核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)及工作流

1、核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)及工作流程,李金明 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心,核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì),依據(jù)：衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號(hào)）,血液標(biāo)本的接收,通常的工作流程：標(biāo)本采集 血清分離 編號(hào) 保存或檢測(cè) 應(yīng)在四個(gè)測(cè)定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接收 接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中 在核酸提取時(shí)帶入至標(biāo)本制備區(qū),標(biāo)本的接收區(qū)的儀器設(shè)備要求,如果在標(biāo)本接收區(qū)分離血清（漿）標(biāo)本，有1臺(tái)分離血清（漿）用離心機(jī)、1臺(tái)生物安全柜、1臺(tái)冰箱、加樣器及相應(yīng)一次性經(jīng)高壓處理的消耗品如帶濾芯吸頭、標(biāo)本接收編號(hào)記錄本以及記號(hào)筆等即可。 如果不在標(biāo)本接收區(qū)分離血清（漿）標(biāo)本，只是簡(jiǎn)單的接收，則

2、就不需要分離血清（漿）用離心機(jī)、生物安全柜、加樣器及其消耗品。,理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)A,理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)B,核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則,各區(qū)獨(dú)立 注意風(fēng)向 因地制宜 方便工作,“十六字口訣”,A,B,傳遞窗,傳遞窗,傳遞窗,關(guān)于“區(qū)域”合并,如使用擴(kuò)增和產(chǎn)物分析同時(shí)完成的實(shí)時(shí)熒光PCR儀進(jìn)行核酸擴(kuò)增檢測(cè)，擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可以合并。 如使用核酸提取、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析等均在一臺(tái)儀器上完成的全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析儀，標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可合并。,無“基因”或“核酸”概念的重要性,符合基本要求的核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的條件,（1）試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)和擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等三個(gè)或四個(gè)

3、區(qū)域在物理空間上，必須是完全相互獨(dú)立的，各區(qū)域無論是在空間還是在使用中，應(yīng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。 （2）各區(qū)的可移動(dòng)的儀器設(shè)備及各種物品包括實(shí)驗(yàn)記錄本、記號(hào)筆、試管架及清潔用具等必須專用。 （3）應(yīng)在標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等相對(duì)有可能出現(xiàn)“污染物”的區(qū)域安裝排風(fēng)扇或其它排風(fēng)和有效的裝置，以使空氣按試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動(dòng)。,核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的工作流程,試劑準(zhǔn)備區(qū),標(biāo)本制備區(qū),擴(kuò)增區(qū)及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),試劑準(zhǔn)備區(qū),核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室中最為“潔凈”的區(qū)域，不應(yīng)有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標(biāo)準(zhǔn)品和陽性對(duì)照。 所有實(shí)驗(yàn)用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放

4、和準(zhǔn)備處。 商品試劑盒： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）處理水、有機(jī)溶劑等可能需要自配 自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測(cè)時(shí)，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。 儀器設(shè)備主要有加樣器、天平、離心機(jī)和冰箱等，最好配備超凈工作臺(tái)。,標(biāo)本制備區(qū),儀器設(shè)備主要有混樣設(shè)備、核酸提取儀、生物安全柜、加樣器、高速臺(tái)式（冷凍）離心機(jī)、加熱模塊或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室門口等易受人員走動(dòng)影響的地方，也不應(yīng)直對(duì)分體式空調(diào)。 主要是用于血液樣本的混樣、核酸樣本的提取。 加樣器吸頭必須帶濾芯。 使用加熱模塊時(shí)，如在模塊孔中填入二氧化硅細(xì)砂，然后將標(biāo)本管置于細(xì)砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。,擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū),擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和提取核酸的加入，可在標(biāo)本制備區(qū)也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行，關(guān)鍵是要防止產(chǎn)物的污染。如果空間允許的話，也可在一個(gè)獨(dú)立的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。 加樣時(shí)，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個(gè)即蓋好蓋子，然后加陽性質(zhì)控核酸模板，再就是標(biāo)本制備陰性質(zhì)控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應(yīng)混合液的擴(kuò)增陰性質(zhì)控，這樣做的目的是，最大可能地測(cè)出以前擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。,擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū),熱循環(huán)