輸血前相容性檢測閻.ppt

輸血前相容性檢測,教學(xué)目的和要求,掌握鹽水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意義。 熟悉微柱凝膠法原理、方法。 了解酶法、白蛋白介質(zhì)法、Liss法的原理和方法。 熟悉ABO/Rh血型鑒定方法及影響因素 熟悉抗體篩選原理和意義 熟悉交叉配血方法及意義 了解抗體鑒定原理和意義,血型鑒定,抗體篩選及鑒定,交叉配血,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用,微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù),聚凝胺試驗(yàn),酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),抗人球蛋白試驗(yàn),增強(qiáng)技術(shù),鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。 主要檢測IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）。 抗A抗B特異性IgG類抗體有時可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細(xì)胞，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。,鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌 反應(yīng)溫度：422 臨床意義：鹽水凝集試驗(yàn)陽性，并在37也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，37無活性者臨床意義不大。,試驗(yàn)記錄 4+（+）：一個大凝集塊，背景透明，無游離細(xì)胞 3+（+）：數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離細(xì)胞 2+（+）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細(xì)胞 1+（+）：細(xì)小的凝集塊，背景渾濁 W+（）：極細(xì)小凝集塊，要用顯微鏡觀察結(jié)果 0（-）：無凝集，無溶血，細(xì)胞呈游離散在狀態(tài) PH：部分溶血 H：完全溶血,Weak reactions often difficult to interpret. Can also be downgraded due to shaking the completed test.,Conventional Testing.,鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),結(jié)果分析：陽性-凝集或溶血 陰性-無凝集或溶血 先觀察有無溶血、再觀察有無凝集 注意事項(xiàng)：細(xì)胞濃度25%（嚴(yán)格按說明 書操作）、血清與細(xì)胞比例、反應(yīng)溫 度、弱凝集分析 優(yōu)點(diǎn)：簡便、快捷、直觀。 缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。,微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù),聚凝胺試驗(yàn),酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),抗人球蛋白試驗(yàn),增強(qiáng)技術(shù),抗人球蛋白試驗(yàn),抗球蛋白試驗(yàn)是1945年由Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗(yàn)。抗球蛋白試驗(yàn)的建立在血型血清學(xué)上有著非常重要的意義。 分為直接抗球蛋白試驗(yàn)（DAT）和間接抗球蛋白試驗(yàn)（IAT）。,抗人球蛋白試驗(yàn)原理,IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。 補(bǔ)體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含補(bǔ)體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗(yàn)。,抗人球蛋白試劑,多特異性抗球蛋白試劑：應(yīng)含有抗IgG和抗-C3d。 單特異性抗球蛋白試劑：抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、C4的片段。,直接抗人球蛋白試驗(yàn),DAT是用來檢測體內(nèi)紅細(xì)胞致敏情況，尤其是IgG和C3d包被的紅細(xì)胞。 用于： HDN和自身免疫溶血性貧血的診斷 紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查 急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查,間接抗人球蛋白試驗(yàn),用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。 用不完全抗體測定紅細(xì)胞血型，如Rh血型。 交叉配血。,結(jié)果分析-假陽性,用免疫兔或羊制備的抗人球蛋白含有種間抗體。 紅細(xì)胞在用鹽水洗滌時已有凝集。 IAT試驗(yàn)中所用紅細(xì)胞本身DAT陽性。 不抗凝標(biāo)本在冷環(huán)境里經(jīng)過一段時間的保存后，自身冷抗體發(fā)生作用，激活補(bǔ)體，補(bǔ)體成分結(jié)合在紅細(xì)胞上，用多特異性抗球蛋白試劑會發(fā)生假陽性。 離心過度，紅細(xì)胞壓積過緊，不易充分搖散,結(jié)果分析-假陰性,致敏后的紅細(xì)胞洗滌不充分,殘留的球蛋白中和了試劑中的抗球蛋白，造成假陰性。 操作過程不連續(xù)，時間過長，結(jié)合在紅細(xì)胞上的抗體解離。 紅細(xì)胞、血清和抗人球蛋白試劑保存不當(dāng)都可能發(fā)生活性減弱或喪失。 紅細(xì)胞過多，反應(yīng)減弱；紅細(xì)胞過少，看結(jié)果不準(zhǔn)確，都影響結(jié)果。 試劑中抗人球蛋白濃度過大，有前帶現(xiàn)象。 孵育時間和溫度不當(dāng)，會使反應(yīng)結(jié)果減弱或變?yōu)榧訇幮浴Ｓ^察結(jié)果時過度搖動試管，搖散細(xì)小凝塊。,注意事項(xiàng),每次試驗(yàn)要設(shè)有陰性和陽性對照。 陰性結(jié)果要加入一滴IgG致敏紅細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)器材清潔。 注意抗原抗體比例、孵育時間、溫度等條件。 嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法操作。 排除自身抗體干擾。,微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù),聚凝胺試驗(yàn),酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),抗人球蛋白試驗(yàn),增強(qiáng)技術(shù),抗人球蛋白試驗(yàn),微柱凝膠試驗(yàn),原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。,微柱凝膠反應(yīng)本質(zhì)：凝集反應(yīng),紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細(xì)胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。,結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),微柱凝膠試驗(yàn)注意事項(xiàng),嚴(yán)格按照試劑說明書操作。 獻(xiàn)血者DAT陽性，干擾結(jié)果判讀。 患者自身抗體干擾。 注意加樣順序。 配制細(xì)胞濃度準(zhǔn)確。,微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù),聚凝胺試驗(yàn),酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),抗人球蛋白試驗(yàn),增強(qiáng)技術(shù),抗人球蛋白試驗(yàn),鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),聚凝胺試驗(yàn),原理：聚凝胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有多個陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，并籍助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞的非特異性凝集。 當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，IgG抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合，在聚凝胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與聚凝胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會消失。,+ + +聚凝胺,+,無凝集,+,有凝集反應(yīng),- - - - - 枸櫞酸納- - - - -,聚凝胺試驗(yàn),優(yōu)點(diǎn)：簡便快捷，可用于某些不完全抗體檢測。 缺點(diǎn)：對無唾液酸的紅細(xì)胞無作用， 例如多凝集紅細(xì)胞。 可增強(qiáng)自身抗體或冷凝集素干擾。 注意事項(xiàng)：抗原抗體比例適當(dāng) 聚凝胺（1液）去除干凈。,微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù),聚凝胺試驗(yàn),酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),抗人球蛋白試驗(yàn),增強(qiáng)技術(shù),抗人球蛋白試驗(yàn),酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，使紅細(xì)胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，使IgG分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。,酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶。 方法：期法-酶液直接加入血清和細(xì)胞的混合物中。 期法-用酶處理細(xì)胞再與血清 進(jìn)行反應(yīng)。 兩種方法比較：期法 操作方便 期法 敏感,酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),優(yōu)點(diǎn)： 可以增強(qiáng)一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性 Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯 缺點(diǎn)： 會破壞一些抗原的結(jié)構(gòu)(M、N、Fya、Fyb) 酶液批次不同，都需標(biāo)化最適孵育時間。 操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏。,微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù),聚凝胺試驗(yàn),酶介質(zhì)凝集試驗(yàn),鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn),抗人球蛋白試驗(yàn),增強(qiáng)技術(shù),抗人球蛋白試驗(yàn),增強(qiáng)技術(shù),白蛋白增強(qiáng)凝集法 原理：白蛋白能提高紅細(xì)胞懸浮液中的介電常數(shù)，從而降低zete電位，縮小了細(xì)胞間距離，增加細(xì)胞與細(xì)胞的接觸面。 應(yīng)用：血型鑒定和交叉配血 結(jié)果判定：出現(xiàn)凝集和溶血現(xiàn)象為陽性結(jié)果。,增強(qiáng)技術(shù),低離子強(qiáng)度鹽溶液（Liss）法 原理：在凝集反應(yīng)第一階段，若降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，就會減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，促進(jìn)帶正電荷的IgG與帶負(fù)電荷的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。 注意事項(xiàng)：不能增加額外血清量 延長孵育時間會使某些抗原 變質(zhì)，如Fya。,抗體篩選及鑒定,交叉配血,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),血型鑒定,ABO血型鑒定,方法：常用室溫鹽水技術(shù)檢測紅細(xì)胞上 的血型抗原，以及血清中存在的血型 抗體。結(jié)果判定參見凝集試驗(yàn)。 ABO血型鑒定的常規(guī)試驗(yàn)： 1、正定型：用已知抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞上未知的抗原。常規(guī)用抗A抗B 2、反定型：用已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中未知的抗體。常規(guī)用A、B和O三種紅細(xì)胞。,正反定型的意義,準(zhǔn)確的血型判定利于指導(dǎo)臨床用血 發(fā)現(xiàn)亞型 抗原強(qiáng)度的改變與疾病相關(guān) 新抗原出現(xiàn)與疾病相關(guān) 排除假陰性或假陽性結(jié)果干擾,ABO血型反應(yīng)格局,血型 正定型 反定型 抗A 抗B Ac Bc Oc A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - -,Cells v Serum,Serum v Cells,ABO亞型鑒定,亞型通常表現(xiàn)為凝集反應(yīng)強(qiáng)度弱，或正、反定型不符 增加試劑：抗A1-區(qū)分A1和A2 抗H-有較強(qiáng)的H抗原性 抗A,B-與Ax的反應(yīng)強(qiáng)度增強(qiáng) 增加方法：吸收放散試驗(yàn) 唾液中血型物質(zhì)鑒定 PCR方法,Rh血型鑒定,紅細(xì)胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E、和e抗血清檢測來鑒定。但常規(guī)只用抗D血清檢查有無D抗原 D抗原陽性者為Rh陽性，否則為陰性,Rh血型鑒定方法, Rh抗體屬IgG類，一般不能在鹽水介質(zhì)中與紅細(xì)胞發(fā)生凝集，因此須采用以下鑒定方法（其中一種）： 1、酶介質(zhì)法 2、抗人球蛋白法+增強(qiáng)試驗(yàn) （Liss/白蛋白技術(shù)） RhD檢測常用鹽水法。,血型鑒定,交叉配血,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),抗體篩選及鑒定,抗體篩選和鑒定,有臨床意義的抗體： 能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反 應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少，在 37有反應(yīng)的同種抗體。 意外抗體： 抗A，抗B以外的抗體。,目的和原則,目的：對受血者的血清或血漿，應(yīng)常規(guī)作抗體篩選實(shí)驗(yàn)，以發(fā) 現(xiàn)有臨床意義的意外抗體。 原則：讓受檢血清或血漿與特殊的試劑紅細(xì)胞（篩選細(xì)胞）起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)37有反應(yīng)活性的抗體。,對血清中抗體檢測的要求,選擇足夠敏感、高特異性的技術(shù)檢測出受檢者血清中低水平的有臨床意義的抗體。 2. 要高度注意，即使受血者血清中的抗體對輸入的不相容紅細(xì)胞抗原呈弱反應(yīng)，也能夠發(fā)生快速回憶反應(yīng)，抗體迅速產(chǎn)生，破壞紅細(xì)胞。,對試劑紅細(xì)胞的要求,不能將多人份紅細(xì)胞混合，一定要用2-3人份的試劑紅細(xì)胞，以避免紅細(xì)胞混合后，對弱抗原紅細(xì)胞的稀釋。 美國FDA對注冊和批準(zhǔn)作為商品供應(yīng)的用作不規(guī)則抗體篩檢的試劑紅細(xì)胞的要求為必須表達(dá)：D、C、E、c、e、M、N、S、s，Pl、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb，JKa、JKb。,臨床重要的人血清紅細(xì)胞抗體,抗體篩選方法,鹽水凝集法 抗人球蛋白法 聚凝胺法 微柱凝膠法 LISS抗球蛋白法,結(jié)果的判讀和解釋,溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。 記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對照。 抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢。,抗體鑒定,通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步 作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。 自身細(xì)胞檢查-排除非特異性 2.譜紅細(xì)胞檢查,譜紅細(xì)胞： 一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。 方法： 在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。,血型鑒定,抗體篩選及鑒定,交叉配血,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),交叉配血,主側(cè)：受血者血清+供者紅細(xì)胞 檢測對供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體 次側(cè)：受血者紅細(xì)胞+供者血清 檢測對受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體 自身對照：受血者紅細(xì)胞+受血者血清 排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性及紅細(xì) 胞緡錢狀凝集干擾,接收申請單和血標(biāo)本,核對無誤 （如有錯誤與醫(yī)生/護(hù)士聯(lián)系）,進(jìn)行交叉配血,相合 結(jié)果輸入微機(jī),不相合,打印發(fā)血單,血液中心,交叉配血工作流程,注意事項(xiàng),用于交叉配血的標(biāo)本應(yīng)該是新獲得的（3天之內(nèi)）；供者血標(biāo)本應(yīng)剛從血袋上剪下。 不能用玻片法作交叉配血。 必要時用生理鹽水洗滌細(xì)胞。 紅細(xì)胞濃度一般是2-5%。 嚴(yán)格按照試劑說明書操作。,抗篩和配血結(jié)果分析,紅細(xì)胞方面問題處理,血清方面問題處理,常見問題處理,紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù),抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析,抗體篩選陰性，交叉配血相合 見于臨床上絕大多數(shù)標(biāo)本。 抗體篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義的抗體（方法或篩選細(xì)胞） 鹽水介質(zhì)試驗(yàn)作配血可能漏檢有意義的IgG類抗體。 只有用非鹽水介質(zhì)交叉配血，才能保證待輸?shù)难褪苷呦嗪稀?抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析,抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合 ABO血型錯誤。 抗A1存在于A2或A2B，在直接鹽水交叉配血實(shí)驗(yàn)中，抗A1能引起大部分A型紅細(xì)胞不相合。 存在室溫反應(yīng)的同種抗體，如抗M。,抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析,抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞DAT陽性（約1/10000） 患者抗體弱，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原性很強(qiáng)，表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。 針對低頻抗原的抗體，如Diego系統(tǒng)抗-Wra。,抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析,抗體篩選陽性，交叉配血不合 同種抗體、自身抗體、試劑問題、緡錢狀凝集，應(yīng)在輸血前查明原因。 必須進(jìn)行包括抗人球蛋白試驗(yàn)在內(nèi)的交叉配血。 緊急情況下無法找到血清學(xué)配合的血液時，輸血科人員應(yīng)告之主管醫(yī)生此種情況下輸血存在的可能危險(xiǎn)。,同種抗體的處理對策,交叉配合相合與否取決于涉及抗原的頻率。 鑒定抗體的特異性后，先用抗血清篩選相應(yīng)抗原陰性者，再與受者血清作交叉配血。用受血者血清還是試劑抗血清篩選血液，應(yīng)根據(jù)病人的血清反應(yīng)強(qiáng)度，能得到的受者血清量以及抗血清的來源和費(fèi)用等決定。 醫(yī)院庫存血中難以找到配合血時，求助血液中心。,自身抗體,冷自身抗體干擾血型鑒定、抗體篩選和鑒定以及交叉配血試驗(yàn)，結(jié)果判讀困難。最常見的特異性是抗-I。 溫反應(yīng)自身抗體很少引起ABO定型困難，但可引起Rh定型困難。 注意：確認(rèn)有無同種抗體