殺蟲劑生物測定技術(shù)

第二章殺蟲劑生物測定技術(shù)

標準試蟲殺蟲劑生物測定方法毒力的表示方法殺螨劑生物測定方法殺蟲劑田間藥效試驗一、標準試蟲標準試蟲是指數(shù)種被普遍采用的具有一定代表性和經(jīng)濟意義及耐藥能力較穩(wěn)定而均勻的昆蟲群體。標準試蟲的大量供應與質(zhì)量均勻是影響生物測定結(jié)果正確、穩(wěn)定與可靠的最基本因子，同時也是保證順利地開展和完成生物測定最基本的條件之一。

（1）粘蟲（LeucaniaseparateWalker），代表鱗翅目咀嚼式口器食葉性害蟲。（可人工飼養(yǎng)）（2）玉米螟（Ostrinianubilalis），代表為害雜糧作物的鉆蛀性害蟲。（可人工飼養(yǎng)）（3）二化螟（Chilosuppressalis）,代表鉆蛀性水稻害蟲。（可人工飼養(yǎng)）常用的供試昆蟲有：（4）還有三化螟、棉鈴蟲、地老虎農(nóng)業(yè)害蟲等。（5）衛(wèi)生害蟲（如蚊、蠅類）（6）倉庫害蟲（米象、赤擬谷盜等）（7）刺吸性害蟲（蚜螨類）（1）在分類上或經(jīng)濟上有一定的代表性的不同種類的昆蟲；（2）對藥物敏感性符合要求；（3）容易飼養(yǎng)，能終年提供試材，使測定工作不受地區(qū)或季節(jié)的限制；（4）在試驗中便于控制操作。供試昆蟲的要求二、殺蟲劑生物測定方法

（1）胃毒作用（2）觸殺作用（3）熏蒸作用（4）內(nèi)吸作用夾毒葉片法液滴飼喂法口腔注射法

胃毒作用（stomachaction）的測定方法

葉片夾毒法適合于植食性、取食量大的咀嚼式口器的昆蟲，如鱗翅目幼蟲、蝗蟲等。其基本原理是用2張葉片，中間均勻地分布一層殺蟲藥劑，飼喂試蟲，按吞食葉片的面積計算吞食藥量。夾毒葉片法（sandwichmethod）

對于舐吸式口器的昆蟲不宜用夾毒葉片法，如家蠅、果蠅、蜜蜂等昆蟲喜歡食糖液，可將一定量的殺蟲劑加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.001~0.01ml），直接飼喂昆蟲。液滴飼喂法（Feedingofmeasureddrops）一般適用個體較大的咀嚼式昆蟲，如家蠶，鱗翅目幼蟲等，處理時，將藥劑溶解后用微量注射器或手細管點滴定量的藥液注入試蟲口器中，昆蟲吞食藥液后，轉(zhuǎn)入放有新鮮飼料的容器中培養(yǎng)觀察。這種方法由于從口腔注入藥液時易刺破口腔內(nèi)軟組織，技術(shù)難以掌握。因此，應用較少?？谇蛔⑸浞?/p>

觸殺作用（contactaction）測定方法點滴法藥膜法或殘膜法浸液法室內(nèi)定量測定觸殺毒力最常用的方法。在測定觸殺毒力時，應盡量避免藥劑從口器或氣孔進入蟲體。直接將藥液點滴到昆蟲的某一部位。多為幼蟲的前胸背板，溶劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁上形成藥膜而侵入體內(nèi)。點滴法

用噴霧法及噴粉法將藥劑定量地分布于一定表面上，如濾紙、玻璃容器內(nèi)壁及植物葉片等而形成一層均勻的藥膜。使昆蟲在藥膜上接觸一定時間（4~24h），檢查擊倒率或死亡率。求出藥劑對試蟲的毒力。藥膜法或殘膜法

對于水生昆蟲（蚊幼蟲、螨類和蚜蟲）將藥劑配成5~7個不同濃度有藥液，摘取有一定數(shù)量蚜蟲的豆苗葉片，在不同藥液中浸3~5s，取出后，用吸水紙吸去多余的藥液，統(tǒng)計葉片上的蚜蟲數(shù)量，對照用清水處理。保濕24h，檢查蚜蟲的死亡數(shù)，計算死亡率及校正死亡率，求出LC50。浸液法

某些藥劑有內(nèi)吸性如許多有機磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑可以通過植株的根、莖、葉等部位吸收到植株的內(nèi)部，隨著植物體液在體內(nèi)的傳導，當害蟲取食或刺吸植物時，藥劑也隨之進入害蟲的體內(nèi)并將其殺死。內(nèi)吸作用（Systemicaction）的試驗方法內(nèi)吸殺蟲劑毒力的測定方法分為直接測定法和間接測定法2種。直接法包括莖或葉的局部涂藥、根際施藥及種子處理等。間接法是用處理后的植物，取其葉片研磨成為水劑，加在水中，測定對水生昆蟲的毒力。

定義殺蟲藥劑以氣體的方式通過害蟲的呼吸系統(tǒng)進入蟲體，而起到毒殺的作用稱熏蒸作用。

目的熏蒸作用毒力的測定的目的主要有2個：一是用鑒別殺蟲劑有無熏蒸作用；二是測定熏蒸劑的殺蟲毒力。

注意要求在一個密閉的條件下進行，且藥劑不與試蟲接觸。熏蒸作用（fumigationaction）測定方法毒力的表示方法及計算致死中量（LD50：Medianlethaldose）或致死中濃度（LC50：Medianlethalconcentration）：藥劑殺死某種生物群體50％所需的劑量（LD50）或濃度（LC50）。結(jié)果檢查與LD50計算胃毒作用觸殺作用

以夾毒葉片法為例

昆蟲取食后放在干凈容器中，加入新鮮的植物葉片，在24~72h后檢查死亡率。由于各昆蟲的取食量不同，因此必須單獨觀察記錄。根據(jù)取食面積、單位面積上的著藥量（μg/g），根據(jù)單位體重受藥量，由小至大順序排列，由于在取食量較小時試蟲無死亡；隨著取食量加大，出現(xiàn)死、活均有出現(xiàn)的劑量范圍；再加大取食量，試蟲全部死亡。這三種表現(xiàn)自然分成三組：（1）生存組（2）生死組（3）死亡組。如實驗中三組數(shù)值均出現(xiàn)，則說明實驗成功，如缺其中一組，應重做。生存組和死亡組是劃分生死組（中間組）界線的。將中間組死蟲的每項單位體重藥量累加，除以總死蟲數(shù)得A；中間組活蟲的每項單位體重相加除以活蟲數(shù)得B。將A＋B除2即得致死中量（μg/g），計算公式為致死中量（LD50）＝（A＋B）/2

供試藥劑設計5~6個濃度梯度，每個濃度為一個處理，每個處理40~60頭，重復4~6次，每個重復10頭。用微量點樣器在供試昆蟲的前胸背板上點一定體積的藥量，24~48h后檢查死亡蟲數(shù)。統(tǒng)計死亡率，計算LD50。觸殺毒力結(jié)果檢查LD50（LC50）的計算死亡率（%）＝死蟲數(shù)/供試蟲數(shù)X100%校正死亡率（%）＝處理組死亡率－對照組死亡度/100－對照組死亡率X100單位體重受藥量（μg/g）＝處理濃度（ppm）X點滴藥量(μl)/試蟲平均體重(g)X100LD50的計算方法作圖法Excel法最小2乘法例：用點滴法測定辛硫磷對玉米螟5齡幼蟲的毒力，試蟲平均體重為0.046g/頭，每頭試蟲點滴0.8μl藥劑丙酮液，48h檢查試蟲死亡率，結(jié)果如表1-1。試計算辛硫磷對玉米螟5齡幼蟲的LD50。用計算器求毒力方程及LD50或LC50打開計算器的開關(guān)，先按MODE

2進入“LR”按INV

AC清除舊存數(shù)字按INV

MR清除貯存數(shù)字將濃度的對數(shù)值作為X輸入到XD,YD，將死亡率查機率值作為Y輸入到RUN順次輸入，輸完后，按Kout3檢查輸入數(shù)字的組數(shù)。按INV7顯示的數(shù)字為a值按INV8顯示的數(shù)字為b值按INV9顯示的數(shù)字為r值已知ab，就可寫出回歸方程y=a+bx求LC50或LD50、LC90、LC95

求LC50

，按5INVYX；再按INVLog，顯示的數(shù)字為LC50求LC90按6.2816INVYX；再按INVLog，顯示的數(shù)字為LC90

LC95

按6.6449INVYX；再按INVLog，顯示的數(shù)字為LC95

（1）死亡率的校正：一般情況，若有對照死亡，需要校正，若對照死亡超過20%，應重做；如對照死亡率小于5%時，也可不必校正。（2）死亡率的范圍：一般，至少有4個濃度處理試蟲的死亡率應在10－90%。這樣計算得到的LD50更可靠。（3）相關(guān)系數(shù)R：一般應在0.9以上。注意事項葉片浸液法玻片浸液法葉片殘毒法

殺螨劑的毒力測定方法1用盆栽豆苗（大豆苗）繁殖葉螨（如棉葉螨），測定時用成螨，且發(fā)育時間（日齡）一致。2將成螨轉(zhuǎn)到無蟲豆苗上，每株40頭左右。葉片浸液法3將待測藥劑（乳油或可濕性粉劑）用水稀釋成系列濃度，每一濃度可配40~50ml，置于小燒杯中。4將接上螨的豆苗浸入藥液6s，取出后用吸水紙吸去多余藥液。處理時先用清水處理對照(CK)，再由低濃度至高濃度處理，每一濃度重復4~5次。5處理后豆苗置于25℃恒溫箱中，保持24h后檢查死亡率。為了防止紅蜘蛛逃逸，可在葉柄基部涂上一圈凡士林。6將藥劑濃度取對數(shù)值，24h校正死亡率（或減退率）取機率值，用統(tǒng)計分析法求出毒力回歸式Y(jié)＝a+bx及LC50值。本法適于測定各種雌成螨，飼養(yǎng)時必須將螨種鑒別、純化，使之為單一種類。以蘋果實生苗飼養(yǎng)山楂紅蜘蛛，以柑桔苗飼養(yǎng)柑桔紅蜘蛛，螨的齡期應一致。浸玻片法

1．將雙面尼龍膠帶剪成2cm長，貼在常用的載玻片的一端。2．用零毫毛筆挑起3～4日齡的雌成螨，將其背部粘在膠帶上，每行10頭，粘2~3行或用毛筆將雌成螨集中在一起。然后將貼在膠帶的玻片的膠面部分輕輕地壓向成螨背部，以粘著為準，再用毛筆將重疊或不規(guī)則的或死亡的挑去，使其成行保留，這樣比較省時也省工。3．用水將藥劑配成系列濃度，置于小燒杯中，用手持紙片無螨的一端，將粘有螨的一端置藥液中浸5秒鐘，取出后用吸水紙吸去多余藥液。對照用清水處理。各處理重復4次。

4．取一白瓷盤，盤底鋪厚2cm的海綿，其上鋪一塊略小一點的藍布，再鋪一層塑料薄膜，然后加蒸餾水至藍布。將粘有螨的玻片平放在盤中，再用紗布罩住，置25℃，相對濕度85％左右溫室中，經(jīng)24h檢查死亡率。用毛筆尖輕輕觸動螨足，以不動者為死亡。求出毒力回歸式及LC50值。編號＿＿＿濃度＿＿＿名稱＿＿＿日期＿＿＿。。。。。。。。。。。。。。。。。。浸玻片法示意圖注：。表示為成螨葉片殘效法此法適用于測定卵、若螨及背部剛毛過長的雌成螨（不易用浸玻片法）。

1在直徑為9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)放入保溫的葉片2在葉片上接20頭雌成雌成螨，讓其在葉片上產(chǎn)卵，24h后移去成螨，保留螨卵。3將待測藥劑用水稀釋成5個系列濃度4將有螨卵的葉片在待測藥液中浸5s，每一藥液濃度重復5次，對照用清水處理。5將培養(yǎng)皿保持在22℃，相對濕度95％恒溫箱內(nèi)，每天觀察記載卵的孵化數(shù)及若螨存活數(shù)，直至對照組全部孵化成若螨。6計算藥劑各濃度的殺卵或殺死若蟲的效果。求出藥劑殺卵或若蟲的毒方程及LC50。殺蟲劑田間藥效試驗

處理組死亡率－對照組死亡率校正死亡率（%）＝1－對照組死亡率X100注意：自然死亡在20％以內(nèi)，可以用上面的公式計算，否則不行；自然死亡在5％以內(nèi)，不必校正死亡率。田間防治試驗中最常用的是蟲口減退率：

Henderson-Tilton（享德森·遞爾頓）公式：

Ta———處理區(qū)防治后存活的個體數(shù)量；Tb————處理區(qū)防治前存活的個體數(shù)量；Ca———對照區(qū)防治后存活的個體數(shù)量；Cb————對照區(qū)防治前存活的個體數(shù)量。一、填空1。胃毒作用的測定方法有夾毒葉片法、液滴飼喂法和口腔注射法

。2。觸殺作用的測定方法有點滴法、藥膜法或殘膜法和浸液法。3。內(nèi)吸殺蟲劑毒力的測定方法分為直接測定法和間接測定法2種。4。殺螨劑的毒力測定方法有葉片浸液法、玻片浸液法和葉片殘毒法。1.供試昆蟲有哪些要求？2.在殺蟲劑的毒力測定實驗中有哪些注意事項？3.依據(jù)的熏蒸作用原理，設計一個對根結(jié)線蟲的方案。二、簡答題4.依據(jù)的內(nèi)吸作用原理，設計一個對蔬菜蚜蟲的毒殺作用方案（用直接法）。三、計算題根據(jù)所給的數(shù)，計算LD50或EC509、春去春又回，新桃換舊符。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節(jié)，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，日子像桃子一樣甜蜜。1月-251月-25Thursday,January30,202510、人的志向通常和他們的能力成正比例。21:49:5021:49:5021:491/30/20259:49:50PM11、夫?qū)W須志也，才須學也，非學無以廣才，非志無以成學。1月-2521:49:5021:49Jan-2530-Jan-2512、越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。21:49:5021:49:5021:49Thursday,January30,202513、志不立，天下無可成之事。1月-251月-2521:49:5021:49:50January30,202514、ThankyouverymuchfortakingmewithyouonthatsplendidoutingtoLondon.ItwasthefirsttimethatIhadseentheToweroranyoftheotherfamoussights.IfI'dgonealone,Icouldn'thaveseennearlyasmuch,becauseIwouldn't