核酸擴增檢測實驗室設(shè)計及工作流

1、核酸擴增檢測實驗室設(shè)計及工作流程,李金明 衛(wèi)生部臨床檢驗中心,核酸擴增檢測實驗室的設(shè)計,依據(jù)：衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號）,血液標本的接收,通常的工作流程：標本采集 血清分離 編號 保存或檢測 應(yīng)在四個測定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接收 接收的標本應(yīng)收集在原始容器中 在核酸提取時帶入至標本制備區(qū),標本的接收區(qū)的儀器設(shè)備要求,如果在標本接收區(qū)分離血清（漿）標本，有1臺分離血清（漿）用離心機、1臺生物安全柜、1臺冰箱、加樣器及相應(yīng)一次性經(jīng)高壓處理的消耗品如帶濾芯吸頭、標本接收編號記錄本以及記號筆等即可。 如果不在標本接收區(qū)分離血清（漿）標本，只是簡單的接收，則

2、就不需要分離血清（漿）用離心機、生物安全柜、加樣器及其消耗品。,理想的核酸擴增實驗室設(shè)計A,理想的核酸擴增實驗室設(shè)計B,核酸擴增檢測實驗室設(shè)計的一般原則,各區(qū)獨立 注意風向 因地制宜 方便工作,“十六字口訣”,A,B,傳遞窗,傳遞窗,傳遞窗,關(guān)于“區(qū)域”合并,如使用擴增和產(chǎn)物分析同時完成的實時熒光PCR儀進行核酸擴增檢測，擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可以合并。 如使用核酸提取、擴增及產(chǎn)物分析等均在一臺儀器上完成的全自動核酸檢測分析儀，標本制備區(qū)、擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可合并。,無“基因”或“核酸”概念的重要性,符合基本要求的核酸擴增檢測實驗室的條件,（1）試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)和擴增及產(chǎn)物分析區(qū)等三個或四個

3、區(qū)域在物理空間上，必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論是在空間還是在使用中，應(yīng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。 （2）各區(qū)的可移動的儀器設(shè)備及各種物品包括實驗記錄本、記號筆、試管架及清潔用具等必須專用。 （3）應(yīng)在標本制備區(qū)、擴增及產(chǎn)物分析區(qū)等相對有可能出現(xiàn)“污染物”的區(qū)域安裝排風扇或其它排風和有效的裝置，以使空氣按試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動。,核酸擴增實驗室的工作流程,試劑準備區(qū),標本制備區(qū),擴增區(qū)及擴增產(chǎn)物分析區(qū),試劑準備區(qū),核酸擴增實驗室中最為“潔凈”的區(qū)域，不應(yīng)有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標準品和陽性對照。 所有實驗用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放

4、和準備處。 商品試劑盒： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）處理水、有機溶劑等可能需要自配 自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測時，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。 儀器設(shè)備主要有加樣器、天平、離心機和冰箱等，最好配備超凈工作臺。,標本制備區(qū),儀器設(shè)備主要有混樣設(shè)備、核酸提取儀、生物安全柜、加樣器、高速臺式（冷凍）離心機、加熱模塊或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不應(yīng)放在實驗室門口等易受人員走動影響的地方，也不應(yīng)直對分體式空調(diào)。 主要是用于血液樣本的混樣、核酸樣本的提取。 加樣器吸頭必須帶濾芯。 使用加熱模塊時，如在模塊孔中填入二氧化硅細砂，然后將標本管置于細砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。,擴增及產(chǎn)物分析區(qū),擴增反應(yīng)體系的配制和提取核酸的加入，可在標本制備區(qū)也可在本區(qū)內(nèi)進行，關(guān)鍵是要防止產(chǎn)物的污染。如果空間允許的話，也可在一個獨立的區(qū)域內(nèi)進行。 加樣時，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個即蓋好蓋子，然后加陽性質(zhì)控核酸模板，再就是標本制備陰性質(zhì)控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應(yīng)混合液的擴增陰性質(zhì)控，這樣做的目的是，最大可能地測出以前擴增產(chǎn)物的交叉污染。,擴增及產(chǎn)物分析區(qū),熱循環(huán)