農(nóng)林學(xué)類(lèi)論文-山羊胚胎移植技術(shù)在農(nóng)村牧區(qū)的推廣.doc

農(nóng)林學(xué)類(lèi)論文-山羊胚胎移植技術(shù)在農(nóng)村牧區(qū)的推廣論文關(guān)鍵詞:敏蓋絨山羊、同期發(fā)情、超數(shù)排卵、胚胎移植論文摘要:從農(nóng)村牧區(qū)養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)實(shí)際出發(fā),系統(tǒng)論述了敏蓋內(nèi)蒙古白絨山羊在生產(chǎn)性胚胎移植中的技術(shù)程序。主要包括:提前的準(zhǔn)備工作：選擇適宜的供、受體羊，并加強(qiáng)飼養(yǎng)管理；胚胎移植條件的準(zhǔn)備：在適宜的季節(jié),用寧波激素廠(chǎng)促卵泡素（寧波三生激素廠(chǎng)）,以減量法進(jìn)行供體超排；供、受體比例為1:812；用陰道栓配合促性腺激素,或用氯前列烯醇()進(jìn)行受體同期發(fā)情處理；從供體輸卵管手術(shù)回收的胚胎,移植于受體羊輸卵管；完整的記錄體系。胚胎移植是現(xiàn)代生物工程高新技術(shù)，能充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力，迅速擴(kuò)大優(yōu)良畜群和純種規(guī)模，加速雜交改良速度，縮短改良周期和育種進(jìn)程，增加雙胎率，防止不育，盡快培育出我國(guó)優(yōu)良絨山羊新品種。是一項(xiàng)投資少、見(jiàn)效快、利潤(rùn)豐，具有事半功倍的良種擴(kuò)繁和現(xiàn)代育種技術(shù)。1內(nèi)蒙古鄂爾多斯伊金霍洛旗蘇布爾嘠鎮(zhèn)先后引入遼寧絨山羊品種與當(dāng)?shù)匕捉q山羊育種形成了敏蓋內(nèi)蒙古白絨山羊品種進(jìn)行養(yǎng)殖，收益較大，一些農(nóng)牧民積極購(gòu)買(mǎi)此絨山羊搞起了養(yǎng)殖,而且其他地區(qū)的人也常在這里購(gòu)買(mǎi)此羊（如通遼的三高肉羊培育責(zé)任有限公司等）回去將把這些羊作為供體羊進(jìn)行胚胎移植，使得此品種在市場(chǎng)上處于供不應(yīng)求的狀態(tài)，為滿(mǎn)足需求和幫助農(nóng)牧民脫貧致富，政府投大量資金進(jìn)行胚胎移植來(lái)提高繁殖率，同時(shí)也加快了山羊胚胎移植技術(shù)在農(nóng)村牧區(qū)的迅速發(fā)展與推廣。1關(guān)于開(kāi)展農(nóng)村牧區(qū)零散養(yǎng)殖胚胎移植的建議在廣大農(nóng)村牧區(qū)每戶(hù)養(yǎng)殖數(shù)很少，而開(kāi)展胚胎移植工作又需要進(jìn)行集中處理，所以根據(jù)這一特點(diǎn)，提出以下建議，供參考：1.1分戶(hù)飼養(yǎng)與集體飼養(yǎng)相結(jié)合要在同期發(fā)情處理的第15天將所要接受移植的個(gè)體全部結(jié)合到一塊進(jìn)行集中飼養(yǎng)，集中飼養(yǎng)時(shí)間為8-10天。1.2胚胎移植受體羊只的統(tǒng)計(jì)在胚胎移植前3個(gè)月進(jìn)行村內(nèi)移植受體羊統(tǒng)計(jì)，具體數(shù)量根據(jù)現(xiàn)有供體羊的數(shù)量進(jìn)行確定，供受體參考比例為1：10。1.3胚胎移植處理時(shí)間確定鄂爾多斯地區(qū)一般在每年8月下旬至11月上旬進(jìn)行同期發(fā)情處理較為合適。1.4受體羊的選擇及飼養(yǎng)管理1.4.1受體選擇：受體羊健康狀況良好,膘情適中，選擇繁殖機(jī)能正常，無(wú)傳染性疾病、無(wú)生殖器官疾病，年齡在26歲之間的經(jīng)產(chǎn)的羔羊斷奶一月以上的母羊。2而且在移植前2個(gè)月進(jìn)行定期驅(qū)蟲(chóng)，以利于個(gè)體抓膘，提高同期發(fā)情及受胎率。1.4.2公母分群所要進(jìn)行移植的羊只一定要進(jìn)行公、母羊分群飼養(yǎng)，以防受體羊只提前懷孕而流產(chǎn)造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失。1.4.3飼養(yǎng)管理（短期優(yōu)飼）要求被處理個(gè)體在移植前加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，使個(gè)體達(dá)到中等膘情，但也不能過(guò)肥或過(guò)瘦。從同期發(fā)情放栓之日起要適當(dāng)增加豆類(lèi)飼料和蘿卜等多汁飼料的供應(yīng)，進(jìn)行短期優(yōu)飼能提高同期發(fā)情及受胎率。1.5供體羊的選擇及飼養(yǎng)管理1.5.1供體選擇供體羊(敏蓋內(nèi)蒙古白絨山羊)為經(jīng)產(chǎn)2-5胎的母羊，身體健康狀況良好,生殖器官正常,正常繁殖史,繁殖力較高,遺傳性穩(wěn)定，生產(chǎn)性能優(yōu)良，羔羊斷奶1個(gè)月以上，未孕。21.5.2供體的飼養(yǎng)管理對(duì)供體羊進(jìn)行常規(guī)傳染病和寄生蟲(chóng)病的防治。飼養(yǎng)管理遵循一般繁殖羊群的原則。保持羊群體況適度,根據(jù)羊群營(yíng)養(yǎng)狀況適時(shí)調(diào)整日糧標(biāo)準(zhǔn),即增加蛋白質(zhì)、能量飼料補(bǔ)充料,并注意礦物質(zhì)和維生素的供應(yīng)。81.5.3供體羊準(zhǔn)備期的日糧配制A、優(yōu)青草2公斤B、優(yōu)質(zhì)紫花苜蓿干草粉0.5-1公斤或鮮紫花苜蓿2-2.5公斤C、胡蘿卜0.4公斤D、干玉米秸、胡蘿卜秧等混合草粉0.5公斤E、精料0.5公斤，（精料配方：玉米面59斤，麩皮15斤，豆粕22斤，母羊?qū)Ｓ妙A(yù)混料1斤，石粉或磷酸氫鈣1斤，食鹽1斤，微量元素添加劑1斤，合計(jì)100斤）52準(zhǔn)備工作2.1物品準(zhǔn)備32.1.1器材高壓滅菌鍋、20ml注射器、10ml注射器、5ml注射器、1ml注射器、胚胎移植手術(shù)架、手術(shù)刀片、醫(yī)用縫合線(xiàn)、體視顯微鏡、沖胚管、集卵皿、培養(yǎng)皿、消毒衛(wèi)生紙、醫(yī)用噴壺、黑色記號(hào)筆、宮頸擴(kuò)張器、移胚器、檢胚皿、剪毛剪、外科剪、手術(shù)刀、止血鉗、創(chuàng)巾鉗、持針鉗、手術(shù)鑷、縫合針、創(chuàng)巾、止血紗布、脫脂棉、盆等。2.1.2藥品沖胚液、胚胎培養(yǎng)液、冰袋、生理鹽水、新潔爾滅洗滌液、碘酊、酒精、青霉素、黃胺粉、FSH、孕馬血清、CIDR、陰道海綿栓、氯前列烯醇(PG)、黃體酮、麻醉劑（2靜松靈）、蘇醒靈等。2.2胚胎移植操室準(zhǔn)備50m2的以上房間,分隔為2個(gè)房間，胚胎移植手術(shù)室和胚胎操作室。并設(shè)置工作臺(tái)及藥械臺(tái)等。室溫保持在22-25,并用新潔爾滅進(jìn)行室內(nèi)消毒。43.供、受體羊的同期發(fā)情及供體的超排具體方案如下：日期供體山羊受體山羊0天早8時(shí)，放置海綿栓5天早8時(shí)，放置陰道海綿栓9天早8時(shí)，取出海綿栓、放入一新的海綿栓15天晚6時(shí)，肌注PMSG200iu晚6時(shí)，肌注PMSG200iu16天晚6時(shí)，肌注FSH28-30iu17天早8時(shí)，肌注FSH28-30iu晚6時(shí)，肌注FSH23-25iu18天早8時(shí)，肌注FSH23-25iu晚6時(shí)，a、肌注FSH18-20iub、肌注PG0.5ml晚6時(shí)、肌注PG0.5ml19天早8時(shí)，a、撤出海綿栓（青霉素沖陰道）b、肌注FSH18-20iu晚6時(shí)，a、開(kāi)始試情b、發(fā)情后立即靜注LH130-140IUc、發(fā)情后立即進(jìn)行輸精早8時(shí)，撤出陰道海綿栓晚6時(shí)，開(kāi)始試情20天進(jìn)行手術(shù)輸精(發(fā)情12小時(shí))早8時(shí)試情22天輸卵管沖胚（建議在下午開(kāi)始較好）輸卵管移植4胚胎回收及胚胎檢查4.1供體羊術(shù)前準(zhǔn)備胚胎回收手術(shù)前1天停止飼喂草料而只給少量飲水，否則由于腹壓過(guò)大，會(huì)造成手術(shù)的困難和供體生殖器官的損傷。飼喂干草的母羊，停飼的時(shí)間不能少于24小時(shí)，飼喂青草或在草地上放牧的羊，停飼時(shí)間可減少至18個(gè)小時(shí)。在術(shù)前一天術(shù)部進(jìn)行剪毛和剃毛，常有許多剃斷的毛粘于皮膚，很難消除干凈，手術(shù)中易帶入創(chuàng)口造成污染，可采用干剪毛濕剃毛，剪毛完畢后用肥皂涂于要剃毛的部位，再用剃毛刀剃毛，然后用干毛刷將斷毛刷除干凈。第二天進(jìn)行沖胚手術(shù)。4.2供體羊沖胚：供體羊的沖胚手術(shù)在授精后68-72小時(shí)進(jìn)行。（采用輸卵管沖胚法可獲2-8細(xì)胞期的胚胎及少量的16細(xì)胞期胚胎。用于鮮胚移植。）6首先，對(duì)供體羊全身麻醉，術(shù)部消毒后,采取前低后高半仰姿勢(shì)將其保定在手術(shù)臺(tái)上。在腹底部偏右側(cè)距乳房基部3-4cm處做一長(zhǎng)4-5cm的縱向切口，逐層切開(kāi),切開(kāi)腹膜后,將中指和食指伸入腹腔在骨盆腔前沿膀胱之下觸摸子宮角,把子宮角牽引到切口之外,再把卵巢引出,檢查黃體發(fā)育情況,如果黃體發(fā)育正常，即沖胚。沖胚時(shí)，在輸卵管傘部前端插入一個(gè)帶有膠管的回收?qǐng)A針，并用手卡住，準(zhǔn)備收集沖出的胚胎；再向輸卵管的壺腹部處,插入裝有沖胚液的進(jìn)液針頭,緩慢推入沖胚液，將胚胎沖入器皿中,沖胚液用量30-50ml。一側(cè)沖洗結(jié)束時(shí),除去器械,檢查針孔,確認(rèn)無(wú)出血現(xiàn)象,將輸卵管送回腹腔內(nèi),然后按同一操作辦法進(jìn)行另一側(cè)沖胚。兩側(cè)沖洗完畢后,將子宮送回腹腔并向腹腔內(nèi)注入2530生理鹽水,最后逐層進(jìn)行縫合。4.3胚胎檢查：4.3.1檢卵將收集的沖卵液于37溫箱內(nèi)靜置10-15分鐘。胚胎沉底后，移去上層液。取底部少量液體移至平皿內(nèi)，靜置后，在視體顯微鏡下先在低倍(10-20倍)下檢查胚胎數(shù)量，然后在較大倍數(shù)(50-100倍)下觀(guān)察胚胎質(zhì)量。4.3.2吸胚用移植器先吸一段1cm長(zhǎng)的保存液，再吸一段0.5cm的空氣，然后吸取胚胎。含胚胎的液柱不超過(guò)1.5cm。吸胚是為了移取、清洗、處理胚胎，要求目標(biāo)準(zhǔn)確，速度快，帶液量少，無(wú)丟失。吸胚可用1毫升的注射器裝上特別的吸頭進(jìn)行，也可使用自制的吸卵管。4.3.3胚胎質(zhì)量鑒定正常發(fā)育的胚胎，其中細(xì)胞(卵裂球)外形整齊，大小一致，分布均勻，外膜完整。無(wú)卵裂現(xiàn)象(未受精)和異常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。處于二分體到四分體的胚胎4.3.4胚胎保存：用吸卵管吸取發(fā)育成熟的胚胎,放入PBS培養(yǎng)液中保存,在24-26下,保存時(shí)間不超過(guò)4-5小時(shí)。5受體羊胚胎移植(術(shù)前準(zhǔn)備同供體)首先，對(duì)受體羊注射麻醉劑，實(shí)行全身麻醉，術(shù)部消毒,采取前低后高半仰姿勢(shì)將受體羊保定在手術(shù)臺(tái)上,在腹底部偏右側(cè)距乳房基部3-4cm處做一個(gè)長(zhǎng)4-5cm的縱向切口,逐層切開(kāi),切開(kāi)腹膜后,引出子宮、輸卵管以及卵巢，檢查黃體，無(wú)黃體或黃體過(guò)小的受體羊不能做胚胎移植；若有孕妊黃體,且生殖系統(tǒng)無(wú)炎癥,即作為受體羊。將受體羊黃體一側(cè)的輸卵管傘部拔開(kāi)，用裝入胚胎的注射器從此處插入3-4，將胚胎注入輸卵管內(nèi)。移植結(jié)束后,把子宮角送入腹腔,在創(chuàng)口灑上抗菌素，防止感染，按手術(shù)要求縫合好腹壁創(chuàng)口。6術(shù)后護(hù)理6.1供體術(shù)后護(hù)理及配種繁殖胚胎回收手術(shù)后注意傷口護(hù)理,注意觀(guān)察，有問(wèn)題及時(shí)處理。對(duì)季節(jié)性繁殖的品種,為了不影響其自然繁殖及次年羔羊管理,當(dāng)年只進(jìn)行一次超排,并在下次發(fā)情時(shí)配種,自然繁殖。76.2受體術(shù)后護(hù)理與妊娠、分娩完成受體胚胎移植后,應(yīng)加強(qiáng)術(shù)后護(hù)理、觀(guān)察，對(duì)妊娠受體適當(dāng)增加日糧營(yíng)養(yǎng),以滿(mǎn)足妊娠需要,妊娠后期更應(yīng)加強(qiáng)管理,防止流產(chǎn),并做好接產(chǎn)和羔羊護(hù)理工作。97結(jié)果與存在的問(wèn)題7.1總體移植情況共處理供體63只，其中懷孕3只，未發(fā)情1只，未沖胚1只，可用胚493枚，未受精卵141枚，共處理受體（同期發(fā)情處理）500只，受體移植數(shù)量431只。7.2存在的問(wèn)題（1）由于參加胚胎移植的人員中有幾個(gè)是教師，所以移植只好安排于暑假期間，但是對(duì)于鄂爾多斯地區(qū)來(lái)說(shuō)，最佳的移植時(shí)間一般是在8月下旬-11月上旬，略有些早，影響供體的超排效果。（2）超排效果不夠穩(wěn)定，利用外源性促性腺激