DB37T 2947-2017 鱘魚人工繁殖技術規(guī)程　

DB37DB37/T2947—2017鱘魚人工繁殖技術規(guī)程山東省質(zhì)量技術監(jiān)督局發(fā)布IDB37/T2947—2017本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任。本標準由山東省海洋與漁業(yè)廳提出。本標準由山東省漁業(yè)標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：山東省淡水漁業(yè)研究院、山東省農(nóng)科院信息工程研究所。本標準主要起草人：陳有光、于振海、盧紅、王玉新、王劍非、鄭玉珍、軒子群。1DB37/T2947—20171范圍鱘不適用。件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標準NY5071無公害食品漁用藥物使用準則NY5072無公害食品漁用配合飼料安全限量SC/T1086施氏鱘養(yǎng)殖技術規(guī)程親魚培育池應為流水、微流水池塘。長方形池塘，面積200m2~500m2,池深1.2m~1.5m;或圓于5mg/L。來自于持有國家發(fā)放的良種生產(chǎn)許可證的良種場人工養(yǎng)殖的鱘魚。不得使用近親繁殖的后代2DB37/T2947—2017親魚性別性腺成熟年齡，齡允許繁殖的最小年齡，齡允許繁殖的最小體重，kg雌/早雄/6親魚養(yǎng)殖池水溫到10℃以下、維持1個月以上，然后每天逐步升溫小于3℃,將水溫提升至15℃,親m2水面1尾。;雄親魚放養(yǎng)規(guī)格在5.5kg~12kg,親魚池放養(yǎng)密度為2.5m2~5m24.4.1餌料親魚入池后，即應投飼。每天早、晚各1次，配合飼料的日投飼量為親魚體重的0.5%～1.0%。根3DB37/T2947—2017親魚培育期間應加強管理，做好以下工作：——每天早、晚巡池2次。注意觀察親魚活動情況，做好飼養(yǎng)記錄，發(fā)現(xiàn)問題及時解決。雌魚一般為兩次注射，第一次注射10%的劑量，10h~12h后注射90%的劑量；雄魚一次注射，在雌魚第二次注射前2h～6h注射。注射部位有背鰭基部肌肉注射和胸鰭基部注射兩種方法，背鰭基部注射采用較多。進針深度1.06.1采集時間時間不低于30s,即可開始采集精液。初次采集后每隔2h~3h檢查并采集1次，一般可以采集3次~4所有使用的采集工具均需消毒。將醫(yī)用導管與醫(yī)用注射器前端相連，用干燥毛巾將生殖孔周圍體表擦干；輕壓腹部有少量精液排出時，將導管深入雄魚生殖孔內(nèi)，用注射器抽取精液。宜使用內(nèi)徑3mm、長度5cm的醫(yī)用導管和100mL的醫(yī)用注射器。4DB37/T2947—20176.3精液保存將取出的精液移入干燥燒杯中，封口后放入冰箱0℃~4℃保存。采出后和使用前的精液均用顯微鏡進行精子活力檢測。7魚卵采集7.1魚卵采集時間雌魚催產(chǎn)藥物注射4h后，應每隔1h檢查1次親魚，當接近排卵時，應30min檢查1次。當雌魚出現(xiàn)排卵時，游動活躍，不時撞擊水面，卵巢有流動現(xiàn)象，有卵粒涌出，即可采卵。采卵時間掌握在排卵開始的90min左右，不宜超過150min,否則影響受精率。7.2擠壓法用干燥毛巾擦干生殖孔周圍，擠壓腹部兩側(cè)，將魚卵擠入干燥容器內(nèi)。擠壓法采卵需間隔1h~2h多次采集，直到擠壓腹部無魚卵排出為止。7.3微創(chuàng)手術法7.3.1手術工具消毒所有使用工具均應消毒。7.3.2手術方法使用間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(MS-222)100mg/L或丁香酚50mg/L麻醉雌魚，然后固定在操作臺上，用75%酒精消毒腹部，用手術刀在距生殖孔前方10cm左右的腹部中線一側(cè)切一個3cm~5cm切然后，在開口處向魚體內(nèi)灌入生理鹽水，每次加入500mL～1000mL,擠壓魚體腹部，排出體內(nèi)剩余的游離成熟魚卵，反復2～3次再也擠不出魚卵后，可結(jié)束人工采卵工作。7.3.3切口縫合方法魚卵全部取出后，用聚丙烯絲線縫合切口，手術切口采用交叉針法、8針4結(jié)縫合，并對縫合部位用碘酊和70%乙醇消毒。整個手術用時需控制在50min內(nèi)。術后親魚放入暫養(yǎng)池飼養(yǎng)恢復?；謴推陂g水溫13℃~17℃,溶解氧8mg/L～10mg/L。每日現(xiàn)察魚的活動情況，第3天檢查一次切口愈合情況。7.3.4手術后雌魚護理縫合后給雌親魚注射抗生素藥物，把受傷雌魚放入專門護理水泥池中，每日注射抗生素，劑量為每千克親魚體重50萬單位～80萬單位青霉素，持續(xù)時間為10d左右。親魚手術后15d內(nèi)每天檢查親魚刀口，檢查刀口恢復情況和縫合線是否脫落等。同時投喂適口的人工配合飼料，并注意保障養(yǎng)殖用水的清新。8人工授精8.1精液密度根據(jù)精液濃度及精子活力確定使用精液體積，精子的質(zhì)量體積比為1.13g/mL。5DB37/T2947—20178.2精液用量每千克魚卵使用精液為10mL～20mL。9脫粘使用醫(yī)用滑石粉配成20%～30%的滑石粉懸濁液，將受精卵倒入含有該溶液粘裝置宜攪動40min~60min,輕輕攪動受精卵直至受精卵分散呈顆粒，靜置不結(jié)塊。每千克受精卵使保持水溫15℃~16℃。溶氧不小于6mg/L。避免陽光直射。流水孵化。受精卵孵化6d±1d開始出苗；溫度越低，孵化時間越長。6DB37/T2947—2017孵化期間應有專人值班，觀察檢查孵化設備的運轉(zhuǎn)情況，魚卵的發(fā)育狀況，及時清除死卵、壞卵，防止水霉生成。檢查與清洗濾水設備，保持濾水流暢。做好值班記錄。計數(shù)出膜的魚苗，并將其及時移入魚苗培育池。孵化期間應及時揀出死卵。水霉病的防治見附錄C。在魚卵發(fā)育到原腸中后期時，開始統(tǒng)計受精率。11.1防治原則堅持以預防為主、防治結(jié)合、防重于治的原則。應按NY5071的規(guī)定執(zhí)行，并按《水產(chǎn)養(yǎng)殖質(zhì)量安全管理規(guī)定》做好有關記錄。主要疾病的防治可見附錄C。7(資料性附錄)鱘魚卵極化指數(shù)的計算方法成熟卵細胞呈橢球形、黑灰色。用挖卵器從雌魚體內(nèi)取出卵子，將卵子放入水中煮2min~3min,將魚卵放在通風、陰涼的地方，待表面干燥后，用刀片沿卵的長軸切開，計算極化指數(shù)。極化指數(shù)計算方法見公式(1)。......................................(A.1)式中：PI——極化指數(shù)；I?——魚卵動物極到卵核的最短距離；I?——魚卵動物極到植物極的距離。8DB37/T2947—2017(資料性附錄)B.1第I期卵巢卵巢呈白色半透明窄帶狀，肉眼看不見卵粒，辨認不出卵巢與精巢。切片可見到卵巢中的生殖細胞絲狀均勻分布，又可稱染色質(zhì)核期。細胞核內(nèi)只見核質(zhì)還沒有核仁出現(xiàn)。B.2第Ⅱ期卵巢卵巢乳白色中略見淡淡黃色，肉眼可見半透明狀針眼大的卵粒，低倍光鏡下能見到豐富的脂肪組織包裹著卵巢，卵巢表面分布著大小不同的卵。切片觀察，卵巢組織內(nèi)也有大量的脂肪，占卵巢整體的大部分。卵巢中的生殖細胞是以第Ⅱ期卵巢的初級卵母細胞小生長期的細胞為主，細胞呈多角圓形，初級核仁(7個~26個)靠近核膜內(nèi)側(cè)環(huán)形分布，也可稱為外周核仁期。部分細胞質(zhì)可見到網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。初級卵母細胞外面已有濾泡膜。隨著初級卵母細胞的生長發(fā)育，細胞質(zhì)的嗜堿性減弱，少部分初級卵母細胞很大，卵徑在400μm左右。B.3第Ⅲ期卵巢卵巢有淺灰色和深褐色兩種，表面分布著淺灰色或深褐色卵粒，卵巢組織內(nèi)仍有大量的脂肪。卵巢內(nèi)生殖細胞是以第Ⅲ期進入大生長期的初級卵母細胞為主，可以分為早、中、晚3個相的發(fā)育階段。初級卵母細胞的早期，細胞直徑在200μm~500μm之間，細胞質(zhì)占細胞體積的大部分，嗜堿性減弱，細胞質(zhì)有顆粒物質(zhì)并形成環(huán)層，脂肪滴出現(xiàn)在核的外周。核仁數(shù)量明顯增加(29個~35個),核膜內(nèi)側(cè)環(huán)形排列，與細胞質(zhì)相比核已小得多了。肪滴數(shù)量增加并向細胞質(zhì)外環(huán)移動，卵巢中卵細胞進行有絲分裂，數(shù)量大大增加。晚期，細胞直徑為900μm~1600μm,細胞為橢圓形，隨著卵細胞的生長發(fā)育，核仁數(shù)量迅速增加 (200個~400個),同時卵黃顆粒的數(shù)量也在增加，卵黃顆粒體積加大成為卵黃小體，分布于細胞質(zhì)的大部分區(qū)域，由卵黃顆粒的分布使細胞質(zhì)分成5層，靠近細胞膜和核的2窄層為無卵黃顆粒分布層，靠這2窄層的2層是小顆粒層，中間是大顆粒層，細胞質(zhì)最外層出現(xiàn)色素顆粒。此期細胞核在中央沒有發(fā)生極B.4第IV期卵巢卵巢灰黑色，體積很大，卵巢重是親魚體重的15%～20%。9DB37/T2947—2017卵巢內(nèi)生殖細胞是以第IV期發(fā)育晚期的初級卵母細胞為主，細胞體積增大，長軸直徑為1600μm~3300μm左右。根據(jù)卵母細胞直徑的大小和核偏移的情況，發(fā)育晚期的初級卵母細胞又可劃分為早、中、晚3個發(fā)育階段。早期，卵母細胞長軸為1600μm~2000μm,細胞質(zhì)分5層，卵黃小體聚集成卵黃小板和大的脂肪滴分布在中間層，并偏向長軸的一側(cè)，靠細胞膜的小卵黃顆粒層內(nèi)出現(xiàn)色素顆粒，核位于中心，核膜消失，核仁移向中央，均勻分布并被無卵黃顆粒的細胞質(zhì)環(huán)繞。中期，卵母細胞長軸為2000μm~2600μm,細胞核開始由中央直接呈三角形狀移向動物極，不含卵黃的細胞質(zhì)也隨著卵核向受精孔方向移動，卵母細胞進入成熟期。細胞質(zhì)的5層分布消失，卵黃小板和脂肪滴集中在細胞質(zhì)外周和植物極，卵黃顆粒和脂肪滴充塞了卵母細胞的大部分體積。晚期，卵母細胞長軸為2600μm～3300μm,核仁完全溶解在核漿中，核向動物極的卵膜靠近。卵膜在切片上可見3層結(jié)構(gòu)。卵膜外附著薄膜狀，松散起伏不平的是濾泡膜。卵膜最外層為膠膜或蜂窩膜，中間為卵黃外膜，里側(cè)是卵黃內(nèi)膜。3層膜都有相對應的輻射紋，卵黃內(nèi)膜很薄，與卵黃外膜緊密結(jié)合。3層卵膜中最厚的是膠膜，卵黃外膜較膠膜略薄，卵黃內(nèi)膜最薄。晚期的初級卵母細胞的卵膜，較大生長期的初級卵母細胞的卵膜明顯增厚，約35μm~40μm。根據(jù)細胞核偏移情況將該期卵母細胞分為早、中、晚3個發(fā)育階段。當卵細胞發(fā)育到中期階段時，細胞核向動物極移動，開始極化。到IV期末，核極化到PI值小于0.1左右，可以進行人工催產(chǎn)繁殖。B.5第V期卵巢卵巢松軟，成熟卵細胞從濾泡膜內(nèi)釋放，直接落入腹腔。鱘成熟卵細胞呈橢球形，有長軸和短軸，動物極頂端有一淺色亮點，為極斑，極斑被深淺相間的環(huán)所環(huán)繞，為極環(huán)。卵的極環(huán)到極斑約占卵體的1/3。第V期的卵母細胞，是由初級卵母細胞經(jīng)過第一次成熟分裂成為次級卵母細胞，進而發(fā)育到第二次成熟分裂中期的成熟卵細胞，細胞核呈一團的核質(zhì)狀，卵細胞的原生質(zhì)集中在核周圍，形成胚盤原基，并接近受精孔。細胞膜的輻射紋消失。B.6第VI期卵巢第VI期卵巢的卵已經(jīng)產(chǎn)出，卵巢松弛，充血，呈紅色或紫紅色。未產(chǎn)出的卵會退化凋亡被魚體吸收，卵巢內(nèi)除少量殘留第IV期卵母細胞外，主要為第Ⅱ期的初級卵母細胞、大量的空濾泡和發(fā)達的結(jié)締組織。DB37/T2947—2017(資料性附錄)常見鱘魚病害及防治方法表C.1常見鱘魚病害及防治方法病名病原癥狀防治方法小瓜蟲病小瓜蟲病(Ichthyophth-iriasis)魚體的軀干、頭、鰭、鰓、口腔等處都布滿小白點，同時伴有大量黏液，患病魚體消瘦，行動緩慢，經(jīng)常與池壁或池底摩擦。用顯微鏡可確診。用150mL/L福爾馬林在培育池中處理30min,需連續(xù)處理數(shù)次，每天1次；或全池遍灑亞甲基藍，使池水成2mg/L濃度，連續(xù)數(shù)次，每天1次。車輪蟲病車輪蟲(Trichodinaspp)和小車輪蟲(Trichodincllaspp)屬緣毛目、游動亞目(Moleilina)、壺形科主要寄生在魚苗的體表與鰓上，少量寄生時，無明顯癥狀，嚴重感染時，引起寄生處黏液增多，魚苗游動緩慢，引起魚不安，行為異常。用顯微鏡可確診。用食鹽水進行藥??；或全池遍灑福爾馬林，使池水福爾馬林濃度達到30mL/L,1h后換水。細菌性腸炎腸型點狀產(chǎn)氣單孢桿菌(Enterobacteraerogenes)病魚行動遲緩，不攝食，腹部有時膨大，體色變黑，肛門紅腫、并伴有黃色或淡紅色液體流出，病情嚴重的鰭基充血，剖開魚腹，可見腹腔積水，腸管紅腫充血一般在水質(zhì)惡化、飼料變質(zhì)、或食物攜帶致病菌引發(fā)。預防：保持水質(zhì)清新，投喂飼料質(zhì)量好，沒變質(zhì)。治療：每100kg飼料加大蒜250g拌料，連續(xù)投喂養(yǎng)3d~指環(huán)蟲指環(huán)蟲(Dactylogyrusspp)主要寄生在小體鱘的體表與鰓上，少量寄生時無明顯癥狀，大量寄生時，可引起魚的鰓絲腫脹、充血，鰓上有大量黏液，病魚呼吸困難，游動緩慢而死。鰓上組織損傷，呼吸上皮細胞及黏液細胞增生，分泌物增多，急性型病魚鰓的毛細血管充血，滲出，嗜酸粒細胞和淋巴細胞浸潤嚴重，呼吸上皮細胞腫脹，脫離毛細血管，嚴重時鰓小片壞死，解體一大片；附近的軟骨組織發(fā)生變性。用顯微鏡可