第五章黃酮類化合物講解

第五章黃酮類化合物課前回顧1、黃酮類化合物的定義。2、黃酮中各酚羥基酸性的強(qiáng)弱順序？教學(xué)目的和要求1、掌握黃酮類化合物在堿液中的特征。

2、掌握黃酮類的鹽酸-鎂鹽反應(yīng)，三氯

化鋁反應(yīng)，四氫硼鈉反應(yīng)等的顯色

特征。

3、熟悉黃酮類化合物的提取分離。第三節(jié)檢識方法一、顯色反應(yīng)二、層析檢識一、顯色反應(yīng)

（一）、與酚類試劑的反應(yīng)多數(shù)黃酮類化合物因分子中含有游離酚羥基，與三氯化鐵水溶液或醇溶液可產(chǎn)生正反應(yīng)，呈現(xiàn)顏色；當(dāng)含有氫鍵締合的酚羥基時，顏色更明顯。（二）還原反應(yīng)----鹽酸-鎂粉反應(yīng)

1、含黃酮（醇）、二氫黃酮（醇）（+）橙紅色-紫紅色

2、查耳酮、橙酮、黃烷（醇）類（-）不顯色

3、操作方法：1ml樣品+Mg粉+幾滴濃HCl

（二）還原反應(yīng)----四氫硼鈉（鉀）反應(yīng)：NaBH4是對二氫黃酮類化合物專屬性較高的一種還原劑。與二氫黃酮類化合物產(chǎn)生紅·紫色。其它黃酮類化合物均不顯色。1、三氯化鐵反應(yīng)：

多數(shù)黃酮類化合物因分子中含有游離酚羥基，與三氯化鐵水溶液或醇溶液可產(chǎn)生正反應(yīng)，呈現(xiàn)顏色；當(dāng)含有氫鍵締合的酚羥基時，顏色更明顯。（三）金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)2、鋯鹽：

多用2%二氯氧化鋯（ZrOCl2）甲醇溶液。黃酮類化合物分子中有游離的3-或5-OH存在時，均可反應(yīng)生成黃色的鋯絡(luò)合物。3、醋酸鎂反應(yīng)

二氫黃酮、二氫黃酮醇類與醋酸鎂的甲醇溶液，加熱可顯天藍(lán)色熒光，若具有C5-OH，色澤更為明顯。而黃酮、黃酮醇及異黃酮類等則顯黃~橙黃~褐色。114、堿性試劑的顯色反應(yīng)：堿：氨蒸汽可逆；碳酸鈉水溶液不可逆二氫黃酮類開環(huán)橙色~黃色（一）紙色譜：一般在中性或偏酸性的溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行。1、分離黃酮類：正丁醇-醋酸-水二、層析檢識2、紫外燈下檢視常用的顯色劑：（1）、黃酮類：1%-2%AlCl3乙醇溶液。（2）、香豆素類：異羥肟酸鐵試劑（3）、羥基蒽醌類：0.5%醋酸鎂甲醇，噴后90度加熱5分鐘。（二）薄層色譜法常用硅膠和聚酰胺薄層。1、硅膠薄層：利用硅膠對個植物分類化合物吸附能力的大小，用于分離鑒定弱極性植物酚類。（1）、展開劑的選擇：黃酮類：苯-甲酸-甲酯甲酸（5:4:1）苯-甲醇（95:5），氯仿-甲醇（8.5:1.5）香豆素：甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5:4:1）游離蒽醌：苯-甲醇（90:10）蒽醌類：乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸（100:17:13）（2）植物酚類結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系：1）相同色譜下，酚羥基等極性基團(tuán)越多，極性越大，吸附性越強(qiáng)，Rf值越小。2）酚羥基生成分子內(nèi)氫鍵，被吸附減弱，Rf值相應(yīng)增大。3）二氫黃酮醇較對應(yīng)的黃酮醇Rf值大。2、聚酰胺薄層：黃酮類具有酚羥基，與聚酰胺的酰胺鍵生成氫鍵而被吸附。（1）、展開劑的選擇：分離苷元：氯仿-甲醇（94:6）、苯-甲醇-丁酮（90：6:4）分離苷類：甲醇-乙酸-水（90:5:5）甲醇-水（4:1）、乙醇-水（1:1）（2）黃酮的分子結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系1）:酚羥基越多，被吸附性越強(qiáng)，Rf值越小。2）:鄰二酚羥基比對二酚羥基和間二酚羥基吸附性弱，Rf值比后者大。3）:查爾酮因共軛雙鍵多，Rf值比二氫黃酮小4）:展開劑的極性不同，所對應(yīng)的Rf值也不同。三、紫外光譜檢視：植物酚類結(jié)構(gòu)中有苯環(huán)、羰基等不飽和基團(tuán)，還有羥基，甲氧基等助色團(tuán)，因此在紫外光區(qū)有吸收，表現(xiàn)為特征光譜，由此來確定植物酚類的結(jié)構(gòu)特征。（一）黃酮類化合物的紫外-可見吸收光譜1、操作：首先測定樣品在甲醇溶液中的紫外光譜，其次測定樣品在甲醇溶液中加入各種診斷試劑后得到紫外-可見光譜。2、一般程序：

先測甲醇光譜，再測加各種診斷試劑的光譜，如為苷類，則先水解。

1．在甲醇溶液中的紫外光譜：

（1）基本譜帶：分子中存在桂皮?；捅郊柞；Y(jié)構(gòu)組成交叉共軛體系。

（2）查耳酮及橙酮：帶Ⅰ為主峰，帶Ⅱ吸收。（3）異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇：都有苯甲酰系統(tǒng)，而無桂皮酰系統(tǒng)。紫外吸收峰都是帶Ⅱ為強(qiáng)峰，帶Ⅰ為弱峰。

異黃酮：245～270nm；二氫黃酮及二氫黃酮醇：270～295nm。2、加入診斷試劑后引起紫外吸收峰的位移及在結(jié)構(gòu)測定中的意義：以黃酮和黃酮醇為例（1）甲醇鈉：

強(qiáng)堿性，使所有酚羥基解離，紅移。

（2）醋酸鈉：可使7-或4‘-羥基解離，影響相應(yīng)吸收帶紅移。

（3）醋酸鈉/硼酸：有鄰二酚羥基時（5，6位除外）可引起相應(yīng)吸收帶紅移。

A環(huán)：帶Ⅱ5～

10nm

B環(huán)：帶Ⅰ12～

30nm

(4)三氯化鋁及三氯化鋁/鹽酸：

具有3-羥基，4-羰基或5-羥基，4-羰基及鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)的化合物螯合，引起紅移。第四節(jié)提取分離一、植物酚類化合物的提?。ㄒ唬?、存在形式1、苷：花，果，葉2、苷元：木質(zhì)部（二）、選用溶劑的一般原則：1、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等適用于提取苷及極性較大的苷元。（提前破壞酶）2、氯仿、乙醚、乙酸乙酯等用于提取苷元。（甲氧基苷元可用苯來提?。?、堿性溶劑：可用于提取苷和苷元。4、常用的堿性水溶液：（1）稀氫氧化鈉：浸出能力大，雜質(zhì)較多（2）石灰水：使多羥基鞣質(zhì)，羧基果膠等生成鈣鹽不被溶出，有利于浸出液的純化。(香豆素類應(yīng)注意控制條件）二、提取物的精制：（一）選用不同溶劑：1、低極性溶劑的提取液：可用石油醚處理。（若有油脂，可先脫脂）2、水提取液：可用乙醇，除去蛋白質(zhì)、多糖等。（二）、提取液酸化沉淀法1、酸沉：鹽酸2、注意：酸堿濃度不宜過高，堿性過強(qiáng)，破壞黃酮母核；酸性過強(qiáng)，生成烊鹽，影響產(chǎn)率。（三）、大孔吸附樹脂法將植物的水或烯醇提取液，加入大孔吸附樹脂柱上，依次用水洗去雜質(zhì)，用不同濃度的醇洗下所需的酚類成分，最后用濃醇或丙酮洗脫完全。三、黃酮類化合物的分離：（一）柱色譜法1、硅膠柱色譜法：適于分離異黃酮，二氫黃酮（醇）和高度甲基化或乙?；狞S酮及黃酮醇類。

2、聚酰胺柱色譜：適合于黃酮類化合物的分離。其分離規(guī)律：

（1）與酚羥基的數(shù)目有關(guān)，數(shù)目越多，吸附力越強(qiáng)，在色譜柱上越難被洗脫。（2）與酚羥基的位置有關(guān)，如果酚羥基所處的位置易形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附力減弱。（3）分子內(nèi)芳香化程度越高，共軛雙鍵越多，則吸附力越強(qiáng)。一般來說查耳酮>二氫黃酮，黃酮>二氫黃酮。（4）苷元相同時，以含水移動相洗脫，被吸附的強(qiáng)弱順序為：苷元>單糖苷>雙糖苷>雙糖鍵苷。

（5）不同類型黃酮類化合物，被吸附的強(qiáng)弱順序為：黃酮醇>黃酮>二氫黃酮>異黃酮。（6）、洗脫劑的影響：洗脫能力由弱到強(qiáng)：水<甲醇，乙醇<丙酮<稀氫氧化鈉水溶液<甲酰胺<二甲基甲酰胺<尿素水溶液3、葡聚糖凝膠色譜法（1）、分離苷元時：利用吸附作用，游離酚羥基數(shù)目越多，則吸附力越強(qiáng)，越難洗脫。（2）、分離苷時：主要靠分子篩，洗脫時按苷分子量由大到小的順序依次被洗脫出柱體。

四、槐米中黃酮類化合物1、槐米：豆科槐Sophorajaponica的花蕾。主要成分為黃酮（蘆?。┖?3%。

40

小結(jié)

本節(jié)課講黃酮類的鹽酸-鎂鹽反應(yīng)，三氯化鋁反應(yīng)，四氫硼鈉反應(yīng)等的顯色特征。黃酮類及其苷類不但種類多，而且在植物體內(nèi)存在的部位不同，其結(jié)合狀態(tài)也不同。一般的提取方法雜質(zhì)較多，植物酚類不易析出結(jié)晶，所以尚需進(jìn)一步精制除去雜質(zhì)。測評1、影響聚酰胺吸附力強(qiáng)弱因素與黃酮化合物分子中形成（

）基團(tuán)數(shù)目有關(guān)，形成（

）數(shù)目越（

），則吸附力越（

）。2、芹菜苷屬（