丙二醛(MDA)含量的測(cè)定.ppt_第1頁
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文檔簡介

1、丙二醛(MDA)含量的測(cè)定,丙二醛是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一。植物在逆境下遭受傷害與活性氧積累誘發(fā)的膜質(zhì)過氧化作用密切相關(guān)。,植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件,植物在逆境下遭受傷害(或衰老)與活性氧積累誘發(fā)的膜脂過氧化作用密切相關(guān),膜脂過氧化的產(chǎn)物有二烯軛合物、脂類過氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛(MDA:Malondialdehyde)是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一,因此可通過測(cè)定MDA了解膜脂過氧化的程度,以間接測(cè)定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的抗逆性。,原理,丙二醛在高溫及酸性環(huán)境下可與2-硫代巴比妥酸(TBA)反應(yīng)產(chǎn)生紅棕色的產(chǎn)物3,5,5-三甲基惡唑2,4-二酮(三甲川),該物質(zhì)在532 nm處有一

2、吸收高峰,并且在660nm處有較小光吸收。根據(jù)其532 nm的消光值可計(jì)算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖對(duì)此反應(yīng)有干擾,在450 nm處有一吸收峰,可用雙組分分光光度法加以排除。,原理,硫代巴比妥酸,丙二醛,3,5,5-三甲基惡唑2,4-二酮 (三甲川),儀器設(shè)備,分光光度計(jì); 研缽; 剪刀; 恒溫水??; 試管:20 mL4 離心機(jī)。,試劑,1. 5 %三氯醋酸; 2. 0.5 %硫代巴比妥酸(用5 %三氯醋酸溶解定容); 3. 0.05 mol L1磷酸緩沖液, pH 7.8。,材料,正常生長的以及經(jīng)逆境處理的小麥、玉米或其他植物的葉片。,方法與步驟,1取小麥植株上不同葉位的葉片35片,

3、洗凈擦干,剪成0.5 cm長的小段,混勻。 2稱取葉片切段0.3 g,放入冰浴的研缽中,加入少許石英砂和2 mL 0.05 mol L-1磷酸緩沖液,研磨成勻漿。將勻漿轉(zhuǎn)移到試管中,再用3 mL 0.05 mol L-1磷酸緩沖液,分三次沖洗研缽,合并提取液。 3在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液,搖勻。 4將試管放入沸水浴中煮沸10 min,(自試管內(nèi)溶液中出現(xiàn)小氣泡開始計(jì)時(shí))。到時(shí)間后,立即將試管取出并放入冷水浴中。 5待試管內(nèi)溶液冷卻后,3000g離心15 min,取上清液并量其體積。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液為空白測(cè)532 nm、600 nm和450 nm處的消光值。,計(jì)算結(jié)果,式中,Vt:提取液總體積(mL); Vs:測(cè)定用提取液體積(ml); FW:樣品鮮重(g)。,注意事項(xiàng),1可溶性糖與TBA顯色反應(yīng)的產(chǎn)物在532 nm也有吸收(最大吸收在450 nm),當(dāng)植物處于干旱、高溫、低溫等逆境時(shí)可溶性糖含量會(huì)增高,必要時(shí)要排除可溶性糖的干擾。 2低濃度的鐵離子能增強(qiáng)MDA與TBA的顯色反應(yīng),當(dāng)植物組織中鐵離子濃度過低時(shí)應(yīng)補(bǔ)充Fe3+(最終濃度為0.5 nmol L-1) 3如待測(cè)液渾濁

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