人體發(fā)生發(fā)育學(xué)：發(fā)育生物學(xué)第六講 不孕不育、輔助生殖技術(shù)與克隆技術(shù)

第六講不孕不育、輔助生殖技術(shù)與克隆技術(shù)不孕不育輔助生殖技術(shù)克隆技術(shù)主要內(nèi)容：參考書籍：

《現(xiàn)代輔助生育技術(shù)》（黃荷鳳主編）不孕不育

Infertility

概述：發(fā)生率一般在8%～15%，工業(yè)化程度越高的地區(qū)不孕不育者增加越多。﹡環(huán)境質(zhì)量的惡化﹡感染﹡生殖健康的狀況和觀念﹡社會(huì)、心理因素衛(wèi)生部2013.2.5：全國(guó)不孕癥發(fā)生率約為7%-10%；2011年全國(guó)輔助生殖技術(shù)治療患者約35萬(wàn)。定義：育—生育孕—受孕不孕癥(Infertility)：育齡夫婦婚后同居，性生活正常，未避孕，兩年以上未懷孕者。女方原因引起不孕—女性不孕男方原因引起不孕—男性不育原發(fā)性不孕：婚后2年從未受孕者繼發(fā)性不孕：曾有生育或流產(chǎn)，又連續(xù)2年以上不孕者。

原因

百分比

女方因素40－55％男方因素25－40％男、女雙方因素20％免疫因素、不明原因者10％原因：卵巢排出正常卵子；精液正常并有正常的精子；生殖管道暢通；子宮內(nèi)膜提供適合于受精卵著床的環(huán)境。正常受孕必須具備下列條件：排卵障礙(約占1/3)盆腔因素卵巢本身的因素全身性疾患中樞性影響先天性無(wú)卵巢、多囊卵巢綜合征、高泌乳素血癥、腫瘤等糖尿病、腎上腺功能紊亂等下丘腦-垂體-卵巢軸失調(diào)（如甲狀腺疾病、垂體腫瘤）等原因不明先天性生殖器官畸形，子宮病變，子宮內(nèi)膜異位癥等。輸卵管因素（約占1/3）炎癥，阻塞，粘連，積水等女性不孕的原因男性不育的原因精液異常先天發(fā)育異常如雙側(cè)隱睪，先天睪丸發(fā)育不全癥全身因素長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良，抽煙，酗酒，精神過(guò)度緊張局部因素腮腺炎并發(fā)的睪丸炎，睪丸結(jié)核，精索靜脈曲張，附睪炎，前列腺炎等精子轉(zhuǎn)運(yùn)受阻輸精管道異常如先天性輸精管發(fā)育不全，陰莖及尿道畸形等免疫因素抗精子抗體，射出的精子發(fā)生自身凝集而不能穿透宮頸粘液檢查方法：女性首檢：病史采集全面體格檢查婦科檢查再次檢查：排卵功能監(jiān)測(cè)輸卵管功能檢查盆腔超生檢查男性病史采集體格檢查實(shí)驗(yàn)室檢查：精液常規(guī)檢查精子穿透?jìng)}鼠卵試驗(yàn)（SPA）精子低滲腫脹試驗(yàn)（HOS）1血孕酮（P）的測(cè)定2基礎(chǔ)體溫（BBT）3連續(xù)B超監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育4動(dòng)態(tài)測(cè)定體液中E2水平5LH峰監(jiān)測(cè)6子宮內(nèi)膜活檢1子宮輸卵管通氣術(shù)2輸卵管通液試驗(yàn)3X線下子宮輸卵管造影4子宮輸卵管超聲檢查5輸卵管鏡檢查（輸卵管內(nèi)膜評(píng)分：通暢程度，上皮情況，擴(kuò)張程度，血管情況，粘連程度等）診斷先天性生殖器官畸形、子宮病變（肌瘤、息肉、粘連等）、輸卵管積水、卵巢囊腫、子宮內(nèi)膜異位癥、多囊卵巢綜合征等治療原則：原因排卵障礙輸卵管因素發(fā)育因素免疫因素精子活力不足遺傳疾病外科手術(shù)后不明原因者治療誘發(fā)排卵、促排卵治療藥物、輸卵管整復(fù)術(shù)外科手術(shù)治療免疫抑制劑以上均失敗AssistedReproductiveTechnologies(ART)

輔助生殖技術(shù)輔助生殖技術(shù)

ArtificialReproductionTechnology概述:輔助生殖技術(shù)（ArtificialReproductionTechnology，ART）:是指對(duì)配子、胚胎或者基因物質(zhì)體內(nèi)外系統(tǒng)操作而獲得新生命的技術(shù)。觀察胚胎早期發(fā)育過(guò)程，揭示生殖奧秘?？梢灾委煵辉胁挥Y；輔助生殖技術(shù)的主要方法:

1.人工授精（AI）2.體外受精與胚胎移植（IVF-ET）(試管嬰兒)3.IVF-ET衍生技術(shù)1.人工授精(ArtificialInsemination,AI)⑴定義：

指以非性交方式將精液置于生殖管道內(nèi)(多為女性陰道和宮腔內(nèi))，使精卵結(jié)合達(dá)到妊娠生育的一種輔助生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)。⑵分類：

精液來(lái)源不同：

夫精（AIH）/供精（AID）人工授精

儲(chǔ)存精液時(shí)間長(zhǎng)短：

鮮精/凍精人工授精

授精部位不同：

ICI,IUI,DIPI,TITI等宮腔內(nèi)人工授精（IntrauterineInsemination,IUI）超排卵結(jié)合IUI是目前最常用的人工授精方法。方法：將洗滌處理過(guò)的精子懸液通過(guò)導(dǎo)管直接注入宮腔內(nèi)，注入精子懸液限于0.1～1ml（平均0.5ml）。適應(yīng)癥：廣泛，如少、弱、畸形精子癥，精液不液化癥，免疫性不孕癥，宮頸因素不孕，原因不明不孕癥等。接受人工授精所要具備的基本條件：女方：

⑴輸卵管通暢；

⑵子宮發(fā)育正?；螂m有異常但不影響人工授精的操作和胎兒的孕育；

⑶卵巢功能正常。男方：能在體外收集到精液，并有精子。⑴精液量不少于0.5ml；⑵精子密度≥5×106/ml；⑶活動(dòng)率≥30％步驟：月經(jīng)周期第二(三)天投予誘導(dǎo)排卵藥物超音波掃描卵泡成長(zhǎng),抽血或測(cè)尿中LH，監(jiān)測(cè)排卵時(shí)間注射HCG誘發(fā)特定時(shí)間排卵排卵日丈夫之精液收集送至實(shí)驗(yàn)室篩選，洗滌濃縮利用細(xì)導(dǎo)管將精液經(jīng)陰道、子宮頸注入子宮腔黃體素生成素補(bǔ)充追蹤檢查是否受孕影響人工授精成功率的因素：采用超排卵后人工授精周期妊娠率為5.9％～23.1％；影響因素：

年齡/卵巢年齡/不孕的年限/不孕的原因/精液處理方法。并發(fā)癥：1.出血，腹痛，感染，休克；2.多胎妊娠；3.卵巢過(guò)度刺激征（OHSS）：腹水、惡心、嘔吐、腹瀉、卵巢增大等反應(yīng)；2.體外受精與胚胎移植

（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET，試管嬰兒)1978年7月25日，世界上第一例“試管嬰兒”

—路易斯?布朗在英國(guó)誕生。1988年3月10日，中國(guó)第一例“試管嬰兒”在北京大學(xué)附屬第三醫(yī)院誕生。2006年8月首例試管嬰兒順利生下一男嬰1978年7月25日，愛(ài)德華茲懷抱著剛剛出生的路易斯·布朗。英國(guó)生理學(xué)家“試管嬰兒之父”羅伯特·愛(ài)德華茲獲得2010年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。是用人工方法讓精子和卵子在體外受精并進(jìn)行早期胚胎發(fā)育，然后移植到母體子宮內(nèi)發(fā)育而誕生的嬰兒。試管嬰兒：

1.一般要求年齡≤40歲；2.輸卵管因素、盆腔與腹膜因素、子宮內(nèi)膜異位癥導(dǎo)致不孕的患者；3.排卵障礙；4.男方和（或）女方體內(nèi)存在抗精子抗體；5.精液異常；6.不明原因不孕患者多次IUI失敗。適應(yīng)癥：超促排卵卵泡及排卵監(jiān)測(cè)取卵體外受精體外胚胎培養(yǎng)胚胎移植步驟：取精胚胎移植后激素支持妊娠確定IVF-ET的結(jié)局/影響因素：分娩率：20%-30%結(jié)局：失敗（10-20%）、流產(chǎn)（15-30%）、宮外孕、宮內(nèi)死亡、早產(chǎn)、畸形、多胎妊娠（15-31%）、單胎妊娠（61.8%）。影響因素：年齡、對(duì)超排卵反應(yīng)、卵母細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量、精子的質(zhì)量、ET的數(shù)量及質(zhì)量。試管嬰兒雙/多胞胎

3.IVF-ET衍生技術(shù)“試管嬰兒”的發(fā)展：第一代：即體外授精和胚胎移植第二代：指胞質(zhì)內(nèi)單精子注射(ICSI)第三代：著床前遺傳診斷學(xué)技術(shù)(PGD)第四代：卵胞質(zhì)置換術(shù)各自適應(yīng)癥不同，不能相互代替克隆技術(shù)

Cloning

克隆（clone）：生物體通過(guò)細(xì)胞進(jìn)行的無(wú)性繁殖形成的基因型完全相同的后代個(gè)體組成的種群。

目前把人工遺傳操作動(dòng)物繁殖的過(guò)程稱克隆。

克隆技術(shù)

不經(jīng)過(guò)雌雄兩性生殖細(xì)胞的結(jié)合，只用一個(gè)單一細(xì)胞內(nèi)的反應(yīng)來(lái)生育后代的方式。一、克隆的概念Fertilization

vs.Cloning(somaticcellnucleartransfer)二、克隆簡(jiǎn)介1.微生物克隆2.植物克隆3.動(dòng)物克隆胚胎細(xì)胞克隆體細(xì)胞克隆4.細(xì)胞克隆5.基因克隆三、人體克隆治療性克隆生殖克隆—人工無(wú)性生殖HistoryofSomaticCellNuclearTransfer(Cloning)1952–BriggsandKingclonedtadpoles1984–SteenWilladsenclonedsheepfromembryoniccells1998–Micecloned1998–Cowscloned1996–ThefirstmammalclonedfromadultcellswasDolly,thesheep.2000–PigsclonedHistoryofCloningHistoryofCloning2001–Catcloned2002–Rabbitscloned2003–Mulecloned“CC”CarbonCopy2004–Bullserial-cloned2005–Dogcloned2007.11科學(xué)家首次從成年靈長(zhǎng)類動(dòng)物身上克隆可存活的胚胎,被克隆的是一只10歲的雄性恒河猴。2009.02我國(guó)科學(xué)家獲得人類體細(xì)胞克隆胚胎（山東，李建遠(yuǎn)，遭質(zhì)疑）四、克隆技術(shù)應(yīng)用前景培育優(yōu)良畜種和生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；生產(chǎn)人胚胎干細(xì)胞用于細(xì)胞和組織替代療法；復(fù)制瀕危的動(dòng)物物種。五、克隆技術(shù)的倫理問(wèn)題2003.12中國(guó)《人胚胎干細(xì)胞研究的倫理指導(dǎo)原則》2004.08英國(guó)成為歐洲第一個(gè)允許“治療性克隆”研究的國(guó)家2005.0259屆聯(lián)大法律委員會(huì)以決議形式要求各國(guó)禁止有違人類尊嚴(yán)的任何形式的人體克隆第五條用于研究的人胚胎干細(xì)胞只能通過(guò)下列方式獲得：（一）體外受精時(shí)多余的配子或囊胚；（二）自然或自愿選擇流產(chǎn)的胎兒細(xì)胞；（三）體細(xì)胞核移植技術(shù)所獲得的囊胚和單性分裂囊胚；（四）自愿捐獻(xiàn)的生殖細(xì)胞。第六條進(jìn)行人胚胎干細(xì)胞研究，必須遵守以下行為規(guī)范：（一）利用體外受精、體細(xì)胞核移植、單性復(fù)制技術(shù)或遺傳修飾獲得的囊胚，其體外培養(yǎng)期限自受精或核移植開(kāi)始不得超過(guò)14天。（二）不得將前款中獲得的已用于研究的人囊胚植入人或任何其它動(dòng)物的生殖系統(tǒng)。（三）不得將人的生殖細(xì)胞與其他物種的生殖細(xì)胞結(jié)合。法國(guó)女科學(xué)家布里吉特·布瓦瑟利耶帕諾斯-扎沃斯醫(yī)生2004.5月5日，安蒂諾里在新聞發(fā)布會(huì)上稱已有3名克隆人出世ThankYou！精液分析：精液常規(guī)分析包括:精液量、色、酸堿度及精子形態(tài)、數(shù)目、活動(dòng)力、存活率、精液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測(cè)。精液常規(guī)正常范圍：Volume:

2-6ml，PH：7.5-7.8Totalcount:40×106-200×106Concentration＞20×106/ml，＞50%motile，Normalmorphology＞60%Liquefaction:15-30min.年齡（歲）妊娠率（％）<2618.926～3013.931～3512.436～4011.141～454.7≥450.5與年齡相關(guān)的IUI妊娠率卵胞漿內(nèi)單精子注射適應(yīng)癥：①先天性睪丸發(fā)育不全、睪丸功能損害或排精管阻塞導(dǎo)致嚴(yán)重少精癥，精子活力不足，精子畸形甚至無(wú)精癥。②存在抗精子抗體。③常規(guī)IVF反復(fù)受精失敗。④卵子凍存后受精。⑤不明原因不孕。胚胎活檢留美博士劉家恩

胚胎在植入前采用分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行遺傳學(xué)分析挑選正常胚胎移植。目的：避免將遺傳病傳給下一代。

2004年2月第四代試管嬰兒武漢出生，將是唯一一例。“3P”嬰兒卵胞質(zhì)置換術(shù)(第四代試管嬰兒):卵胞質(zhì)對(duì)卵子質(zhì)量有重要影響將健康卵子胞質(zhì)移植到老化卵子內(nèi)以改善卵子質(zhì)量意義：如提高高齡婦女胚胎存活及試管嬰兒成功率A.人工誘發(fā)超排卵，采集卵細(xì)胞

超排卵（superovulation）是指以藥物的手段在可控制的范圍內(nèi)誘發(fā)多個(gè)卵泡的發(fā)育和成熟。

藥物:

促性腺激素（FSH，LH，HCG）、促性腺激素釋放激素（GnRH）及其類似物、生長(zhǎng)激素（GH）等。常規(guī)使用：GnRH-a-FSH/HMG-HCG長(zhǎng)方案促排卵。

取卵方法:

最常用的是在局部麻醉下，經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)，將取卵針穿過(guò)陰道穹窿直達(dá)卵巢吸取卵子，并立即在顯微鏡下將卵子移到含胚胎培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

在獲得卵子后，從供精者取得精液，室溫20℃，20～30min后精液液化進(jìn)行常規(guī)檢查。然后對(duì)精液進(jìn)行一系列處理：清洗精子