培養(yǎng)基的配制.ppt

1、1、了解培養(yǎng)基的概念、種類和用途，明確培養(yǎng)基的配制原理。 2、學(xué)習(xí)掌握培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟。 3、掌握高壓蒸汽滅菌的方法步驟。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?培養(yǎng)基的配制,培養(yǎng)基(culture medium)是指人工配制的、適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。 自然界中微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加之實(shí)驗(yàn)和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，不同種類的培養(yǎng)基一般都應(yīng)含有微生物生長所需的碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長因子和水六大營養(yǎng)要素，且各成分比例應(yīng)合適。 為了滿足微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的要求，還必須控制培養(yǎng)基合適的pH。,實(shí)驗(yàn)原理,a,3,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用

2、最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCL提供無機(jī)鹽。 瓊脂在常用濃度下96時(shí)溶化，在40時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。,常用培養(yǎng)基： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng)； 高氏一號(hào)培養(yǎng)基用于培養(yǎng)放線菌； 馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)霉菌。 常用凝固劑是瓊脂，固體培養(yǎng)基瓊脂加量通常為1.5%-2%；半固體培養(yǎng)基瓊脂加量為0.5%-0.8%。,實(shí)驗(yàn)分組安排,4-5人一組 配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 400 mL 馬鈴薯糖瓊

3、脂培養(yǎng)基 200 mL 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基）200 mL 平皿30個(gè) 99 mL無菌水 裝三角瓶 6 瓶 9 mL無菌水 試管裝 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 斜面 5支,a,6,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方：,牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 瓊脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6,a,7,淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基） ：,可溶性淀粉 20 g 硝酸鉀 1 g 磷酸氫二鉀 0.5 g NaCl 0.5 g 硫酸鎂 0.5g 硫酸亞鐵 0.01克 瓊脂 15-20g 水 1000ml pH 7.2-7.4,a,8,馬鈴薯蔗糖瓊脂培

4、養(yǎng)基：,把馬鈴薯洗凈去皮，取200克切成小塊，加水1000毫升，煮沸半小時(shí)后，補(bǔ)足水分。在濾液中加入15克瓊脂，煮沸溶解后加蔗糖20克補(bǔ)足水分 pH值調(diào)到7.27.4,1、稱量及溶化,2、調(diào)pH,3、加瓊脂、溶化、定容、（過濾）,4、分裝、加塞、包扎,5、滅菌,6、擺斜面,操作步驟,稱量與溶化：,注意： 1）牛肉膏的稱?。河貌ＡО粽喝∵m量牛肉膏，抹于稱量紙上，勿取過量，不足時(shí)，再蘸取少量，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落，用玻璃棒將紙撈出即可。,操作步驟 (continued),a,11,稱量與溶化：,注意： 2）蛋白胨很易吸濕，在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。另外

5、，稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品瓶蓋也不要蓋錯(cuò)。,操作步驟 (continued),a,12,調(diào)pH值：,在未調(diào)pH值前，先用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH，直至pH達(dá)要求。反之，用1mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。,操作步驟 (continued),加瓊脂、溶化、定容、（過濾）, 瓊脂一般應(yīng)在調(diào)好了pH后加入，瓊脂的加入不會(huì)影響培養(yǎng)基的pH。 瓊脂加入后應(yīng)煮沸數(shù)分鐘，以使其完全溶化，否則易出現(xiàn)分布不均，導(dǎo)致部分斜面不凝固或過軟，另外部分則瓊

6、脂過多。 加熱過程中因水分蒸發(fā)而可能使培養(yǎng)基體積減小，應(yīng)補(bǔ)充水分至所需量。,操作步驟 (continued),分裝：,1）裝量： 液體試管高度的1/4左右 固體試管高度的1/5 ，滅菌后擺斜面 半固體一般為試管高度的1/3，滅菌后垂直放置,操作步驟 (continued),棉塞制作方法：,加塞： 棉塞 或 硅膠塞 作用：防止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。,包扎：,加塞后，試管通常每7支一起，包上一層牛皮紙或兩層報(bào)紙，用線繩扎緊。三角瓶加塞后也用牛皮紙包扎。 以活結(jié)形式扎緊，以便使用時(shí)容易解開。 用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、配制人或?qū)嶒?yàn)組。,操作步驟 (conti

7、nued),滅菌時(shí)包牛皮紙,滅菌：, 培養(yǎng)基滅菌一般采用壓力蒸汽滅菌 通常滅菌條件為1.05kg/cm2, 121滅菌20分鐘；含糖量高的培養(yǎng)基，則為0.56kg/cm2,115滅菌30分鐘。,操作步驟 (continued),擺斜面：, 成扎擺放，不需將每支試管單獨(dú)擺放 最好待培養(yǎng)基冷至60時(shí)擺斜面，以免形成大量冷凝水,無菌檢查：,將滅菌的培養(yǎng)基放在37溫箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。,二 消毒與滅菌,加熱法,干熱法 濕熱法,火焰燒灼 熱空氣滅菌,壓力蒸汽滅菌 間歇滅菌 煮沸滅菌 巴斯德消毒,實(shí)驗(yàn)原理,1、了解掌握常用消毒、滅菌方法的原理。 2、學(xué)習(xí)掌握干熱滅菌和壓力蒸汽滅菌操

8、作步驟。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?濾膜過濾器的濾膜是一種多孔纖維素，孔徑一般為0.45um，過濾時(shí)，液體和小分子物質(zhì)通過，細(xì)菌被截流在濾膜上。,過濾除菌 許多材料，如血清、糖溶液等，用一般加熱消毒滅菌方法，均會(huì)被熱破壞，應(yīng)采用過濾除菌。 應(yīng)用最廣的過濾器有蔡氏(Seitz)過濾器和膜過濾器。,紫外線滅菌 紫外線波長在200-300 nm,具有殺菌作用，其中以265-266 nm殺菌力最強(qiáng)。 無菌室或無菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。,實(shí)驗(yàn)原理 (continued),干熱滅菌,電烤箱,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟 1、干熱滅菌 2、壓力蒸汽滅菌,干熱滅菌,1、裝入待滅菌物品 2、升溫 接通電源，加熱升溫至160-170。 3、恒溫 保持160-170 2小時(shí)。 4、降溫 切斷電源，自然降溫。 5、開箱取物 待烤箱溫度降到70以下以后，方可打開箱門，取出物品。箱內(nèi)溫度高于70，切勿自行打開箱門，以免玻璃器皿炸裂。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟 (continued),實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟 (continued),壓力蒸汽滅菌,壓力蒸汽滅菌,1、檢查水位，放入物品。