草莓中鞣花酸含量的測定超高效液相色譜質(zhì)譜法

草莓中鞣花酸含量的測定超高效液相色譜-質(zhì)譜法范圍本文件確定了草莓中游離鞣花酸含量的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。本文件適用于草莓鮮果中游離鞣花酸含量的測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理試樣經(jīng)提取后進(jìn)樣，采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分離測定，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。試劑或材料本方法所用的試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。甲醇色譜純。甲酸色譜純。0.1%甲酸水溶液在100mL水加入0.1mL甲酸（5.2），混合均勻。提取液甲醇：0.1%甲酸水溶液（80:20，體積比）：將80mL甲醇（5.1）加入到20mL0.1%甲酸水（5.3）中，混合均勻。標(biāo)準(zhǔn)品鞣花酸（Ellagicacid，CAS號476-66-4，分子式C14H6O8，相對分子質(zhì)量302.28），純度均≥99%。標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000μg/mL）準(zhǔn)確稱取鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品10mg（準(zhǔn)確至0.1mg），于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，現(xiàn)用現(xiàn)配。標(biāo)準(zhǔn)工作液分別吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液（5.6）0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL于10mL容量瓶中，用提取液（5.4）定容至刻度，配制成濃度分別為10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。儀器設(shè)備超高效液相色譜-質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源（ESI）。分析天平：感量0.1mg和0.01g。高速離心機(jī)，轉(zhuǎn)速≥4000r/min。勻漿機(jī)。微孔濾膜：孔徑0.22μm。樣品處理稱取勻漿待測樣品2.00g，置于50mL離心管中。加入50.0mL提取液（5.4），全自動均質(zhì)器提取1min，加入1.5g醋酸鈉和6g無水硫酸鎂，劇烈振蕩2min，混勻后以10000r/min離心3min。取2mL上清液置于裝有150mg無水硫酸鎂、25mgPSA和2.5mgGCB的離心管，渦旋1min，以10000r/min離心3min。取上清液過0.22μm濾膜至樣品瓶，上機(jī)測定。檢測方法色譜條件8.1.1色譜柱：T3柱（100mm×2.1mm×1.8μm），或性能相當(dāng)。8.1.2流動相：A為0.1%甲酸水溶液，B為甲醇，梯度洗脫條件見表1；8.1.3流速：0.2mL/min。8.1.4色譜柱：T3柱（100mm×2.1mm×1.8μm），或性能相當(dāng)。8.1.5柱溫：40℃。表1梯度洗脫條件時間/minA/%B/%09550.259557.8001008.5001008.5195510.00955質(zhì)譜條件8.2.1電噴霧離子源負(fù)離子模式（ESI-）。8.2.2毛細(xì)管電壓：1kV。8.2.3離子源溫度：450℃。8.2.4氣簾氣流量：30L/hr。8.2.5霧化氣流量：900L/Hr。8.2.6掃描方式：MRM，離子對信息見表2。表2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的MRM信息名稱保留時間/min母離子子離子錐孔電壓/V碰撞能/eV鞣花酸6.46301284*182522918251451830校準(zhǔn)曲線的制作將校準(zhǔn)系列工作液按濃度由低到高的順序分別注入超高效液相色譜質(zhì)譜儀，測定相應(yīng)的峰面積，以校準(zhǔn)曲線工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入超高效液相色譜質(zhì)譜儀，以保留時間定性，得到峰面積，根據(jù)校準(zhǔn)曲線得到待測液中鞣花酸的質(zhì)量濃度。定性和定量8.5.1定性8.5.1.1保留時間被測試樣中鞣花酸色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。8.5.1.2在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測定時，如果檢出色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相一致，并且目標(biāo)化合物選擇的子離子均出現(xiàn)，而且同一檢測批次，對同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)化合物。表3定性時離子豐度比的最大允許偏差離子豐度比，%>5020~5010~20≤10允許相對偏差，%±20±25±30±50在上述條件下，鞣花酸質(zhì)譜圖參見附錄A。8.5.2定量外標(biāo)法定量。平行試驗(yàn)按以上步驟對同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測定?？瞻自囼?yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行平行操作。分析結(jié)果的表述試樣中鞣花酸含量按式（1）進(jìn)行計算： X=C×V×1000m×式中：X——樣本中鞣花酸含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C——試樣溶液濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣提取體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g