蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢驗(yàn)ppt課件

1、.,1,第三章 蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢驗(yàn),.,2,蛋白質(zhì)是機(jī)體生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，許多疾病均可引發(fā)蛋白質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致血漿蛋白質(zhì)的種類與含量變化，對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析可用于診斷疾病和監(jiān)測(cè)病情。,.,3,第一節(jié) 蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物,人體中蛋白質(zhì)種類約有十萬(wàn)種之多，大部分是細(xì)胞或器官的結(jié)構(gòu)蛋白，少部分是存在于細(xì)胞內(nèi)外液的可溶性蛋白質(zhì)。 可溶性蛋白質(zhì)的功能非常廣泛，在許多疾病狀態(tài)下體液蛋白質(zhì)可出現(xiàn)異常。,.,4,血液的基本組成及有關(guān)概念,一、血漿蛋白質(zhì),.,5,概念,全血：由液態(tài)的血漿和有形的血細(xì)胞組成。 血漿：全血中的液體成分，是含有多種溶質(zhì) 的黃色水溶液。約占全血 容積的50%60% 血清

2、：血液凝固，血塊收縮后析出的淡 黃色清液。,.,6,（二）血漿 1血漿的組成 2血漿中的白蛋白、球蛋白、纖維蛋白、 無(wú)機(jī)鹽的作用 血漿蛋白（白蛋白、球蛋白、纖維蛋白原）： 白蛋白：主要形成血漿膠體滲透壓。 球蛋白：主要參與機(jī)體免疫。 纖維蛋白：主要參與凝血。 小分子晶體物質(zhì)（無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸等） 無(wú)機(jī)鹽：主要形成血漿晶體滲透壓及維持體液酸堿平衡。 葡萄糖、氨基酸等： 供能、營(yíng)養(yǎng)。,.,7,血漿蛋白質(zhì)是血漿固體成分中含量最多、組成復(fù)雜、功能廣泛的一類化合物。,.,8,血漿蛋白質(zhì)功能,1.直接在血液中發(fā)揮作用 在血漿中運(yùn)載弱水溶性物質(zhì) 維持血漿膠體滲透壓 組成血液pH緩沖系統(tǒng) 參與凝血與纖維

3、蛋白溶解 2.需要時(shí)進(jìn)入組織發(fā)揮作用 對(duì)組織蛋白起修補(bǔ)作用 血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用 組成體液免疫防御系統(tǒng) 抑制組織蛋白酶 參與代謝調(diào)控作用的激素,.,9,（二）血漿蛋白質(zhì)的分類,1功能分類法復(fù)雜,運(yùn)輸載體 凝血與纖溶蛋白 免疫球蛋白和補(bǔ)體蛋白 蛋白酶抑制物 蛋白類激素 血酶類,.,10,2. 電泳分類法 醋酸纖維素薄膜電泳一般可將血清蛋白質(zhì)分為白蛋白、1、2、球蛋白5條主要區(qū)帶。,.,11,正常血清蛋白電泳圖譜增示意圖及其掃描曲線,血清蛋白電泳的正常組分,.,12,二、血清總蛋白及主要組分正常與異常電泳,人血漿總蛋白(total protein，TP)濃度為6080g/L 臨床實(shí)驗(yàn)室采用的標(biāo)

4、本多為血清 測(cè)定血清TP的首選方法：雙縮脲法 樣品采集時(shí)，患者應(yīng)置仰臥位，直立時(shí)升高。 靜脈采血時(shí)止血帶壓迫靜脈時(shí)間超過(guò)3min，TP也可上升10%。 劇烈運(yùn)動(dòng)后立即采血TP最多可升高12%。,.,13,（二）異常電泳圖譜的臨床意義,1. 異常血清蛋白電泳圖譜分型 2. 典型異常血清蛋白電泳圖譜 3 漿細(xì)胞病與M蛋白,.,14,異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征,.,15,2典型異常血清蛋白電泳圖譜,A 正常人 B腎病綜合征 C 肝硬化(-橋),D 肝硬化(不典型-橋) E 多發(fā)性骨髓瘤IgA型 F 多發(fā)性骨髓瘤IgG型,.,16,血漿蛋白質(zhì)的性質(zhì)功能及其與電泳區(qū)帶的關(guān)系,.,17,（一）前

5、白蛋白 （prealbumin，PA）,分子量55kD 由肝臟細(xì)胞合成的四亞基蛋白質(zhì) 電泳時(shí)遷移在Alb之前 半壽期2.5d 與視黃醇結(jié)合蛋白組成復(fù)合體 作為組織修補(bǔ)材料和運(yùn)載蛋白,.,18,2. 檢測(cè) 目前多采用免疫透射比濁法3. 臨床意義,（一）前白蛋白 （prealbumin，PA）,作為營(yíng)養(yǎng)不良的指標(biāo),作為肝功能不全的指標(biāo) 負(fù)性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白,PA: 200400mg/L 正常 PA: 100150mg/L 輕度缺乏 PA: 50100mg/L 中度缺乏 PA50mg/L 嚴(yán)重缺乏,.,19,視黃醇結(jié)合蛋白 (retinol-binding protein，RBP ) 肝臟合成，21

6、kD，半壽期12h 攜帶視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)到各種靶組織。 與PA以1:1比例結(jié)合，避免RBP從腎小球?yàn)V過(guò)。 在靶細(xì)胞，TTR-RBP降解后，視黃醇被攝入細(xì)胞。RBP被腎小球?yàn)V出，腎近端小管細(xì)胞吸收并降解。,.,20,【臨床意義】 血漿RBP增高見(jiàn)于腎小球損傷 血漿RBP下降見(jiàn)于： 急性時(shí)相反應(yīng)、肝臟疾病和蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良 尿液RBP排泄量增加可反映腎小管功能損害,.,21,（三）白蛋白 （albumin，Alb）,血漿中含量最多的蛋白質(zhì) 585個(gè)氨基酸殘基組成 分子量66.2kD 含17個(gè)二硫鍵，是不含糖的血漿蛋白質(zhì) 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，每天合成11-14.7g。 半壽期18-20 d,.,22,最重

7、要血漿營(yíng)養(yǎng)蛋白, 最重要血漿載體蛋白 維持血漿膠體滲透壓：血漿滲透壓的75%80%由Alb維持 血漿中主要的載體蛋白，具有結(jié)合各種配體分子的能力 緩沖酸堿維持酸堿平衡作用 高度溶于水，能運(yùn)載許多疏水分子 生理pH中為負(fù)離子，每分子帶200個(gè)負(fù)電荷 運(yùn)輸膽紅素.長(zhǎng)鏈脂肪酸.膽汁酸鹽.前列腺素.類固醇激素, 無(wú)機(jī)離子(如Ca2+、Cu2+、Ni2+).藥物(如阿司匹林、青霉素) 結(jié)合型激素和藥物無(wú)活性，ALB含量或pH變化時(shí)其活性變化,.,23,【檢測(cè)方法】 包括電泳法、免疫化學(xué)法和染料結(jié)合法。 電泳法只能測(cè)其百分含量，乘TP濃度得其濃度 用于ALB定量不方便且精密度不如直接定量 免疫化學(xué)法包括免

8、疫比濁法和放射免疫法等 特異性好、靈敏度高，ALB易純化、抗血清易制備， 適合尿液和腦脊液等低濃度ALB的測(cè)定 血清ALB測(cè)定可采用染料結(jié)合法,.,24,【參考區(qū)間】 隨年齡有所變化，04天：2844 g/L 4天14歲：3854 g/L，此后下降 成人：3552 g/L， 60歲 為3246 g/L 走動(dòng)者 比臥床者平均高3 g/L 【醫(yī)學(xué)決定水平】：35gL時(shí)正常 2834gL為輕度缺乏 2127gL為中度缺乏 21gL則嚴(yán)重缺乏 低于28gL時(shí)，會(huì)出現(xiàn)組織水腫,.,25,臨床意義 （1）血漿Alb增高僅見(jiàn)于嚴(yán)重脫水時(shí),（2）低白蛋白血癥 1）Alb合成降低： 2）Alb丟失 3）Alb分

9、解代謝增加 4）Alb的分布異常 5）無(wú)白蛋白血癥(analbuminaemia) （3）由Alb含量估計(jì)其配體的存在形式和作用（4）作為個(gè)體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的評(píng)價(jià)指標(biāo) （5）Alb的遺傳性變異,.,26,（四）1-抗胰蛋白酶（1-AT或AAT）,394個(gè)氨基酸殘基組成 分子量51.8kD pI為4.8 含糖10%12% 占1區(qū)帶蛋白90% 主要由肝細(xì)胞合成，單核細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞也能合成 蛋白酶的抑制劑,.,27,ATT基因的遺傳表型,常染色體共顯性遺傳，有多種遺傳表型 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少有75種基因變體 主要根據(jù)電泳遷移率分類 最多見(jiàn)的是PiMM型,占人群的90%以上，另外還有兩種蛋白:Z型和

10、S型，,.,28,【臨床意義】 AAT缺陷與肺氣腫 PiZZ型、PiSZ型個(gè)體常出現(xiàn)年青時(shí)肺氣腫 低血漿AAT還可出現(xiàn)在胎兒呼吸窘迫綜合征 AAT缺陷與肝病： 新生兒PiZZ型和PiSZ型與其膽汁淤積、肝硬化和肝細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān) PiZZ表型的某些成人也會(huì)發(fā)生肝損害,.,29,AAT的檢測(cè),血清蛋白電泳 單向擴(kuò)散試驗(yàn) 免疫散濁比濁 免疫透射比濁法。 對(duì)于AAT降低者可進(jìn)一步采用等電聚焦電泳或分子生物學(xué)方法進(jìn)行AAT表型分析。,.,30,（五）1-酸性糖蛋白（AAG）,181個(gè)氨基酸殘基組成 分子量約40kD 屬血漿中含糖量最高（達(dá)45%）、酸性最強(qiáng)的糖蛋白 pI為2.74.0 典型的急性時(shí)相反

11、應(yīng)蛋白 主要在肝臟產(chǎn)生, 某些腫瘤組織也可產(chǎn)生 可以結(jié)合許多藥物和激素,.,31,2臨床意義,目前主要作為急性時(shí)相反應(yīng)指標(biāo)：在風(fēng)濕病、惡性腫瘤及心肌梗死等炎癥或組織壞死時(shí) 48h后濃度迅速增高35天時(shí)出現(xiàn)高峰，一般增加34倍。AAG增高是活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎最可靠的指標(biāo)之一。 AAG增高：糖皮質(zhì)激素增加，包括內(nèi)源性的庫(kù)欣綜合征和外源性強(qiáng)的松、地塞米松等藥物治療時(shí)，可引起AAG升高。 AAG降低：營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損害、腎病綜合征以及胃腸道疾病致蛋白嚴(yán)重丟失等情況下AAG降低。此外雌激素可使AAG降低。,.,32,31-酸性糖蛋白的檢測(cè),過(guò)氯酸和磷鎢酸分級(jí)沉淀AAG后，測(cè)定蛋白質(zhì)或含糖量再計(jì)算之。

12、免疫擴(kuò)散 免疫比濁法,.,33,（五）結(jié)合珠蛋白 （haptoglobin，Hp）,一種急性時(shí)相蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 在電泳中位于2區(qū)帶,1性質(zhì)與遺傳表型,.,34,2功能,運(yùn)輸血管內(nèi)游離的血紅蛋白(Hb)到網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞降解，每分子Hp結(jié)合兩分子Hb, 防止Hb從腎臟丟失而為機(jī)體有效地保留鐵,并能避免Hb對(duì)腎臟的損傷。 Hp-Hb復(fù)合物不可逆，不能被重新被利用，溶血后其含量急劇降低，血漿Hp濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。,.,35,3臨床意義,Hp濃度下降見(jiàn)于： 溶血性疾病如溶血性貧血、輸血反應(yīng)、瘧疾。Hp參考值范圍較寬，須連續(xù)觀察以監(jiān)測(cè)溶血是否處于進(jìn)行狀態(tài)。 對(duì)于溶血性疾病合適的組合檢測(cè)項(xiàng)目包括血漿

13、Hp、LD和游離Hb。血管外溶血不會(huì)使Hp發(fā)生變化。 嚴(yán)重肝病患者，其Hp合成減少。 Hp濃度升高見(jiàn)于： 屬急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，當(dāng)燒傷和腎病綜合征情況下，血Hp常明顯升高。,.,36,4Hp的檢測(cè),放射免疫擴(kuò)散法 免疫比濁法,定量檢測(cè),Hp亞型,聚丙烯酰胺凝膠電泳 等電聚焦電泳,.,37,（六）2-巨球蛋白（2-macroglobulin ，2-MG或AMG）,血漿中分子量最大的糖蛋白，約為720kD，含糖量約8%。 由肝細(xì)胞、單核細(xì)胞和星形細(xì)胞合成 半壽期約5d 包括補(bǔ)體C3和C4在內(nèi)的一組血漿蛋白的主要成員，為硫酯鍵血漿蛋白家族。 主要特性是能與多種離子和分子結(jié)合，特別是能與蛋白水解酶結(jié)合而

14、抑制酶的活性 是主要的蛋白酶抑制劑，可選擇地保護(hù)某些蛋白酶活性,1性質(zhì),.,38,2臨床意義,不屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。 低清蛋白血癥，尤其是腎病綜合征時(shí)，2-MG含量可顯著增高 2-MG水平降低見(jiàn)于：嚴(yán)重的急性胰腺炎和進(jìn)展型前列腺癌治療前,免疫比濁法,32-MG的檢測(cè)方法,.,39,（七）銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin，Cp）,含銅的2球蛋白，肝實(shí)質(zhì)性細(xì)胞合成 由1046個(gè)氨基酸殘基組成 含糖約8%-9.5% 每分子結(jié)合68個(gè)銅原子，由于含銅而呈藍(lán)色 95%的血清銅存在于Cp中，其余5%呈可擴(kuò)散狀態(tài) 血循環(huán)中的Cp可認(rèn)為是銅的無(wú)毒性代謝庫(kù) 具有抑制膜脂質(zhì)氧化作用,1性質(zhì),.,40,（七）

15、銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin，Cp）,血漿銅的轉(zhuǎn)運(yùn) 具有鐵氧化酶作用，將Fe2+氧化為Fe3+，調(diào)節(jié)鐵的運(yùn)輸、利用和氧化還原反應(yīng) 抗氧化作用，抑制膜脂質(zhì)被金屬離子的過(guò)氧化作用,2功能,.,41,Cp濃度減少有關(guān)的疾?。喊╓ilson病、營(yíng)養(yǎng)性銅缺乏和Menkes?。ㄟz傳性銅吸收不良）。 屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白：在妊娠、感染、創(chuàng)傷和腫瘤時(shí)血漿濃度增加。但在營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝病及腎病綜合征時(shí)往往下降。,3臨床意義,.,42,一種常染色體隱性遺傳病 因血漿Cp減少，血漿游離銅增加，銅沉積在肝可引起肝硬化，沉積在腦基底節(jié)的豆?fàn)詈藢?dǎo)致豆?fàn)詈俗冃?，該病又稱為肝豆?fàn)詈俗冃?該病的原因不全是Cp減少 大

16、部分患者可有肝功損害并伴神經(jīng)系統(tǒng)癥狀 不及時(shí)治療，此病是進(jìn)行性和致命的，宜及時(shí)診斷 可用驅(qū)銅的方法進(jìn)行治療 Wilson病診斷標(biāo)準(zhǔn)：Cp下降，血清總銅濃度降低、游離銅增加和尿銅排泄增加,作為Wilson病的輔助診斷指標(biāo),.,43,放射免疫擴(kuò)散法 散射免疫比濁法 透射免疫比濁法,4. Cp的檢測(cè),.,44,（八）轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin，TRF）,分子量約79.6kD 為單鏈糖蛋白，含糖量約6% 電泳位置在區(qū)帶 等電點(diǎn)5.55.9 主要由肝細(xì)胞合成 半壽期為10.5d 能可逆地結(jié)合多價(jià)陽(yáng)離子，每分子TRF可結(jié)合2個(gè)Fe3+ 血漿中TRF的濃度受食物鐵供應(yīng)的影響,1性質(zhì),.,45,從小腸進(jìn)

17、入血液的Fe2+被Cp氧化為Fe3+， 再被TRF的載體蛋白結(jié)合。 每種細(xì)胞表面都有TRF受體，對(duì)TRF-Fe3+ 復(fù)合物比對(duì)TRF的載體蛋白親和力高得多 TRF-Fe3+將大部分Fe3+運(yùn)輸?shù)焦撬韬铣蒆b 小部分則運(yùn)輸?shù)礁鹘M織細(xì)胞，形成鐵蛋白 及合成肌紅蛋白、細(xì)胞色素等,.,46,2臨床意義,貧血的鑒別診斷和鐵缺乏的治療監(jiān)測(cè)： 缺鐵性低血色素貧血時(shí)，TRF代償性合成增加； 血漿鐵低，結(jié)合到TRF的鐵少，鐵飽和度下降 （正常參考值為3038） 再生障礙性貧血，血漿TRF正?；虻拖?紅細(xì)胞對(duì)鐵的利用障礙，使鐵飽和度增高,.,47,3檢測(cè),多采用免疫比濁測(cè)定法,總鐵結(jié)合力(total iron b

18、inding capacity,TIBC) 血漿蛋白質(zhì)對(duì)鐵的結(jié)合容量(主要是TRF對(duì)鐵結(jié) 合容量)，單位與血清鐵相同。 鐵飽和度（）血清鐵/TIBC 兩者尤其是后者對(duì)貧血診斷和鑒別診斷更好,.,48,（十） 微球蛋白（ 2 microglobulin,2 M,BMG, 位于 2區(qū)帶，單鏈多肽 存在于各種有核細(xì)胞表面，僅11.8kD 是HLA的輕鏈或鏈，可從細(xì)胞表面尤其是淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表面脫落到血漿中 從腎小球?yàn)V過(guò)，再被腎近端小管重吸收和分解,.,49,【臨床意義】 血漿BMG增高： 見(jiàn)于腎衰竭、炎癥、腫瘤 尤其是與B淋巴細(xì)胞相關(guān)的腫瘤 尿液BMG排泄量增加： 可反映腎小管功能損害,.,50

19、,由肝細(xì)胞合成的典型急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 由5個(gè)相同亞基非共價(jià)結(jié)合成盤(pán)形多聚體 分子量為115kD 電泳分布在區(qū)帶，有時(shí)可延伸到 區(qū)帶 在鈣離子存在下，結(jié)合多種細(xì)菌、真菌及原蟲(chóng)等體內(nèi)的多糖物質(zhì)以及磷酸膽堿，卵磷脂和核酸 在鈣離子缺乏情況下，結(jié)合多聚陽(yáng)離子 與抗體相似，可引發(fā)對(duì)入侵微生物對(duì)細(xì)胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用 可識(shí)別、結(jié)合從損傷組織中釋放的毒性物質(zhì)，然后解毒或從血中清除 本身在發(fā)生調(diào)理作用后被分解,（九）C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP),1性質(zhì),.,51,第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，是急性時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)極靈敏指標(biāo)，以健康人群CRP的95%參考上限判斷患者有無(wú)明

20、顯的感染性炎癥 血漿中CRP濃度在急性心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、炎癥、外科手術(shù)、腫瘤浸潤(rùn)等發(fā)病時(shí)迅速增高，心肌梗死后6-12h即升高，可達(dá)正常值2000倍。 5mg/L作為明顯的炎癥信號(hào) 15mg/L為慢性低程度的炎癥或急性時(shí)相反應(yīng)始,2臨床意義,.,52,CRP是非特異性指標(biāo)，主要用于結(jié)合臨床監(jiān)測(cè)疾?。?篩查微生物感染 評(píng)估炎癥性疾病的活動(dòng)度和療效監(jiān)控 識(shí)別系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病和外科手術(shù)后等并發(fā)的感染 新生兒敗血癥和腦膜炎 監(jiān)測(cè)腎移植后的排斥反應(yīng)等,.,53,做為心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子 為血漿CRP低濃度增高，須用更靈敏測(cè)定方法 大多健康成年人3.0mg/L 為高度危險(xiǎn)性。,.,54,血清CRP水平與冠心病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有直接聯(lián)系。 CRP濃度的上升，可使急性心肌梗塞()后患者或不穩(wěn)定性心絞痛