DB11-T 1431-2017 桃樹根癌病綜合防治技術規(guī)程

ICS65.020

B16

備案號：56065-2017DB11

北京市地方標準

DB11/T1431—2017

桃樹根癌病綜合防治技術規(guī)程

Technicalregulationsforcontrolofpeachcrowngall(Agrobacterium

tumefaciens)

2017-06-29發(fā)布2017-10-01實施

北京市質量技術監(jiān)督局發(fā)布

DB11/T1431—2017

桃樹根癌病綜合防治技術規(guī)程

1范圍

本標準規(guī)定了桃樹根癌病病情分級、防治措施和育苗期防治效果調查。

本標準適用于北京地區(qū)桃樹根癌病的防治，櫻桃、櫻花等植物根癌病的防治可參照執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T8321.9農(nóng)藥合理使用準則（九）

NY/T2725氯化苦土壤消毒技術規(guī)程

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

桃樹根癌病peachcrowngall

又稱桃樹冠癭病、桃樹根瘤病，是一種細菌性病害，在根頸和根部產(chǎn)生腫瘤，導致樹勢衰弱，甚至

死亡。

3.2

桃樹根癌病病原菌pathogenicbacteriumofpeachcrowngall

引起桃樹根癌病的病原菌，為根癌土壤桿菌（Agrobacteriumtumefaciens）。

3.3

抗根癌菌劑rootcarcinomabacteriaresistanceagent

對根癌病菌具有良好拮抗作用的微生物制劑。

4病情分級

按腫瘤發(fā)生部位將病情分為5級，分級標準如下：

0級：植株無腫瘤；

1級：腫瘤發(fā)生在須根上；

2級：腫瘤發(fā)生在側根上；

3級：腫瘤發(fā)生在側根與主根的連接處；

4級：腫瘤發(fā)生在主根、根頸或枝干上。

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桃樹根癌病癥狀特征參見附錄A，發(fā)病規(guī)律參見附錄B，檢測方法參見附錄C。

5防治措施

5.1育苗期預防措施

5.1.1苗圃地選擇

選擇非發(fā)病地塊作為育苗地，避免在前茬為豆類、蔬菜以及林地、林業(yè)苗圃等地塊育苗；必要時可

對育苗地進行土壤熏蒸處理,按GB/T8321.9和NY/T2725相關規(guī)定執(zhí)行。

5.1.2砧木種子處理

選擇抗病的適宜砧木種子，播種前，用抗根癌菌劑拌種處理。

5.1.3苗木嫁接

采用高位芽接法嫁接，避免接口與土壤接觸；嫁接前，使用75%酒精對嫁接工具進行消毒處理。

5.1.4苗木出圃

對病情為1級、2級的苗木剪除腫瘤，剪除的腫瘤及時銷毀；對病情為3級、4級的苗木及時銷毀。

5.2苗木選擇與定植

5.2.1對無癥狀苗木及剪除腫瘤的1級、2級苗木進行蘸根處理并及時定植。

5.2.2定植前，將抗根癌菌劑放入陶瓷、塑料等非金屬容器中，加水，按1:1調勻成糊狀，將剪根后的

桃苗浸入菌液中，浸入深度超過根頸上部5cm，即可拿出栽植，隨浸隨栽。

5.3田間管理

5.3.1對于堿性土壤的果園，適當增施酸性肥料、有機肥和果樹專用肥料。

5.3.2減少果園土壤清耕等栽培管理措施以及蠐螬、螻蛄等地下害蟲對根系的傷害。

5.3.3將大水漫灌、串灌改為一樹一畦的單株灌溉或滴灌。

5.4藥劑防治

對已發(fā)病株及時切下腫瘤，用抗根癌菌劑等藥劑涂抹傷口，切下的病瘤隨即銷毀。

6育苗期預防效果調查

苗木出圃時，調查使用抗根癌菌劑和其它處理的苗木發(fā)病等級，計算防治效果。病情指數(shù)與防治效

果分別按式（1）、（2）計算：

[各級病株數(shù)×相對級數(shù)值]

病情指數(shù)=?×100……(1)

調查總株數(shù)×4

對照的病情指數(shù)－處理的病情指數(shù)

防治效果=×100%……(2)

對照的病情指數(shù)

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附錄A

（資料性附錄）

癥狀特征

A.1地下部分癥狀

桃樹根癌病主要發(fā)生在根頸部和根部，包括側根和須根，樹干上偶見。根部被害后通常形成球形、

扁球形或不規(guī)則的腫瘤。初生瘤乳白色或略帶紅色，光滑，柔軟，后逐漸變褐色乃至深褐色，木質化而

堅硬，表面粗糙或凹凸不平，龜裂，表面細胞枯死，內(nèi)部木質化，并在瘤的周圍或表面產(chǎn)生一些細根。

最后外皮脫落，露出許多突起狀小木瘤，瘤的內(nèi)部組織紊亂并混有薄壁組織及維管束，在較大的根瘤上

還會出現(xiàn)許多小瘤。腫瘤的數(shù)目少的1～2個，多的達10余個，直徑差異很大，小如豆粒，大如胡桃和

拳頭，甚至直徑達數(shù)十厘米。

A.2地上部分癥狀

苗木和新植幼齡桃樹受害后，發(fā)育受阻，生長緩慢，植株矮小，嚴重時葉片黃化，早衰。成年果樹

受害后，生長不良，果實小，甚至全株死亡。

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AA

附錄B

（資料性附錄）

發(fā)病規(guī)律

B.1病原菌的越冬

病原菌在癌瘤組織的皮層內(nèi)或在癌瘤破裂脫皮時進入土壤中越冬，細菌在土壤中能存活多年。

B.2病原菌的侵入途徑

病菌通過嫁接、昆蟲或人為因素造成的傷口侵入植株。

B.3病原菌的傳播

雨水和灌溉水是自然傳播的主要方式，苗木帶菌是遠距離傳播的重要途徑。

B.4發(fā)病條件

B.4.1溫度濕度

病菌侵染與發(fā)病需要一定的濕度和溫度，太低太高均不利于病害發(fā)生。當旬氣溫達到20℃～23.5℃，

地溫18℃～20℃以及土壤和水質偏堿時，均有利于該病菌的侵染為害。

B.4.2土壤理化性質

堿性土壤有利于發(fā)病,土壤pH值在6.2～8時均能保持病菌的致病力。偏堿性的土壤和濕度大的沙壤

土內(nèi)發(fā)生重，酸性和粘重的土壤中很少發(fā)病。

B.4.3嫁接方式

嫁接口的部位、接口大小及愈合的快慢均能影響發(fā)病程度。在苗圃中，嫁接口與土壤接觸時間長，

染病機會多，發(fā)病率高。

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附錄C

（資料性附錄）

檢測方法

C.1致病性檢測

C.1.1致病菌分離

取新鮮的冠癭瘤，用2%的次氯酸鈉表面消毒2min，再用70%乙醇表面消毒90s，無菌生理鹽水清洗3～

5遍，用無菌剪刀將冠癭瘤剪切成0.5cm的小塊，加入2～5倍體積的無菌生理鹽水，勻漿后，取上清，涂

板到土壤桿菌選擇性培養(yǎng)基MW培養(yǎng)基上，28℃下培養(yǎng)48h～72h。

MW培養(yǎng)基：每升培養(yǎng)基中含有甘露醇，10.0g；K2HPO4，0.3g；生物素，100μg；NaNO3，5.0g；

NaCl，0.2g；MgSO4﹒7H2O，0.1g；0.1%結晶紫，2.0ml；0.1%Fe-EDTA，2.0ml；瓊脂，15g～20g。

pH，7.0～7.2；121℃高壓滅菌30min。

C.1.2致病性檢測

取分離的單菌落，接種到LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)48h。將待測菌液配制成濃度為108CFU/ml的菌懸液(OD600

為0.6)。用滅菌接種針在生長7d～10d的向日葵莖段上刺數(shù)下造成傷口，吸取5μl～10μl待測菌液滴到

無菌棉球上后放置于傷口上，以封口膜包裹傷口，溫室內(nèi)培養(yǎng)15d后觀察結瘤情況，形成腫瘤的為發(fā)病。

C.2冠癭堿的檢測方法

C.2.1檢測用試劑

電泳檢測緩沖液：按照甲酸:乙酸:水為5:15:80的比例配比。

熒光染液：為菲醌-乙醇溶液，由0.02%菲醌-無水乙醇和10%氫氧化鈉/60%乙醇溶液按照1：1混合。

檢測用標準樣品：胭脂堿、章魚堿標準樣品，精氨酸標準樣品。

C.2.2檢測方法

取植物腫瘤組織1g～2g放入離心管，用解剖針擠壓出汁液，離心，用毛細管取上清，點到濾紙上，

同時點胭脂堿、章魚堿和精氨酸標準樣品。在甲酸:乙酸:水=5:15:80溶液中電泳1.5h，電泳電壓為400V，

烘干濾紙，用菲醌-乙醇染液染色，在紫外燈下觀測熒光斑點，與標準樣品比較，含有胭脂堿或者章魚

堿的為發(fā)病。

C.3核酸檢測

C.3.1選取待檢測的病菌

采用根癌土壤桿菌選擇性培養(yǎng)基分離土壤細菌，選取單菌落利用PCR的方法快速檢測致病性根癌土

壤桿菌。

C.3.2聚合酶鏈式反應（PCR）檢測致病性特異性引物

PCR的引物為iaaHF2（5’ACATGCATGAGTTATCGTTTGGAAT3’）/iaaHR1

（5’GCATCAAGGTCATCGTAAAAGTAGGT3’）；iaaH-F10（5’GGAAACATGCATGAGTTATCGTT3’）/iaaH-R10（5’

CCACATCAGCATCAAGGTCATC3’）。

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C.3.3聚合酶鏈式反應（PCR）檢測致病性反應體系

PCR的反應體系為:

10×Buffer2.5μl

dNTP(10mM)1.0μl

菌液(10ng/ml)1.0μl

iaaHF2(10mM)或iaaH-F100.25μl

iaaHR1(10mM)或iaaH-R100.25μl

TaqDNA酶(5U/ml)0.2μl

ddH2O19.8μl

total25.0μl

C.3.4聚合酶鏈式反應（PCR）檢測致病性反應程序

PCR反應程序如下：

94℃5min

94℃40s

54℃40s35cycles

72℃90s

72℃10min

4℃保存

C.3.5核酸檢測的結果

配制1%濃度的瓊脂糖凝膠，凝膠電泳檢測，iaaHF2/iaaHR1引物能夠擴增，電泳檢測為420bp的

DNA條帶為致病性陽性；iaaH-F10/iaaH-R10引物能夠擴增，電泳檢測為424bp的DNA條帶可以進一步確

定致病性為陽性；兩條特異性引物菌無法擴增出條帶的為致病性陰性。

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參考文獻

[1]GB8370—1987蘋果苗木產(chǎn)地檢疫規(guī)程.

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[4]李健強，王慧敏，張桂火等.一些殺菌劑和抗菌素對根癌菌和根癌抑制菌的作用[J].中國農(nóng)業(yè)

大學學報,1996,(3):74-78.

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