǎn)化株，而且兩次測(cè)定所得的煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布趨勢(shì)具有較高的一致性，說(shuō)明通過(guò)誘導(dǎo)方法早期鑒定轉(zhuǎn)化株是十分有效的。結(jié)果還表明，早期轉(zhuǎn)化株的誘導(dǎo)后所得到的煙堿轉(zhuǎn)化率一般高于煙葉自然晾制后的煙堿轉(zhuǎn)化率，進(jìn)一步說(shuō)明碳酸氫鉀和氯化鈉處理可以誘導(dǎo)和促進(jìn)具有煙堿去甲基能力煙株的煙堿向降煙堿轉(zhuǎn)化，這對(duì)提高轉(zhuǎn)化株鑒定的準(zhǔn)確性和有效性十分有利。更有意義的是，采用碳酸氫鉀和氯化鈉處理方法進(jìn)行誘導(dǎo)，可以鑒別出一些在正常晾制條件下無(wú)法有效鑒別的低轉(zhuǎn)化株。本試驗(yàn)中，兩個(gè)群體中分別有7個(gè)和5個(gè)低轉(zhuǎn)化株只在早期誘導(dǎo)條件下才被鑒別出來(lái)，因此，通過(guò)碳酸氫鉀和氯化鈉處理可以有效地鑒別低轉(zhuǎn)化株，從而提高鑒定的效果。圖8碳酸氫鉀早期誘導(dǎo)后與調(diào)制后煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率的比較圖9氯化鈉早期誘導(dǎo)后與調(diào)制后煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率的比較碳酸氫鈉可有效誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化株鮮葉煙堿轉(zhuǎn)化，被用來(lái)鑒別早期生長(zhǎng)煙株群體中得轉(zhuǎn)化株和非轉(zhuǎn)化株，從而對(duì)轉(zhuǎn)化株進(jìn)行清除，這在煙草育種或制種過(guò)程中非常重要，因?yàn)檗D(zhuǎn)化株需要在煙株開花前得以確認(rèn)，以避免將轉(zhuǎn)化株留種或作為雜交親本。此外，碳酸氫鈉是環(huán)境友好型的化學(xué)藥劑，并在食品加工和生產(chǎn)中廣發(fā)應(yīng)用，因此具有較高的安全性。碳酸氫鈉誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化株煙堿轉(zhuǎn)化的效果受一些因素的顯著影響，碳酸氫鈉的濃度和處理后的晾制溫度對(duì)于保證轉(zhuǎn)化性狀的充分表達(dá)十分重要，碳酸氫鈉濃度偏低或晾制溫度較低可導(dǎo)致煙堿轉(zhuǎn)化不完全，進(jìn)而降低煙堿轉(zhuǎn)化率，并會(huì)延長(zhǎng)煙堿轉(zhuǎn)化性狀的表達(dá)時(shí)間；碳酸氫鈉濃度過(guò)高或溫度過(guò)高則會(huì)使葉片組織受害，抑制煙堿去甲基酶催化的煙堿轉(zhuǎn)化過(guò)程的進(jìn)行。煙株打頂前不同時(shí)期取樣進(jìn)行煙堿轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)具有相同的效果，但用未充分發(fā)育或成熟度較低的煙葉進(jìn)行處理需要相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間才能達(dá)到最大程度的煙堿轉(zhuǎn)化。四、樣品生物堿測(cè)定和煙堿轉(zhuǎn)化率計(jì)算。由于煙堿轉(zhuǎn)化是煙堿在去甲基酶作用下轉(zhuǎn)化為降煙堿的過(guò)程，可用煙堿轉(zhuǎn)化率確定煙堿轉(zhuǎn)化能力大小，即降煙堿占煙堿和降煙堿總和的百分比。煙堿轉(zhuǎn)化率計(jì)算公式為：煙堿轉(zhuǎn)化率（%）=降煙堿含量/(煙堿含量+降煙堿含量)×100五、確定煙堿轉(zhuǎn)化株的標(biāo)準(zhǔn)研究表明，煙堿轉(zhuǎn)化率2.5%為穩(wěn)定好而可靠的煙堿轉(zhuǎn)化株的下限指標(biāo)，即煙堿轉(zhuǎn)化率大于或等于2.5%的煙株為轉(zhuǎn)化株，煙堿轉(zhuǎn)化株低于2.5%的煙株為非轉(zhuǎn)化株。（一）白肋煙不同程度煙堿轉(zhuǎn)化株后代煙堿轉(zhuǎn)化率株間變異轉(zhuǎn)化株的鑒別標(biāo)準(zhǔn)是決定品種改良和純化的關(guān)鍵，以往曾根據(jù)經(jīng)驗(yàn)將煙堿轉(zhuǎn)化率（降煙堿含量占煙堿和降煙堿含量之和的比例）大于5%定為轉(zhuǎn)化株，后將此標(biāo)準(zhǔn)降低為3%，但一些煙堿轉(zhuǎn)化率低于3%的煙株被證明具有轉(zhuǎn)化株的性狀表現(xiàn)，影響了品種改良的效果。前期研究表明，煙堿轉(zhuǎn)化率高于2.5%作為轉(zhuǎn)化株的鑒別標(biāo)準(zhǔn)具有更大的科學(xué)性，且煙堿轉(zhuǎn)化株低于2.5%的煙株在不同葉位間和葉點(diǎn)間比較穩(wěn)定，而煙堿轉(zhuǎn)化率高于2.5%的煙株表現(xiàn)出葉位間和葉點(diǎn)間的較大變異。為了進(jìn)一步確定新的煙堿轉(zhuǎn)化株鑒別標(biāo)準(zhǔn)的可靠性和有效性，于2009年和2010年采用轉(zhuǎn)化株早期誘導(dǎo)鑒別方法研究了不同程度轉(zhuǎn)化株自交后代株系煙堿轉(zhuǎn)化率的株間變異和分布，由于低轉(zhuǎn)化株煙堿轉(zhuǎn)化基因?yàn)殡s合，后代會(huì)出現(xiàn)株間分離，本研究以期根據(jù)自交后代的分離情況對(duì)轉(zhuǎn)化株和非轉(zhuǎn)化株進(jìn)行科學(xué)判斷，為今后白肋煙親本選擇和品種改良提供依據(jù)。試驗(yàn)于2009年在四川達(dá)州市煙科所大田生長(zhǎng)條件下，材料為達(dá)所26，為白肋煙雜交種達(dá)白1號(hào)和達(dá)白2號(hào)共同的父本，共種植200株，移栽后30天定株編號(hào)，每株取中部1片煙葉進(jìn)行轉(zhuǎn)化株的誘導(dǎo)鑒定，計(jì)算每株的煙堿轉(zhuǎn)化率，選擇具有不同煙堿轉(zhuǎn)化能力的具有代表性的煙株套袋自交，所獲種子于2010年在四川達(dá)州市煙科所按株系進(jìn)行種植，在移栽后30天對(duì)每個(gè)株系不同煙株進(jìn)行煙堿轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)，測(cè)定煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布。在對(duì)達(dá)所26轉(zhuǎn)化株早期鑒定的基礎(chǔ)上，共選擇不同程度煙堿轉(zhuǎn)化能力的煙株分別套袋自交制種，得到18份株系種子于2010年在四川省達(dá)州市煙科所種植，每個(gè)小區(qū)40株，在團(tuán)棵期每個(gè)株系隨機(jī)取20株分別進(jìn)行煙堿轉(zhuǎn)化化學(xué)誘導(dǎo)和生物堿的測(cè)定。母代PNC<2.5煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間變異和分布：母代煙株達(dá)所26-3、達(dá)所26-14、達(dá)所26-84和達(dá)所26-99的煙堿轉(zhuǎn)化率均在2.5%以下，其自交后代群體煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖10。四個(gè)株系煙堿轉(zhuǎn)化率分布較為一致，均不超過(guò)2.0%，變異幅度分別為0.345%~0.918%、0.474%~1.322%、0.344%~1.603%、0.258%~1.967%，變異系數(shù)較小，分別為30.32%、32.07%、35.84%、56.06%，性狀穩(wěn)定，煙堿轉(zhuǎn)化能力較低。圖10母代PNC<2.5煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布母代2.5<PNC<3煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間變異和分布：母代煙株達(dá)所26-30、達(dá)所26-65和達(dá)所26-66煙堿轉(zhuǎn)化率分別為2.964%、2.890%和2.556%，介于2.5%和3%之間，自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的分布如圖11。三個(gè)株系的煙堿轉(zhuǎn)化率變異幅度分別為0.439%~10.331%、0.466%~21.834%和0.394%~3.757%，變異系數(shù)分別為94.59%、185.34%和64.49%。煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離明顯，表明煙堿轉(zhuǎn)化率在2.5%~3%之間的煙株性狀不穩(wěn)定，是轉(zhuǎn)化株的表現(xiàn)，后代群體中可分離出不同程度的煙堿轉(zhuǎn)化株。圖11母代2.5<PNC<3煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布母代3<PNC<20煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間變異和分布：所選擇的7個(gè)自交煙株的煙堿轉(zhuǎn)化率3%和20%之間，其自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖12。煙堿轉(zhuǎn)化率變異范圍很大，分別為0.751%~61.427%、0.423%~16.072%、0.774%~9.419%、0.384%~31.886%、0.205%~21.494%、0.393%~23.514%和0.714%~23.375%，變異系數(shù)分別為161.73%、142.08%、77.54%、106.43%、118.11%、157.99%和94.54%，株間變異較大，表明煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離明顯，群體中出現(xiàn)較高比例的轉(zhuǎn)化株。圖12母代3<PNC<20煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布母代20<PNC<50煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間變異和分布：選擇的達(dá)所26-67和達(dá)所26-109煙堿轉(zhuǎn)化率分別為20.418%和24.352%，在20%~50%范圍內(nèi)。2個(gè)株系自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖13，其煙堿轉(zhuǎn)化率變幅分別為0.738%~30.438%和0.611%~41.813%，變異系數(shù)較大，分別為79.16%和93.84%，株間變異也較大。圖13母代20<PNC<50煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布母代PNC>50煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間變異和分布：達(dá)所26-23和達(dá)所26-104自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布見圖14。其煙堿轉(zhuǎn)化率分布較為整齊一致，煙堿轉(zhuǎn)化率變異幅度分別為50.607%~88.989%和37.916%~68.659%，變異系數(shù)分別為19.05%和14.57%，變異性最小，可以穩(wěn)定遺傳和表達(dá)。圖14母代PNC>50煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布由下表得出，母代PNC<2.5煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率全部小于2.5%，轉(zhuǎn)化程度較低，煙堿轉(zhuǎn)化率較為穩(wěn)定，在減少后代群體煙堿轉(zhuǎn)化能力方面取得了顯著的改良效果，制種過(guò)程中對(duì)其進(jìn)行選擇的壓力較小。母代2.5<PNC<3的達(dá)所26-30、達(dá)所26-65和達(dá)所26-65煙株自交后代分別出現(xiàn)煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離現(xiàn)象。由此可知，如果把轉(zhuǎn)化株的鑒別標(biāo)準(zhǔn)定在2.5%，將有利于提高鑒別的有效性。母代3<PNC<20的7個(gè)煙株自交后代中煙堿轉(zhuǎn)化率在3%~20%區(qū)間的煙株相對(duì)較多。20<PNC<50的親本自交后代中煙堿轉(zhuǎn)化問(wèn)題較突出，煙堿轉(zhuǎn)化率大于3%的煙株占75%以上。母代煙株P(guān)NC>50的達(dá)所26-23自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率大于50%的煙株占100%，達(dá)所26-104的占70%，具有較強(qiáng)的煙堿轉(zhuǎn)化能力。這進(jìn)一步說(shuō)明了嚴(yán)格進(jìn)行親本選擇對(duì)于后代種群純化和改良的重要性。表2自交后代不同株系煙堿轉(zhuǎn)化率分組分析母本自交后代分組株號(hào)煙堿轉(zhuǎn)化率/%PNC<2.5比例/%2.5<PNC<3比例/%3<PNC<20比例/%20<PNC<50比例/%PNC>50比例/%平均煙堿轉(zhuǎn)化率/%PNC<2.5達(dá)所26-31.97810000000.617達(dá)所26-141.69510000000.783達(dá)所26-842.39410000000.941達(dá)所26-991.52510000000.9352.5<PNC<3達(dá)所26-302.964551035002.828達(dá)所26-652.89075020502.528達(dá)所26-662.55690010001.3953<PNC<20達(dá)所26-810.317351545058.427達(dá)所26-163042達(dá)所26-224.16360040003.511達(dá)所26-2913.546405401509.083達(dá)所26-506.741451040505.262達(dá)所26-583.30660530503.249達(dá)所26-855.53830065505.42720<PNC<50達(dá)所26-6720.4182006515011.040達(dá)所26-10924.35215105025012.770PNC>50達(dá)所26-2389.964000010072.223達(dá)所26-10455.685000307053.662本研究從不同煙堿轉(zhuǎn)化程度煙株自交后代的變異性和分離情況進(jìn)一步確定煙堿轉(zhuǎn)化率大于2.5%是確定轉(zhuǎn)化株的有效標(biāo)準(zhǔn)，具有較高的可靠性。本研究中母代PNC<2.5煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率均在2.5%以下，變異系數(shù)較小，性狀穩(wěn)定，是非轉(zhuǎn)化株的表現(xiàn)。在品種改良中，嚴(yán)格選擇PNC<2.5的煙株進(jìn)行留種或配置雜交種可以最大限度地降低大田群體的轉(zhuǎn)化株比例和煙堿轉(zhuǎn)化率。母代2.5<PNC<3的煙株自交后代均出現(xiàn)株間煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離現(xiàn)象，一些煙株煙堿轉(zhuǎn)化率顯著升高，是轉(zhuǎn)化株的表現(xiàn)，因此，如果把轉(zhuǎn)化株的鑒別標(biāo)準(zhǔn)定為3%，這些煙株將被視為非轉(zhuǎn)化株被留種或用于配置雜交種，將顯著降低品種的改良效果。母代3<PNC<50煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率存在較大的變異性，株間變異也較大。母代PNC>50的2個(gè)株系自交后代多為高轉(zhuǎn)化株，具有較強(qiáng)的煙堿轉(zhuǎn)化能力。煙堿轉(zhuǎn)化性狀為顯性基因控制，很容易在群體中積累，在白肋煙育種實(shí)踐中，嚴(yán)格選擇煙堿轉(zhuǎn)化率小于2.5%的煙株進(jìn)行留種或用作雜交親本配置雜交種是必要的。（二）基于不同煙堿轉(zhuǎn)化株鑒別標(biāo)準(zhǔn)的白肋煙品種改良效果白肋煙群體中轉(zhuǎn)化株的比例和轉(zhuǎn)化程度直接影響白肋煙的香味品質(zhì)和安全性。所以從群體中去除轉(zhuǎn)化株是降低煙葉和產(chǎn)品中TSNAs含量及提高和改善煙葉香味品質(zhì)的有效途徑。近期研究表明，煙堿轉(zhuǎn)化率高于2.5%作為轉(zhuǎn)化株的鑒別標(biāo)準(zhǔn)具有更大的科學(xué)性，且煙堿轉(zhuǎn)化率低于2.5%的煙株在不同葉位間和葉點(diǎn)間比較穩(wěn)定，而煙堿轉(zhuǎn)化率高于2.5%的煙株表現(xiàn)出葉位間和葉點(diǎn)間的較大變異，而且自交后代仍會(huì)出現(xiàn)煙堿轉(zhuǎn)化性狀的分離。本研究基于不同的煙堿轉(zhuǎn)化株鑒別標(biāo)準(zhǔn)對(duì)云南白肋煙主栽品種TN86進(jìn)行遺傳改良，旨在明確不同轉(zhuǎn)化株鑒別標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性和對(duì)改善煙葉品質(zhì)和降低TSNA含量的效果，為白肋煙品質(zhì)育種和品種改良提供依據(jù)。1、不同改良種和株系早期誘導(dǎo)后煙堿轉(zhuǎn)化率株間分布：TN86改良種1（PNC<2.5）煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布：TN86改良種1（PNC<2.5）煙株煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖15，其煙堿轉(zhuǎn)化率變異幅度為1.00%-9.43%，變異系數(shù)為49.58%，煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離不明顯，表明煙堿轉(zhuǎn)化率在小于2.5%之間的煙株性狀穩(wěn)定，僅有少量低轉(zhuǎn)化株出現(xiàn)。圖15TN86改良種1（PNC＜2.5）煙株煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布TN86改良種2（PNC<3）煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間變異和分布：TN86改良種2（PNC<3）的煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖16，其煙堿轉(zhuǎn)化率變異幅度為1.52%-16.07%，變異系數(shù)為91.93%，煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離突出，表明煙堿轉(zhuǎn)化率低于3%的煙株群體中存在轉(zhuǎn)化株。圖16TN86改良種2（PNC<3）煙株煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布TN86改良種3（PNC<5）煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布：TN86改良種3（PNC<5）的煙株自交后代中煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖17，其煙堿轉(zhuǎn)化率變異幅度為1.702%-45.931%，變異系數(shù)為128.18%，變異系數(shù)較高，性狀分離明顯，表明群體中含有一定數(shù)量的轉(zhuǎn)化株，后代群體中可分離出不同程度的轉(zhuǎn)化株。圖17TN86改良種（PNC<5）煙株煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布轉(zhuǎn)化株系1（5<PNC<20）煙株煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布：為了驗(yàn)證轉(zhuǎn)化株的分離規(guī)律，研究中選擇了轉(zhuǎn)化株進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。高轉(zhuǎn)化株系1（5<PNC<20）的煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖18，其煙堿轉(zhuǎn)化率變異幅度為1.73%-57.41%，變異系數(shù)為118.88%，煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離相對(duì)明顯，且不同程度轉(zhuǎn)化株呈連續(xù)分布，其中包含一定數(shù)量的高轉(zhuǎn)化株。圖18高轉(zhuǎn)化株系1（5<PNC<20）煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布高轉(zhuǎn)化株系2（PNC>20）煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布：高轉(zhuǎn)化株系2（PNC>20）煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布如圖19，其煙堿轉(zhuǎn)化率變異幅度為3.93%-89.84%，變異系數(shù)為43.92%，變異系數(shù)較低，煙堿轉(zhuǎn)化性狀分離不明顯，表明煙堿轉(zhuǎn)化率在PNC>20之間的煙株性狀較穩(wěn)定，后代煙株均為轉(zhuǎn)化株。圖19高轉(zhuǎn)化株系2（PNC>20）煙株自交后代煙堿轉(zhuǎn)化率的株間分布2、TN86不同改良種和株系轉(zhuǎn)化株和非轉(zhuǎn)化株比例由表3可以得出，TN86改良種1（PNC<2.5)群體中非轉(zhuǎn)化株比例為80%，低轉(zhuǎn)化株比例為20%，沒(méi)有出現(xiàn)高轉(zhuǎn)化株，平均煙堿轉(zhuǎn)化率為2.07%（小于2.5%），說(shuō)明改良種1（PNC<2.5)非轉(zhuǎn)化株比例較高，煙株的性狀穩(wěn)定。TN86改良種2（PNC<3)和TN86改良種3（PNC<5)種植的后代中非轉(zhuǎn)化株比例顯著降低，群體中出現(xiàn)大量低轉(zhuǎn)化株，說(shuō)明這2個(gè)改良種煙堿轉(zhuǎn)化性狀較不穩(wěn)定，后代分離出現(xiàn)轉(zhuǎn)化株的比例較高。高轉(zhuǎn)化株系1（5<PNC<20)非轉(zhuǎn)化株比例占15%，平均煙堿轉(zhuǎn)化率為12.65%。TN86高轉(zhuǎn)化株系2（PNC>20)在種植的后代中全為轉(zhuǎn)化株，且大部分為高轉(zhuǎn)化株，低轉(zhuǎn)化株的比例僅占10%，平均煙堿轉(zhuǎn)化率62.67%。表3白肋煙不同改良種和株系的轉(zhuǎn)化株鑒定結(jié)果分組非轉(zhuǎn)化株比例/%低轉(zhuǎn)化株比例/%中轉(zhuǎn)化株比例/%高轉(zhuǎn)化株比例/%平均煙堿轉(zhuǎn)化率/%TN86改良種1（PNC<2.5)8020002.07TN86改良種2（PNC<3)5545004.52TN86改良種3（PNC<5)25651008.35高轉(zhuǎn)化株系1（5<PNC<20)157510012.65高轉(zhuǎn)化株系2（PNC>20)010157562.673、調(diào)制后不同改良種和株系經(jīng)濟(jì)性狀分析比較表4是TN86不同改良種和株系與TN86常規(guī)種經(jīng)濟(jì)性狀的比較。從表中可以看出改良種1（PNC<2.5)的產(chǎn)量最高。改良種1（PNC<2.5)的產(chǎn)值較高，高轉(zhuǎn)化株系2（PNC>20)的產(chǎn)值最低。TN86不同改良種和株系與TN86常規(guī)種的上等煙比例、中等煙比例以及均價(jià)之間差別較小。不同改良種和株系的中等煙比例表現(xiàn)為差異不顯著。煙葉的產(chǎn)值和產(chǎn)量表現(xiàn)明顯的差異顯著性。從表3中可以看出，TN86改良種1（PNC<2.5)優(yōu)于其他的改良種和株系。表4白肋煙不同改良種和株系與TN86和TN90經(jīng)濟(jì)性狀的比較分析品種/株系產(chǎn)量kg?hm-2產(chǎn)值Yuan?hm-2上等煙比例%中等煙比例%均價(jià)Yuan?kg-1TN86改良種1（PNC<2.5)4750.6560428.2757.5624.8312.72TN86改良種2（PNC<3.0)4568.8457795.7657.4424.6712.65TN86改良種3（PNC<5.0)4540.9857579.5857.4024.6112.68高轉(zhuǎn)化株系1（5<PNC<20)4438.34d51617.88d56.86b24.5111.63高轉(zhuǎn)化株系2（PNC>20)4370.89de50658.6356.79b24.5011.59TN86常規(guī)種(CK)4662.24b58184.76b57.4824.7912.48b注：小寫字母表示在0.05水平上顯著，下同4、調(diào)制后不同改良種和株系的煙堿轉(zhuǎn)化率分布圖20和圖21分別是TN86改良種和株系調(diào)制后上部葉和中部葉混合樣品的煙堿轉(zhuǎn)化率。結(jié)果表明，以PNC<2.5作為轉(zhuǎn)化株的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行品種改良得到的改良種煙堿轉(zhuǎn)化率最低，上部葉比常規(guī)種降低1.36個(gè)百分點(diǎn)，降低37.7%，中部葉比常規(guī)種降低1.37個(gè)百分點(diǎn)，降低38.3%。以PNC<3和PNC<5為轉(zhuǎn)化株標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行品種改良，所得到的的改良種煙堿轉(zhuǎn)化率也較對(duì)照種相應(yīng)降低，但降低的幅度相對(duì)較低。所選擇的高轉(zhuǎn)化株系的調(diào)制后煙葉煙堿轉(zhuǎn)化率處于較高水平，且與轉(zhuǎn)化株系的基礎(chǔ)水平密切相關(guān)。圖20白肋煙改良種和株系調(diào)制后上部葉煙堿轉(zhuǎn)化率比較圖21白肋煙改良種和株系調(diào)制后中部葉煙堿轉(zhuǎn)化率比較5、不同改良種和株系調(diào)制后煙葉TSNAs含量比較對(duì)改良種和高轉(zhuǎn)化株系后代調(diào)制后煙葉進(jìn)行煙草特有亞硝胺含量的測(cè)定，結(jié)果表明，TN86常規(guī)種TSNA總量為3.001μg/g，以NNN含量最高，NAT含量其次（表5）。TN86改良種1（PNC<2.5)的總TSNA含量最低，比常規(guī)種降低17.9%,其次為TN86改良種2（PNC<3.0)?？俆SNA含量的降低主要是由NNN含量的降低引起的，兩個(gè)TN86改良種比常規(guī)