高二理化生動物細胞工程2

高二生物備課組

2002年１２月３０日，

兩場籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞“新人”—黃花煙草和革新一號煙草葉肉細胞原生質(zhì)體，動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，兩批新人同時在“產(chǎn)房”—電融合儀內(nèi)孕育新生命。一段時間后，我國首批”太空娃娃”終于順利誕生。STS“太空婚禮”項目植物體細胞雜交原理融合前處理促融方法

用途過程第一步第二步第三步第四步細胞膜的流動性、細胞的全能性酶解法去壁物理法化學法原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體的融合與篩選雜種細胞的形成與培養(yǎng)雜種植株的鑒定與篩選克服遠緣雜交不親和獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株AB同核體同核體異核體（雜交細胞）人工誘導AAABBB還有3個3個以上細胞的融合-------AABBBA請同學們閱讀課本P57動物細胞融合內(nèi)容問題：什么是動物細胞融合？它相當于植物體細胞雜交過程的哪一步？它們的過程、基本原理、誘導融合方法和意義是否相同？

鼠B淋巴細胞鼠骨髓瘤細胞人工誘導一、動物細胞融合的概念雜交瘤細胞動物細胞融合（技術）：是指（在一定的條件下）兩個或多個細胞融合形成一個單核細胞的過程。1.動物細胞融合過程、原理與誘導方法為什么滅活的病毒能作誘導劑？滅活喪失感染性保留抗原性質(zhì)1.動物細胞融合過程、原理與誘導方法2.動物細胞融合技術的意義和應用問題：抗體由什么細胞產(chǎn)生？其化學本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點？主要分布在哪里？1抗體一個天然抗原物質(zhì)可有多種和多個決定簇。教材中所說的抗原分子刺激淋巴細胞，說的也就是抗原決定簇刺激B淋巴細胞，使其分裂分化出特異性的效應B細胞，分泌特異性抗體?？贵w的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效應B細胞動物體內(nèi)多種抗體抗原讀下面一段文字資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內(nèi)的B細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。2.單克隆抗體的概念單:單個細胞克隆:無性繁殖單克隆抗體:單個細胞克隆產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一特異性強的抗體提示1：對B細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？提示3：從誘變育種、基因工程、細胞工程等角度有哪些可能的設計思路？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？單克隆抗體的制備

一個效應B細胞只分泌一種特異性抗體

雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術3.方案：動物細胞融合技術單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖的細胞骨髓瘤細胞能無限增殖+實驗目的:制備單克隆抗體.實驗原理：實驗過程：1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗單克隆抗體的制備

看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

4.單克隆抗體制備過程步驟注射抗原效應B細胞骨髓瘤細胞融合多種雜交細胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1抗原-抗體雜交法克隆化單克隆抗體

篩選21.注射抗原的目的是什么？注射抗原效應B細胞骨髓瘤細胞融合多種雜交細胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1抗原-抗體雜交法克隆化單克隆抗體

篩選22.誘導細胞融合的手段有哪些？注射抗原效應B細胞骨髓瘤細胞融合多種雜交細胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1抗原-抗體雜交法克隆化單克隆抗體

篩選23.若細胞兩兩融合后，有幾種融合情況？注射抗原效應B細胞骨髓瘤細胞融合多種雜交細胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1抗原-抗體雜交法克隆化單克隆抗體

篩選24.第一次篩選出的雜交瘤細胞為何需進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測？效應B細胞B淋巴細胞注射抗原骨髓瘤細胞融合B-B細胞雜交瘤細胞瘤-瘤細胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1多種雜交瘤細胞符合要求的雜交瘤細胞抗原-抗體雜交法

篩選2克隆化體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體雜交瘤細胞特點：既可以產(chǎn)生特異性抗體，又可以大量增殖6.單克隆抗體的突出優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、純度高、產(chǎn)量大容易標化生產(chǎn)

克隆單個雜交瘤細胞，可制備抗一種抗原決定簇的特異單克隆抗體。

5.原理：細胞膜的流動性、細胞增殖7：單克隆抗體的應用診斷試劑——最廣泛應用準確、高效、簡易、快速運載藥物

(“生物導彈”—單抗導向，藥物為彈頭)治療疾病比較項目植物體細胞雜交單克隆抗體的制備原理融合前處理促融方法

用途過程第一步第二步第三步第四步細胞膜的流動性、細胞的全能性膜的流動性、細胞增殖酶解法去壁小鼠免疫處理、細胞分散物理法化學法物理、化學、生物法原生質(zhì)體的制備融合親本細胞的準備原生質(zhì)體的融合與篩選動物細胞融合與兩次篩選雜種細胞的形成與培養(yǎng)產(chǎn)特定抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)雜種植株的鑒定單克隆抗體的分離提純單抗有助于疾病的診斷、治療、預防

獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株小結(jié)兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢

下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指