T-CI 307-2024 用于疾病治療的間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量要求

QualityrequirementsofmesenchymalstemcellsfortherapyI 3 4 5 8 8 8 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定公司、山東華奧生物工程有限公司、西安國際醫(yī)學(xué)中以如何馴化賦能出具有針對不同適應(yīng)癥的高效異質(zhì)的MSCs是治療不同疾病間充質(zhì)干細(xì)胞具有發(fā)育程序性衰老的特點，隨著年齡的增長，間充質(zhì)干細(xì)胞再者，MSC易受微環(huán)境的影響，來自患者如自身免疫性疾病和糖尿病的MSCs常表現(xiàn)出較弱的增殖和分化體內(nèi)的免疫細(xì)胞清除，不易出血管、易凋亡1用于疾病治療的間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量要求3.1具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞，在一定條件下可分化成3.23.3在體外特定誘導(dǎo)分化培養(yǎng)條件下，細(xì)胞向多種預(yù)設(shè)目標(biāo)細(xì)胞分化的功3.43.53.6體外培養(yǎng)的MSCs在細(xì)胞形態(tài)、表面標(biāo)志、分化潛能和分泌物等方面表現(xiàn)出不均一的特征。3.73.8對于免疫應(yīng)答的抑制作用，通過抑制與免疫反應(yīng)有關(guān)細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK3.923.10抗炎作用anti-inflammatory3.113.123.133.14在多種因素的作用下，MSC能定向趨向性遷移，越過血管內(nèi)皮細(xì)胞至靶向組織并定植存活的3.15為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的3.163.173.18一個體細(xì)胞中的全部染色體在有絲分裂中期，按其大小、形態(tài)特征(著絲粒的位置）順序排列所構(gòu)3.193.20細(xì)胞接種到免疫缺陷動物體內(nèi)后在注射部位和（或）轉(zhuǎn)移部位由接種細(xì)胞所形成腫瘤的能3.21與用10%FBS培養(yǎng)的第一代MSCs比較，細(xì)胞因子和/或其它相關(guān)分子的表達(dá)量明顯升高，3.22與用10%FBS培養(yǎng)的第一代MSCs比較，細(xì)胞因子和/或其它相關(guān)分子的表達(dá)量明顯降低，3.23無血清和無異種蛋白培養(yǎng)基serum-freeandxeno-f33.24過結(jié)合相應(yīng)受體可調(diào)控免疫應(yīng)答、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長和損傷組織4縮略語AM-MSC：羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（AmnioticMesenchymalStem/Ang-1/II：血管生成素1/2（Angiopoietin-1/II）APLL-37：抗菌肽LL-37（AntibacterialpeptideLL-37）ASK1：凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1（Apoptosissignal-regulBDNF：腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子（Brain-derivedneurotrophicfactor）CD：細(xì)胞膜表面分化抗原簇（ClusterofDifferentiaC/EBPb：普通轉(zhuǎn)錄因子c/ebpb（CCAAT/enhanceCMV：巨細(xì)胞病毒（cytomegalovCNTF：睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因（CiliaryCOX-2：環(huán)氧化酶-2（CyclooxygenCXCR4：CXC化學(xué)受體4（CXCcCXCR7：CXC化學(xué)受體7（CXCcDT-MSCs：用于疾病治療的MSCs（DiseasetreatmentmeseEBV：人類皰疹病毒4型（Epstein-BarrviFBS：胎牛血清（FetalbovineserGDNF：膠質(zhì)來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（Glial-derivedneGSH：谷胱甘肽（antioxidantglutatHIF-1：低氧誘導(dǎo)因子-1（Hypoxia-induciblefactorHIV-I/II：I/II型人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficieHLA-G5：人白細(xì)胞抗原G5（Humanleukocyteantigen-G5）HSP70：熱休克蛋白70（heat-shockproteinHTLV：人類嗜T細(xì)胞病毒（humanT-lymphotropicvirIDO：吲哚胺-2,3-雙加氧酶（IndoleamineIFITM：干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白（InterfeKGF：角質(zhì)細(xì)胞生長因子（KeratinocytegrowthfaKRIT1：Krev/Rap1相互作用陷阱-1（Krev/Rap1interMEF2：肌增強子2（myogenicenhancerfactor2）MFGE-8：乳脂肪球表皮生長因子-8（Milk-fatglobuleepidermalgrowMMP-2：基質(zhì)金屬蛋白酶2（Matrixmetalloproteinase-2）MMP-9：基質(zhì)金屬蛋白酶9（Matrixmetalloproteinase-9）NFE2L2：核因子紅系2相關(guān)因子2（Nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2）4NPB：核質(zhì)橋（NucleoplasmicbridgePTGS2：前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（Prostaglandin-endoperoxidesynthasSA-β-gal：衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（Senescence-assSAHF：衰老相關(guān)的異染色質(zhì)位點（SenescenceassociatedheterochromatiSASP：衰老相關(guān)的分泌型（SenescenceassociatedSOD：超氧化物歧化酶（SuperoxidedisSTC1/II：斯鈣素1/2（StanniocalTGF-β：轉(zhuǎn)化生長因子-β（TransforminggrTIMP-1：基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（Tissueinhibitorofmetalloproteinas平的不同層次。用無血清和無異種蛋白培養(yǎng)基培養(yǎng)的DT-MSCs和其它用途的P1代MSCs相比，在下述生物學(xué)特性方面須等同或優(yōu)于后者。高質(zhì)量的DT-MSCs是確保臨床治療安全和有效的關(guān)鍵所）；5.4細(xì)胞存活率a)細(xì)胞制品制備完成時，細(xì)胞存活率≥99%；b)細(xì)胞制品從制備完成到使用前，2℃~6℃環(huán)境下保存12小時內(nèi)，細(xì)胞存活率≥95%；c)細(xì)胞制品從制備完成到使用前，18℃~25℃環(huán)境下保存4小時內(nèi)，細(xì)胞存活率≥95%；5.6細(xì)胞標(biāo)志物a)通用陽性表面標(biāo)志物群，包括但不限于CD29、CD73、CDb)陰性表面標(biāo)志物群，包括但不限于CD11b、CD14、CD19、CD79a、CD34、CD55.7免疫表型5.8染色體核型與P1代細(xì)胞相比，下述反映衰老的指標(biāo)變化不明顯，最大變化值a)細(xì)胞體積增大、形態(tài)各異、群體倍增時間增加；b)p53、p21和p16基因高表達(dá)；c)小于5%的細(xì)胞具有β-半乳糖苷酶活性或核內(nèi)PrelaminA堆積；f)表達(dá)miR-155-5p、miR-29c-3ph)低表達(dá)與自噬功能相關(guān)的LC3B、ATG12-5、Beclin5.11集落形成5.12遺傳穩(wěn)定性5.12.2培養(yǎng)至20代，在體外長期擴增中不/低表達(dá)腫瘤細(xì)胞相關(guān)的Meflin、TGF--β和B5.13線粒體和活性氧5.13.1線粒體應(yīng)符合2大特征要求，即正常的膜電位（MMP檢測線粒體中m-MPI為紅色熒光）和5.14細(xì)胞株鑒定癥時，要求所用的DT-MSCs與P1代的MSCs相比，應(yīng)6.2分化潛能經(jīng)、肌肉、脂肪、血管和上皮細(xì)胞等前體細(xì)胞，其分化標(biāo)miR-196a-5p和miR-210，或其它特征性基因；6e)如分化為上皮細(xì)胞，應(yīng)能表達(dá)CK-19、CK-5、CCSP-26和SP-C、miR-200或其它特征性基因；f)如分化為內(nèi)皮細(xì)胞，應(yīng)能表達(dá)CD31、VWF、和eNOS、miR-126、miR-342-3p、miR-377或其它特6.4合成和分泌外泌體的能力CD63+、CD81+、CD73+（FACS陽性率≥10-15%)、Alix和TSGCD9+、CD29+、CD44+、CD49e+、CD63+、CD81CD34-、CD45-、CD142-、MHC-I/let7、miR-10b-5p,miR-21、miR-23a-3p、miR-34、miR-221/226.5趨化/歸巢能力PDGF-AB，IGF-1，RANTES，MDC，SDF-6.7抵抗微生物的能力應(yīng)具有高表達(dá)Lipocalin2、IFI6、PMAIP1、ISG15、SAT1、defensins、cystatinC、elafin和6.9抗纖維化能力6.9.1應(yīng)具有HGF、FGF-b、7Gpx、HSP70、STC1、miR-29a-3p、miR-210、miR-27a、miR-6.11.1應(yīng)高表達(dá)PGE2、IDO、KYN、COX-2、IL-10、TGF-β1、NB7-H1、Hmox1、galectin-1、PD-L1、PD-6.11.2應(yīng)能分泌miR-146a-5p、miR-21、miR-34a、miR-16.12血管再生能力6.12.1應(yīng)具有bFGF、HGF、MCP1、PIGF、Ang-1/2、angiostatin、TGF-b2、VEGF-D、GM-CSF、CXCL56.13組織再生和修復(fù)能力a)用于神經(jīng)組織再生和修復(fù)，應(yīng)表達(dá)BDNF、CNTF、VmiR-23a、miR-146a；miR-199a-3p、miR-145-5p、miR-21或其它標(biāo)志性分子；b)用于肺組織再生和修復(fù)，應(yīng)分泌KGF、HGF，EGF、miR-26a、miR-124或其它標(biāo)志性分子；miR-106a、miR-146a、miR-20a、miR-181a、miR-21-5p、miR-156.14抗衰老能力6.14.1應(yīng)能分泌miR-17-5p、miR-21、miR-29a、miR-100-5p、miR-1288.1.1成體間充質(zhì)干細(xì)胞制品外包裝標(biāo)簽應(yīng)當(dāng)包含規(guī)格、細(xì)胞總量、適用范圍、制備日期及時間、有8.1.2異體間充質(zhì)干細(xì)胞除標(biāo)注上述內(nèi)容外，還應(yīng)標(biāo)注細(xì)胞的來源、供體年齡和性別；如果是來源于8.2包裝8.3儲存8.3.2細(xì)胞制品在使用前如需暫時存儲，應(yīng)8.4運輸8.4.2應(yīng)根據(jù)細(xì)胞制品的特性選用不易破損的防震保護(hù)8.4.3應(yīng)采用冷鏈運輸，溫度保持在2℃~6℃。9放行檢測報告9therapy.NatBiomedEng.2019Feb,EmbolizedinLungAreActivatedtoSecretetheAnti-inflammatoryProteinTSG-6.5,54-63immunosuppressivecapacity.ProcNatlAcadSciUSA114,E2598-E2607(2017)migrationintheextrofMigratoryCapacityofMesenchymalStromalCells.EurCellMaterStemCellsTranslationalMedicine5,427-439(2016)StemCellswithTumorNecrosisFactor-AlpVT,ForsythNR,HekeM,NguyenLT.Stemcell-basedtherapyforhumandiseases.SignalTransductTargetTher.2022Aug6;7(1):2Umbilicalcordmesenchymalmcell-basedtherapies?