消毒效果檢測方法ppt課件

醫(yī)院清洗消毒滅菌效果監(jiān)測方法進展,概述,醫(yī)院消毒滅菌效果監(jiān)測用設施設備儀器和器材醫(yī)院消毒效果監(jiān)測方法其他監(jiān)測方法醫(yī)療器械清洗消毒滅菌效果監(jiān)測結果醫(yī)院環(huán)境微生物污染和消毒效果監(jiān)測結果,一、消毒滅菌效果監(jiān)測用設施設備儀器和器材,實驗室和主要監(jiān)測用儀器設備常用消毒滅菌效果監(jiān)測器材,（一）實驗室和常用儀器設備,1.百級潔凈實驗室2.微生物實驗室3.空氣采樣器4.紫外線測定儀5.細菌過濾器6.ATP檢測儀7.溫度/壓力記錄儀8.溫度記錄儀9.溫度/相對濕度記錄儀10.干熱溫度測試儀,1.100級潔凈實驗室,基本設施設備：緩沖間、風淋設備、百級凈化設備，全不銹鋼桌臺面、傳遞窗、紫外線燈等用于滅菌物品的無菌檢驗各種滅菌物品、一次性使用衛(wèi)生用品和一次性使用醫(yī)療用品。,100級潔凈實驗室要求,2.微生物實驗室,基本設施設備：實驗臺、洗手池、洗眼器、紫外燈、二級生物安全柜、電冰箱、培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、微波爐、恒溫水浴箱等。用途：各種常見條件致病菌的檢測、細菌總數(shù)的檢測、消毒滅菌效果的檢測。,3.六級篩孔空氣撞擊式采樣器,組成：六級篩孔采樣器、真空泵、流量計、定時器用途：用于室內空氣中細菌總數(shù)檢測和消毒效果監(jiān)測,六級篩孔空氣撞擊式采樣器,六級篩孔空氣撞擊式采樣器指標,第一級：7.0m孔徑1.18mm第二級：4.7m7.0m孔徑0.91mm第三級：3.3m4.7m孔徑0.71mm第四級：2.1m3.3m孔徑0.53mm第五級：1.1m2.1m孔徑0.34mm第六級：0.65m1.1m孔徑0.25mm測量范圍內捕獲率98%,4.三聯(lián)細菌過濾器,組成：真空抽氣泵、濾器、0.45微米的濾膜用途：用于內鏡消毒效果檢測,細菌過濾裝置,5.ATP檢測儀ATP熒光素酶結合，在熒光素酶的結合作用MG+參與反應發(fā)出熒光降解成ADTAMP,三磷酸腺苷（ATP）方法用于清洗效果的檢測,在生物化學中，三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate,ATP）是一種核苷酸（又叫腺苷三磷酸），作為細胞內能量傳遞的“分子通貨”，儲存和傳遞化學能。ATP在核酸合成中也具有重要作用。ATP是三磷酸腺苷的英文名稱縮寫。ATP分子的結構是可以簡寫成A-PPP，其中A代表腺苷，P代表磷酸基團，代表一種特殊的化學鍵，叫做高能磷酸鍵，高能磷酸鍵斷裂時，大量的能量會釋放出來。,進行ATP檢測,污染物的ATP含量,醫(yī)療器械使用后會受到體液、血液、組織細胞以及微生物等污染。體液和血液中有大量的體細胞，每個體細胞的ATP含量大約為1x10-15molATP，每個細菌細胞中大約含有210-18molATP單個體細胞ATP含量大約是單個細菌細胞的500倍,細菌ATP檢測試劑盒,細菌ATP裂解劑,ATP標準品,ATP檢測液,細菌外ATP消去劑,試劑盒檢測細菌的原理,每個細菌中含有210-18mol的ATP,基于熒光素酶催化的化學發(fā)光原理，首先利用細菌外ATP消除劑排除非細菌產(chǎn)生的ATP干擾，再利用細菌ATP裂解劑將細菌裂解，通過ATP檢測液檢測總細菌ATP的發(fā)光量，達到檢測細菌的目的,light,Oxyluciferin+AMP+Pyrophosphate+,6.新型多點紫外線輻照儀,六大創(chuàng)新,多點監(jiān)測，能同時監(jiān)測5個紫外燈管并一起打印保存。手持遙控，主機與探頭分離，室外監(jiān)測，徹底避免紫外輻射傷害。即時打印，可保存原始記錄。數(shù)據(jù)線USB端口與電腦相連，可在電腦里編輯儲存監(jiān)測記錄。專用盲管紫外線傳感技術，避免其它波段紫外線干擾，監(jiān)測數(shù)據(jù)更為精確。余弦修正技術，不受角度誤差影響。,7.雙通道溫度/壓力數(shù)據(jù)記錄器,外殼材質：不銹鋼，硅橡膠鎧裝探針：探針長40mm，直徑3mm探針材質：英科鎳合金溫度記錄范圍：0150，精度：0,1C壓力傳感器：壓電電阻,帶溫度補償壓力范圍：1毫巴4000毫巴壓力精度：10毫巴記錄容量：100,000個數(shù)據(jù)溫度傳感器：鉑電阻PT1000溫度記錄容量：100,000個數(shù)據(jù)記錄間隔：1秒24小時任意設定防護等級：IP68（全密封防水）承壓：20公斤，電池：耐高溫鋰電池，壽命2年主機尺寸：46mmx24mm，主機重量：70,功能：完成1個點溫度、1個點壓力與時間的檢測、記錄附加無線發(fā)送信號功能,8.單通道主機/探針一體溫度記錄器,外殼材質：不銹鋼，硅橡膠探針材質：不銹鋼探針長100mm直徑3mm溫度記錄范圍：-85400精度：0.5（-85-40）0.2（-400）0.1（0+140）0.2（+140+250）0.5（+250+400)溫度傳感器：鉑電阻PT1000溫度記錄容量：100,000個數(shù)據(jù)記錄間隔：1秒24小時任意設定防護等級：IP68（全密封防水）,完成1個點的溫度與時間檢測、記錄附加無線發(fā)送信號功能,單通道主機/探針一體溫度記錄器,外殼材質：不銹鋼，硅橡膠鎧裝探針：探針長250/500mm，直徑1,5mm探針材質：英科鎳合金溫度記錄范圍：-85400精度：0.5（-85-40）0.2（-400）0.1（0+140）0.2（+140+250）0.5（+250+400)溫度傳感器：鉑電阻PT1000溫度記錄容量：100,000個數(shù)據(jù)記錄間隔：1秒24小時任意設定防護等級：IP68（全密封防水）承壓：20公斤，電池：耐高溫鋰電池，壽命2年主機尺寸：46mmx24mm，主機重量：70克,單溫度探針；完成1個點的溫度與時間檢測、記錄鎧裝探針可任意彎曲附加無線發(fā)送信號功能,雙通道主機/探針一體溫度記錄器,外殼材質：不銹鋼，硅橡膠鎧裝探針：探針長500mm，直徑1,5mm探針材質：英科鎳合金溫度記錄范圍：-85400精度：0.5（-85-40）0.2（-400）0.1（0+140）0.2（+140+250）0.5（+250+400)溫度傳感器：鉑電阻PT1000溫度記錄容量：100,000個數(shù)據(jù)記錄間隔：1秒24小時任意設定防護等級：IP68（全密封防水）承壓：20公斤，電池：耐高溫鋰電池，壽命2年主機尺寸：46mmx24mm，主機重量：70克,完成2個點的溫度與時間檢測、記錄鎧裝探針可任意彎曲附加無線發(fā)送信號功能,硅橡膠隔熱盒,智能數(shù)據(jù)交換平臺,專用電源、天線配套軟件(光盤)中文軟件操作說明功能：編程及讀取數(shù)據(jù)同時為4個數(shù)據(jù)記錄器編程、讀取4個記錄器記錄數(shù)據(jù),USB接口，彩色背景信號,附加無線接收信號功能,9.無線溫度/相對濕度實時監(jiān)測儀,無線主機探針一體溫度/濕度記錄器,溫度范圍及精度:10850.1溫度記錄容量：8,000個數(shù)據(jù)濕度范圍及精度：0%100%RH濕度記錄容量：8,000個數(shù)據(jù)電池：AA鋰電池（可更換）尺寸：直徑22mm高117mm（直徑相當于一元硬幣)完成1個點的溫度與時間及1個濕度點的檢測、記錄；可同步顯示實時溫度數(shù)值,MPIII主機探針一體溫度/濕度記錄器,溫度范圍及精度:10850.1溫度記錄容量：81085,000個數(shù)據(jù)濕度范圍及精度：0%100%RH2%RHv記錄容量：8,000個數(shù)據(jù)電池：紐扣電池（可更換）尺寸：直徑18mm高66mm單通道無線溫度探針；完成1個點的溫度與時間檢測、記錄；同步顯示實時溫度數(shù)值；用于消毒滅菌過程的檢測,MPRF無線主機探針一體溫度記錄器,工作站智能微機信號轉換器（實時傳輸）配套軟件(光盤)，可兼容以上系列產(chǎn)品信息處理完成數(shù)據(jù)編程和讀?。豢蓪崟r傳輸數(shù)據(jù)。,10.干熱溫度測試儀,LH-X多路溫度測試儀主要參數(shù),傳感器：標配（K型）熱電偶2米測溫范圍：-1001000；精度：0.5級0-1000(讀數(shù)值0.5%+1)-100-0(讀數(shù)值0.5%+2)機箱尺寸：260（寬）160（高）360（深）(mm)溫度信號輸入通道數(shù)：8路、16路、24路、32路、40路、48路、56路、64路可選重量約6.0Kg,LH-X多路溫度測試儀工作原理,LH-X多路溫度測試儀是由兩條不同金屬連接著一個靈敏的電壓計所組成，金屬接點在不同的溫度下，會在金屬的兩端產(chǎn)生不同的電壓差，電壓差非常微小，故需靈敏的電壓計才能測的，由電壓計的度數(shù)便可反應溫度值。,（二）常用消毒滅菌效果監(jiān)測器材,1.化學指示物2.生物指示物3.滅菌過程驗證裝置（PCD）4.消毒劑濃度測試卡5.中和劑6.采樣液7.規(guī)格板（5.05.0cm）8.采樣用棉拭子,1.化學指示物CHEMICALINDICATOR（CI）,定義：顯示由暴露于某一滅菌過程中的物理和（或）化學條件的改變導致的一個或多個預定過程變量變化的系統(tǒng)。,分類,第1類過程化學指示卡（processindicators）用于單個物品或包裝，指示物品是否經(jīng)過了滅菌過程，以區(qū)分滅菌或未滅菌物品，例如化學指示膠帶，化學指示標簽及用于單一器械滅菌過程指示的器材指示卡。,第2類特殊檢測化學指示卡（indicatorsforuseinspecifictests）用于滅菌器或滅菌標準的特效實驗操作，例如，各種B-D試紙，用于監(jiān)測在133135預真空滅菌器：冷空氣排出效果飽和蒸汽穿透效果漏氣情況,Class2Indicator,Class2Indicator,反復使用的B-D測試裝置,可反復使用15次成本節(jié)省30%,判斷B-D測試結果簡便,設備正常：顏色完全由藍色變?yōu)楹谏?設備不正常：指示試紙的中心區(qū)域呈藍色到灰色，表明有殘留空氣或者蒸汽穿透不完全。,第3類單一參數(shù)化學指示卡Single-parameterindicators用于滅菌過程中單一關鍵參數(shù)的測試，例如：溫度指示卡（劑）、氣體濃度指示卡（EO、甲醛）等。,第4類多參數(shù)化學指示卡(Multi-parameterindicators)具有兩個或以上關鍵參數(shù)，例如，環(huán)氧乙烷滅菌指示卡，設定值為900mg/L，60min根據(jù)ISO15882-2003提供的上下限值，相對濕度大于30%，時間至少45min，環(huán)氧乙烷濃度為675mg/L時，指示卡可達到終點，相對濕度小于30%，指示卡不能達到終點。,0,時間,溫度(oC),121,134,多參數(shù)化學指示劑（第4類）,兩個或以上關鍵參數(shù)和生物不完全一致誤差：寬,第5類綜合性化學指示卡（integgratingindicators）是一種專用于對各滅菌過程中規(guī)定范圍內的所有評價參數(shù)起作用的指示卡，其設定值需達到滅活值，該滅活值是通過參考設定的試驗菌的D值和Z值確定的。,第5類綜合指示卡,50,20,10,5,2,1,0.5,Time(Min.),Temperature,121,134,IntegratingIndicatorAcceptPoints(SVs),G.stearothermophilusThermalDeathTime,Class5IntegratingIndicator,第6類模擬化學指示卡emulatingindicators用于對各滅菌周期規(guī)定的范圍內所有評價參數(shù)起作用的指示卡，其設定值以所選的滅菌程序設置值為依據(jù)。,Class6EmulatingIndicators,第6類的允許指示最嚴格的，因此此類化學指示卡的對特定滅菌過程中關鍵參數(shù)指示的可信度最高。例如，蒸汽滅菌指示卡設定值：134維持時間：3.0min依據(jù)ISO15882-2003的要求（溫度，時間）暴露條件，溫度132，時間2.75min，可接受的指示卡應顯示失敗暴露條件時間134，時間3.0min，可接受的指示卡應顯示通過,6類指示物美國ST79:2010規(guī)范,在1-6類指示物中，只有6類指示物可以作為周期驗證指示物，有能力監(jiān)測滅菌過程中各項評價參數(shù)是否達到了預期的設定值。根據(jù)滅菌周期不同，6類指示物派生了不同滅菌周期參數(shù)的產(chǎn)品例如分別有監(jiān)測1343.5分鐘、18分鐘，或者1324分鐘，10分鐘，15分鐘和20分鐘的產(chǎn)品?？梢愿鶕?jù)需要選擇不同參數(shù)的產(chǎn)品。第六類指示物可用于監(jiān)測越來越常見的復雜外科器械的延長循環(huán)。,ANSI/AAMIST79:2010/A3:2012ISO11140-12005,CLASS4,5,AND6CIS,Pass/FailTestingSteamClass4,5,and6IndicatorsPassConditionStatedValueFailConditionS.V.MinusValuesfromStandardClassTimeTemperature425%2C66%1C5(3Temperatures15，1C),應用,包外化學指示卡包外化學指示卡的作用是區(qū)分已處理和未處理的物品，而不是鑒別是否達到了適當?shù)臏缇鷧?shù)，主要包括第1類過程指示卡。所有需進行滅菌的設備，其包裝上都應附有或印有滅菌指示帶、指示卡、指示圖。所有執(zhí)行滅菌操作的包裝上也應附有或印有指示卡。在滅菌后和使用前均應對這些指示帶、指示卡或指示圖進行驗證，以確保物品已經(jīng)過了滅菌處理。,包內化學指示卡化學指示卡用于進行滅菌處理的包裹、托盤、容器內部時，可反映這些特定位置的關鍵參數(shù)達成情況，例如，填充物、填充方式、打包技術及滅菌器故障等諸多因素對關鍵參數(shù)的達成造成的影響?；瘜W指示卡應放置在包裹、托盤、容器內滅菌劑可滲入的區(qū)域，該區(qū)域可以是包裹、托盤、容器或滅菌器空腔的中心，對于未包裝的物品，至少應在需要滅菌的物品的托盤上放置一個化學指示卡。包內化學指示卡通常在3、4、5、6類化學指示卡種選擇。還可配合滅菌過程驗證裝置（PCD）使用。,特殊監(jiān)測指示卡用于蒸汽滲入或空氣排出測試，需要在空的滅菌器中進行，測試包裝可以是用戶提供的、事先制造的，一次性的或使用次數(shù)有限的。這些設備的使用要參考廠家的技術說明書。,2.滅菌效果監(jiān)測生物指示物,定義：含有對特定的滅菌過程具有確定抗力的可存活微生物的測試系統(tǒng)。分類：按制作工藝結構分類普通型生物指示劑嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示物通過2496小時培養(yǎng)，以顏色變化判斷結果快速型生物指示劑雙重監(jiān)測系統(tǒng)（快速酶熒光生物指示劑或者快速讀出生物指示劑）,BacillusatrophaeusthesporeinEOBI,GeobacillusstearothermophilusthesporeinthesteamBI,生物指示劑變色原理,pH值敏感的溴甲酚紫pH顏色變化,嗜熱脂肪桿菌芽孢中葡萄苷酶代替細菌芽孢快速:機器測熒光常規(guī):肉眼判斷快速和常規(guī)結果完全吻合,熒光激發(fā)器熒光閱讀器底物酶被催化產(chǎn)生可發(fā)熒光的物質在機器口通過熒光激發(fā)器（紫外線）熒光閱讀器判斷通過或失敗,快速讀出技術（酶反應）14小時提供生物監(jiān)測結果，指示劑結果為陰性后方可放行熒光出現(xiàn)在132135下排氣時為1小時熒光出現(xiàn)在132135預真空或者121下排氣時為3小時也可通過48小時進一步培養(yǎng)通過顏色變化進行,菌懸液指示物含有嗜熱脂肪桿菌芽孢的安甁ProsporeAmpoule,屬于自含式生物指示劑用于指示較長時間液體滅菌效果監(jiān)測也適用于非液體負載滅菌效果監(jiān)測菌片含有保護劑的染菌載體,生物指示劑的應用：,滅菌過程監(jiān)測方法中最嚴格的方法，滅菌效果監(jiān)測、生物監(jiān)測、裝載控制壓力蒸汽滅菌器常規(guī)BI監(jiān)測美國醫(yī)療中心服務專業(yè)人員協(xié)會規(guī)定每天進行BI監(jiān)測，植入物每鍋進行監(jiān)測，生物監(jiān)測結果為陰性后方可放行。美國手術室注冊護士協(xié)會/醫(yī)療器械促進委員會規(guī)定每周進行BI監(jiān)測，推薦每天監(jiān)測。對植入物要求每鍋進行監(jiān)測，生物監(jiān)測結果為陰性后方可放行。,作為植入物放行的依據(jù)根據(jù)AAMIST79，2006之規(guī)定，只有在生物監(jiān)測結果出來，并為陰性后，方可對植入物的滅菌放行?？焖贉缇粦撚糜谥踩胛?，如果出現(xiàn)緊急情況需要使用快速滅菌方法進行植入物的處理時，必須使用快速生物指示劑和第五類化學指示劑進行監(jiān)測。直到快速生物監(jiān)測結果為陰性后，方可放行。配合滅菌過程驗證裝置（PCD）使用。,中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS310.32009中對生物監(jiān)測的使用,應每周監(jiān)測一次。緊急情況滅菌植入型器械時，可在生物PCD中加用5類化學指示物。5類化學指示物合格可作為提前放行的標志，生物監(jiān)測的結果應及時通報使用部門。采用新的包裝材料和方法進行滅菌時應進行生物監(jiān)測。小型壓力蒸汽滅菌器因一般無標準生物監(jiān)測包，應選擇滅菌器常用的、有代表性的滅菌包制作生物測試包或生物PCD，置于滅菌器最難滅菌的部位，且滅菌器應處于滿載狀態(tài)。生物測試包或生物PCD應側放，體積大時可平放。采用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時，應直接將一支生物指示物，置于空載的滅菌,干熱滅菌生物指示物,ISO11138-4：2006醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示劑第四部分干熱滅菌用生物指示物160，D值2.5min菌株枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽胞菌數(shù)1106cfu/單位,3.滅菌過程驗證裝置（PCD）,定義：對某一滅菌過程構成特定的抗力，用于評價該滅菌過程有效性的裝置。,分類,根據(jù)包裹分類：對于壓力蒸汽滅菌，根據(jù)抗力或滅菌因子穿透難度的不同,包裹可以分為下列幾類：（1）實體器材（solidgoods）指實心而沒有孔洞的器材（2）布包/敷料包/多孔物品（porousgoods）如，標準測試包美國4kg，歐洲7kg（）化學指示卡測試包（美國3M）,歐洲標準包美國標準包,一次性使用標準測試包,螺旋型滅菌過程驗證裝置，由一個不銹鋼管和一個在一端與其相連的含有化學指示卡的金屬艙組成。,LinePickerell螺旋,S.J.LineandJ.K.Pickerell(1973)JournalofClinicalPathology26,716-720不銹鋼管道內徑為3.0mm(0.118in.)長為4.55米(15ft.)長/內徑比為1500:1內部體積為32ml（測試囊腔為0.85ml）,聚四氟乙烯型低溫蒸汽甲醛螺旋型PCD,DIN58946,第13章甲醛氣體滅菌器性能測試特富龍管腔2mm內徑1.5米長盲端結構（Deadendlumen）,蒸汽滅菌批量監(jiān)測PCD,由一個聚四氟乙烯管和一個在一端與其相連的含有化學指示卡的金屬艙組成,長度為1.5米，直徑2mm用于滅菌過程的批量監(jiān)測,緊湊型滅菌過程驗證裝置（compact-PCD）構成：內部為金屬管，金屬管一端和一個含有化學指示條的金屬容器相連,外部為人造材料保護外艙,根據(jù)PCD內所放置的指示物分類化學PCD一片第五類CI生物PCD一支BI或一支含酶BI生物和化學混合PCD一支BI和一片第五類CI或一支BI和一支含酶CI,化學PCD將第五類化學指示物置入PCD夾子內,生物PCD將菌片置入PCD夾子內的過程,3.按不同滅菌方法的效果監(jiān)測進行分類壓力蒸汽滅菌環(huán)氧乙烷滅菌低溫甲醛蒸汽滅菌低溫等離子體滅菌,壓力蒸汽滅菌PCD,空腔負載試驗的過程挑戰(zhàn)裝置（PCD）空腔負載試驗的過程挑戰(zhàn)裝置PCD由管蓋、連接器、指示物固定器、軟管組成?；瘜W指示物應符合GB18282.1的要求，制造商提供化學指示物的選擇和使用方法。過程挑戰(zhàn)裝置符合如下要求：材料：聚四氟乙烯（）；管壁厚度：（0.50.025）mm；管內直徑：（2.00.1）mm；,軟管長度：（150015）mm；密封艙重量：（10.00.1）g；PCD內部自由容積：裝置內部總容積減去指示物固定器容積的（）%注：可使用其它證實等同性的材料。當使用其它材料時，壁厚與指示物固定器重量可相應改變。,環(huán)氧乙烷PCD不銹鋼型,根據(jù)EN1422制作，適用于環(huán)氧乙烷滅菌的批量監(jiān)測和設備的驗證。PCD的長度是4.55米，管腔的直徑是3mm。,環(huán)氧乙烷PCD高分子/不銹鋼型,根據(jù)EN1422制作，適用于環(huán)氧乙烷滅菌器的過程監(jiān)測和效果驗證。采用不銹鋼和高分子材料，用于批量監(jiān)測。管腔長1.5米。直徑2mm。難度略低于前面的全不銹鋼裝置,低溫蒸汽甲醛滅菌PCD,符合EN14180和15424的規(guī)定用于低溫蒸汽甲醛滅菌的批量監(jiān)測和驗證。,過氧化氫氣體等離子體低溫滅菌PCD,將染菌不銹鋼針載體（長度：4cm、直徑：0.5mm）放置于聚四氟乙烯材質導管（長度2000mm，內徑：1mm；）中間，整個聚四氟乙烯材質導管用過氧化氫等離子體專用包裝袋包裝。2.放置于不銹鋼導管（長度500mm，內徑：1mm；）中間,過氧化氫氣體等離子體滅菌效果監(jiān)測用PCD,PCD在滅菌過程監(jiān)測中的應用PCD的選擇PCD的選擇與滅菌的方法、滅菌器類型和滅菌物品的種類有關，目前沒有適用于所有滅菌器及滅菌方法的萬能PCD，不同的滅菌物品，如：中空物、（燒杯、容器、管狀物）多孔物（包布，衣物、紡織品）無孔物（手術器械或實心物品）應使用相應的PCD。,PCD的放置位置,用于日常監(jiān)測滅菌過程的驗證相當于性能和運行的再確認，應使用確認時的檢測方法。因為PCD可以很容易、方便、快捷的使用，故可以用于日常監(jiān)測。不同類型PCD的應用16條手術巾生物驗證（挑戰(zhàn)）測試包及一次性使用化學指示卡測試包，可用于對織物類包裹和實心器械滅菌效果的監(jiān)測。,緊湊型PCD主要用于實心器材、簡單的腔體器材和輔料類物品滅菌效果的監(jiān)測螺旋型PCD主要用于低溫滅菌技術中對管腔類物品滅菌效果的監(jiān)測,衛(wèi)生部醫(yī)院消毒供應中心滅菌效果監(jiān)測標準（已通過專家評審）中規(guī)定：滅菌管腔類器械宜進行管腔PCD監(jiān)測；生物監(jiān)測每周一次可使用生物PCD或一次性標準生物測試包;小型滅菌器因無標準生物測試包，可使用PCD。,4.消毒劑濃度測試卡,戊二醛濃度濃度測試卡含氯消毒劑濃度測試卡過氧乙酸濃度測試卡二氧化氯濃度測試卡鄰苯二甲醛濃度測試卡（強生、鍵之素牌）,2%戊二醛濃度測試卡,適用于1.8%-2.2%戊二醛消毒劑最低有效濃度的檢測。根據(jù)接觸規(guī)定濃度的戊二醛后測試卡是否由白色變?yōu)榫鶆虻狞S色來檢測戊二醛的含量。國內首家研制生產(chǎn)，有包裝專利。（單片獨立真空包裝，避免交叉污染）。,有效氯濃度試紙,適用于含氯消毒劑有效氯含量的檢測。測試范圍有效氯含量為20mg/L-1000mg/L。根據(jù)接觸規(guī)定濃度的有效氯，試紙變色情況，檢測含氯消毒劑的有效氯含量。,過氧乙酸濃度測試卡,濃度范圍0.52000mg/L,二氧化氯濃度測試卡,標準比色卡范圍：5ppm-10ppm-30ppm-50ppm-100ppm-200ppm-300ppm-500ppm二氧化氯殘留濃度范圍：0.2-10ppm反應顏色為淺藍藍色深藍藍黑-到黑色反應顏色容易比對。,鄰苯二甲醛濃度檢測卡,美國強生公司CidexOPA濃度測試條健之素牌鄰苯二甲醛濃度檢測卡I型北京長江脈醫(yī)藥科技有限責任公司,5.中和劑,定義：在微生物殺滅試驗中，用以消除試驗微生物與消毒劑的混懸液中和微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。,中和劑鑒定試驗方法,中和劑對消毒劑的中和作用,中和劑鑒定試驗的目的,在消毒劑殺菌試驗中,消毒劑除對微生物具有殺滅作用外，也具有一定抑制作用,為了正確判斷其殺菌效果,必須排除殘留消毒劑對微生物的抑制作用,從而使其在復蘇培養(yǎng)基中生長繁殖，獲得正確試驗結果。,理想的中和劑的條件,1.能有效地中和相應的消毒劑。2.中和作用迅速。3.中和劑及其與消毒劑的中和產(chǎn)物對微生物無不良影響。4.中和劑與消毒劑不應有協(xié)同殺菌作用。5.對培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分無破壞作用，不與培養(yǎng)基形成對微生物有害的產(chǎn)物，不影響培養(yǎng)基的透明度。,常用中和劑配方,季銨鹽類消毒劑的中和劑吐溫8030ml皂角苷1g組氨酸1g色氨酸1g0.03moLPBS至1L,常用中和劑配方,葡萄糖酸氯己定類消毒劑的中和劑吐溫8030ml卵磷脂3g組氨酸1g0.03moLPBS至1L,常用中和劑配方,PVP碘伏或含氯類消毒劑的中和劑吐溫8030ml卵磷脂3g組氨酸1g硫代硫酸鈉1g牛血清白蛋白lyophilized1g0.03moLPBS至1L,常用中和劑配方,酚類消毒劑的中和劑吐溫8030ml卵磷脂3g組氨酸1g硫代硫酸鈉5g0.03moLPBS至1L,6.采樣液,含0.1%吐溫80的0.03mol/L磷酸鹽緩沖液含0.1%吐溫80的生理鹽水含相應中和劑的0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水壓力蒸汽滅菌后備用,7.規(guī)格板和棉拭子,規(guī)格板內框面積為55cm的不銹鋼框棉拭子脫脂棉纏牢竹棒，脫脂棉直徑大于0.5cm，長度大于2.0cm,二、醫(yī)院消毒滅菌效果監(jiān)測方法,采樣方法:直接用平板采樣、用棉簽采樣、用沖洗過濾器采樣培養(yǎng)方法：培養(yǎng)基、接種方法、培養(yǎng)溫度時間、結果記錄、結果評價,（一）采樣方法（主要依據(jù)GB15982-2012醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準）,器材1.采樣器：選擇六級撞擊式空氣采樣器2.平板：普通營養(yǎng)瓊脂平板(90mm)3.規(guī)格板:內框面積為55cm的不銹鋼框4.保溫箱：內有制冷劑的保溫箱5.采樣液或洗脫液：無菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水或含相應中和劑的0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水,（一）采樣方法,6.棉拭子：脫脂棉纏牢竹棒，脫脂棉直徑大于0.5cm，長度大于1.0cm壓力蒸汽滅菌后備用7.無菌注射器:100ml注射器8.無菌試管：18180mm9.無菌吸管1ml、5ml、10ml10.三角燒瓶250ml、500ml,采樣操作方法1.空氣采樣,（1）采樣時間類環(huán)境在潔凈系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動前采樣；、類環(huán)境在消毒或規(guī)定的通風換氣后與從事醫(yī)療活動前采樣。（2）采樣方法類環(huán)境選擇空氣采樣器法，采樣時，將六級撞擊式空氣采樣器置于室內中央0.8m1.5m高度，按采樣器使用說明書操作，每次采樣時間不應超過30min。房間大于10m2者，每增加10m2增設一個采樣點。然后蓋上平皿蓋，立即放入保溫箱，及時送檢。,1.空氣采樣（續(xù)）,、類環(huán)境采用平板暴露法：室內面積30m2，設內、中、外對角線3點，內、外點應距墻壁1m處；室內面積30m2，設4角及中央5點，4角的布點部位應距墻壁1m處。將普通營養(yǎng)瓊脂平板(90mm)放置各采樣點，采樣高度為距地面0.8m1.5m；采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露規(guī)定時間，類環(huán)境暴露15min，、類環(huán)境暴露5min，然后蓋上平皿蓋，立即放入保溫箱，及時送檢。,2.物體表面采樣,（1）采樣時間潛在污染區(qū)、污染區(qū)消毒后采樣。清潔區(qū)根據(jù)現(xiàn)場情況確定。（2）采樣面積被采表面100cm2，取全部表面；被采表面100cm2，取100cm2。（3）采樣方法用5cm5cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有無菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉動棉拭子，連續(xù)采樣14個規(guī)格板面積，剪去手接觸部分，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體采樣。若采樣物體表面有消毒劑殘留時，采樣液應使用含相應中和劑的采樣液。,3.醫(yī)務人員手衛(wèi)生采樣,（1）采樣時間手衛(wèi)生后，在接觸病人或從事醫(yī)療活動前采樣。（2）采樣面積取雙手指曲面從指跟到指端來回涂擦各兩次，按一只手涂擦面積平均約30cm2（3）采樣方法將浸有采樣液（若采樣時手上有消毒劑殘留，采樣液應含相應中和劑）的棉拭子一支在雙手指曲面從指跟到指端來回涂擦各兩次，并隨之轉動采樣棉拭子，然后以無菌操作方式，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管內，立即放入保溫箱，及時送檢。,4.醫(yī)療器材采樣,（1）采樣時間在消毒或滅菌處理后，存放有效期內采樣（2）采樣面積可用破壞性方法取樣的，如一次性輸液（血）器、注射器和注射針等按照中華人民共和國藥典無菌檢查法采樣不可用破壞性方法取樣的，不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器材，取全部表面或不少于100cm2；,（3）滅菌醫(yī)療器材采樣方法,可用破壞性方法取樣的，如一次性輸液（血）器、注射器和注射針等按照中華人民共和國藥典無菌檢查法進行。對不能用破壞性方法取樣的，應在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內或隔離系統(tǒng)中，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹，采樣取全部表面或不少于100cm2；然后以無菌操作方式，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管內，立即放入保溫箱內，及時進行無菌檢查（消毒技術規(guī)范2.1.9.2）。,（4）牙科手機采樣：應在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內或隔離系統(tǒng)中，將每支手機分別置于含20mL25mL采樣液的無菌大試管（內徑25mm）中，液面高度應大于4.0cm，于旋渦混合器上洗滌震蕩30s以上，及時進行無菌檢查（消毒技術規(guī)范2.1.9.2）。,（5）消毒醫(yī)療器材采樣可整件放入無菌試管的，用洗脫液浸沒后振蕩30s以上?？捎闷茐男苑椒ㄈ拥?，在100級潔凈工作臺稱取1g10g樣品，放入裝有10mL采樣液的試管內進行振蕩洗脫。對不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器材，在100級潔凈實驗室或工作臺，用浸有采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，全部表面（小于100cm2）或取100cm2（大于100cm2），然后以無菌操作方式，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有10mL采樣液的試管內進行振蕩洗脫。,（6）消毒后內鏡采樣取清洗消毒后內鏡，用無菌注射器抽取50mL含相應中和劑的洗脫液，以無菌操作方式，從活檢口注入沖洗內鏡管路，用100ml大試管在活檢通道出口全量收集洗脫液振蕩混勻，然后進行檢測。,（7）使用中的消毒液染菌量檢查采樣方法采樣時間正在使用的消毒劑用無菌吸管按無菌操作方法吸取1.0mL使用中的消毒劑，加入到含9mL相應中和劑的試管中。,（8）醫(yī)院污水采樣方法按GB18466規(guī)定采樣時間消毒前后采樣量至少500ml用滅菌刻度量杯接取污水500ml加入到2個500ml滅菌三角瓶中，若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即加入終濃度為0.1硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯，立即放入保溫箱，及時送檢。,（二）接種與培養(yǎng)方法,用平板采樣的，或自含式生物指示物直接放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。用棉簽采樣的，分別取1ml振蕩洗脫后樣液，以傾注法接種2個平皿，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。直接采的液體樣品（如醫(yī)院污水等），振蕩混勻，分別取1ml樣液，以傾注法接種2個平皿，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。需要過濾的，用細菌過濾器過濾后，將濾膜有菌面朝上，貼于平板表面。對滅菌效果進行無菌檢驗，按消毒技術規(guī)范2.1.9.2無菌檢驗試驗進行。,無菌檢驗,實驗器材：需氧-厭氧菌培養(yǎng)基無菌試驗用真菌培養(yǎng)基無菌檢驗用洗脫液實驗室要求：百級潔凈實驗室或百級層流潔凈臺。對室內地板、桌面和實驗臺面擦拭消毒，將試驗用的培養(yǎng)基、洗脫液、供試品及其他需用器材擺放好后，開啟紫外線燈消毒1h。人員要求：穿戴無菌隔離衣，無菌帽子、口罩、鞋，用75%乙醇消毒雙手，戴無菌手套。,無菌檢驗采樣方法,輔料、手術衣等非管道類樣本，取兩個包裝，于不同部位剪取1cm3cm的樣片21片，每片放于一支含40ml培養(yǎng)基的試管中；輸液（血）器等管腔類樣本，在7個最小包裝中各選1支為樣本，以無菌注射器吸取510ml洗脫液注入管腔內，往返搖蕩5次，作為試驗樣本；注射針、針灸針、縫合針、棉簽等樣本直接放入試管中；注射器吸取采樣液，將注射器芯拉到全程，振搖5次；其他樣本用無菌棉試子涂抹法采樣，涂采面積不少于25cm2,無菌檢驗,以上樣本各接種5支需氧-厭氧菌培養(yǎng)基試管中和2支真菌培養(yǎng)基試管中，5ml以上注射器和輔料類的培養(yǎng)基為40ml，其余樣本均為15ml，在其中一支需氧-厭氧菌培養(yǎng)管中加入1ml金黃色葡萄球菌作為陽性對照。試驗開始前，取需氧-厭氧菌培養(yǎng)管和真菌培養(yǎng)管各1支，打開試管帽置實驗臺上直至實驗完畢，作為陰性對照。將陰性、陽性對照與試驗樣品一同培養(yǎng)，需氧-厭氧菌培養(yǎng)管置30-35培養(yǎng)5d，真菌培養(yǎng)管20-25培養(yǎng)7d；除陽性對照管外，樣本管、陰性對照管均無菌生長為滅菌合格。,內鏡消毒洗脫樣品的接種,將洗脫液充分混勻，取洗脫液1.0mL接種平皿，將冷至4045的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15mL20mL，搖勻，凝固后放361恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)（cfu/件）。將剩余洗脫液在無菌條件下采用濾膜（0.45m）過濾，將濾膜有菌面朝上接種于凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上（注意不要產(chǎn)生氣泡），置361溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。,內鏡室用水污染情況,多酶洗液清洗后EOW消毒后“無菌水”沖洗后,培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間,培養(yǎng)基對細菌繁殖體和芽孢，使用胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于消毒效果監(jiān)測；胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）或營養(yǎng)肉湯用于滅菌效果監(jiān)測。對真菌，使用沙堡瓊脂培養(yǎng)基或沙堡液體培養(yǎng)基。對嗜熱脂肪桿菌芽孢，使用溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。,培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間,對細菌繁殖體，監(jiān)測消毒效果，溫度361，分別培養(yǎng)48h對枯草桿菌黑色變種芽孢，監(jiān)測消毒或滅菌效果，溫度361，分別培養(yǎng)72h或7天對真菌，監(jiān)測消毒效果，溫度251，培養(yǎng)7天（GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生標準）對嗜熱脂肪桿菌芽孢，監(jiān)測滅菌效果56，培養(yǎng)7天。對自含式生物指示物，按廠家說明書進行。,結果的判定空氣消毒效果評價標準,醫(yī)務人員手消毒評價標準,衛(wèi)生手消毒后醫(yī)務人員手表面的菌落總數(shù)應10cfu/cm2外科手消毒后醫(yī)務人員手表面的菌落總數(shù)應5cfu/cm2,醫(yī)療器材消毒滅菌效果評價,高度危險性醫(yī)療器材應無菌。中度危險性醫(yī)療器材的菌落總數(shù)應20cfu/件（cfu/g或cfu/100cm2），不得檢出致病性微生物。低度危險性醫(yī)療器材的菌落總數(shù)應200cfu/件（cfu/g或cfu/100cm2），不得檢出致病性微生物。,使用中的消毒劑微生物污染測定,使用中消毒液的有效濃度應符合使用要求；連續(xù)使用的消毒液每天使用前應進行有效濃度的監(jiān)測。滅菌用消毒液的菌落總數(shù)應為0cfu/mL；皮膚黏膜消毒劑的菌落總數(shù)為：完整皮膚的消毒劑菌落總數(shù)應50cfu/mL；霉菌和酵母菌10cfu/mL；不得檢出致病菌。破損皮膚的消毒劑應無菌。其他使用中消毒液的菌落總數(shù)應100cfu/mL，不得檢出致病性微生物。,醫(yī)院污水處理,污水排放應符合GB18466要求。醫(yī)療機構污水排放標準值,三、其他監(jiān)測方法,（一）使用各種指示物和測定儀監(jiān)測滅菌效果的方法（二）紫外線強度檢測方法（三）ATP的檢測方法（四）使用各種消毒劑有效濃度測試卡檢測消毒劑濃度的方法,（一）使用各種指示物和測定儀監(jiān)測滅菌效果的方法WS310.3-2009醫(yī)院消毒供應中心第3部分：清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測標準,1.壓力蒸汽滅菌的監(jiān)測物理監(jiān)測法：每次滅菌應連續(xù)監(jiān)測并記錄滅菌時的溫度、壓力和時間等滅菌參數(shù)。溫度波動范圍在3以內，時間滿足最低滅菌時間的要求，同時應記錄所有臨界點的時間、溫度與壓力值，結果應符合滅菌的要求。,化學監(jiān)測法應進行包外、包內化學指示物監(jiān)測。具體要求為滅菌包包外應有化學指示物，高度危險性物品包內應放置包內化學指示物，置于最難滅菌的部位。如果透過包裝材料可直接觀察包內化學指示物的顏色變化，則不必放置包外化學指示物。通過觀察化學指示物顏色的變化，判定是否達到滅菌合格要求。采用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時，應直接將一片包內化學指示物置于待滅菌物品旁邊進行化學監(jiān)測。,生物監(jiān)測法應每周監(jiān)測一次，具體監(jiān)測方法為：將生物指示物置于標準試驗包的中心部位。標準試驗包由16條41cm66cm的全棉手術巾制成。制作方法：將每條手術巾的長邊先折成3層，短邊折成2層，然后疊放，制成23cm23cm15cm大小的測試包。經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌條件下取出標準試驗包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)561培養(yǎng)7d(自含式生物指示物按產(chǎn)品說明書執(zhí)行)，觀察培養(yǎng)結果。結果判定:陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，試驗組培養(yǎng)陰性，判定為滅菌合格。,緊急情況滅菌植入型器械時，可在生物PCD中加用5類化學指示物。5類化學指示物合格可作為提前放行的標志，生物監(jiān)測的結果應及時通報使用部門。B-D試驗預真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌器應每日開始滅菌運行前進行。B-D測試，B-D測試合格后，滅菌器方可使用。B-D測試失敗，應及時查找原因進行改進，監(jiān)測合格后，滅菌器方可使用。,2.干熱滅菌的監(jiān)測物理監(jiān)測法：每滅菌批次應進行物理監(jiān)測。監(jiān)測方法為將多點溫度檢測儀的多個探頭分別放于滅菌器各層內、中、外各點，關好柜門，由記錄儀中觀察溫度上升與持續(xù)時間。溫度在設定時間內均達到預置溫度，則物理監(jiān)測合格。化學監(jiān)測法：每一滅菌包外應使用包外化學指示物，每一滅菌包內應使用包內化學指示物，并置于最難滅菌的部位。對于未打包的物品，應使用一個或者多個包內化學指示物，放在待滅菌物品附近進行監(jiān)測。經(jīng)過一個滅菌周期后取出，據(jù)其顏色的改變判斷是否達到滅菌要求。,生物監(jiān)測法：應每周監(jiān)測一次，將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入無菌試管內（1片/管）。滅菌器與每層門把手對角線內，外角處放置2個含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關好柜門，經(jīng)一個滅菌周期后，待溫度降至80時，加蓋試管帽后取出試管。在無菌條件下，加入普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（5ml/管），361培養(yǎng)48h，觀察初步結果，無菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第7日。結果判定：陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，若每個指示菌片接種的肉湯管均澄清，判為滅菌合格；監(jiān)測方法見附錄B。,3.環(huán)氧乙烷滅菌的監(jiān)測物理監(jiān)測法：每次滅菌應連續(xù)監(jiān)測并記錄滅菌時的溫度、壓力和時間等滅菌參數(shù)。滅菌參數(shù)符合滅菌器的使用說明或操作手冊的要求?；瘜W監(jiān)測法：每個滅菌物品包外應使用包外化學指示物,作為滅菌過程的標志；每包內最難滅菌位置放置包內化學指示物，通過觀察其顏色變化，判定其是否達到滅菌合格要求。,生物監(jiān)測法：每滅菌批次應進行生物監(jiān)測，監(jiān)測方法為：用枯草桿菌黑色變種芽孢置于常規(guī)生物測試包內，對滅菌器的滅菌質量進行監(jiān)測。常規(guī)生物測試包放在滅菌器最難滅菌的部位（整個裝載滅菌包的中心部位）。滅菌周期完成后應立即將生物指示物從被滅菌物品中取出，361培養(yǎng)7d(自含式生物指示物應遵循產(chǎn)品說明)，觀察培養(yǎng)基顏色變化。結果判定：陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，試驗組培養(yǎng)陰性，判定為滅菌合格,4.過氧化氫等離子滅菌的監(jiān)測物理監(jiān)測法每次滅菌應連續(xù)監(jiān)測并記錄每個滅菌周期的臨界參數(shù)如艙內壓、溫度、過氧化氫的濃度、電源輸入和滅菌時間等滅菌參數(shù)。滅菌參數(shù)符合滅菌器的使用說明或操作手冊的要求?；瘜W監(jiān)測法每個滅菌物品包外應使用包外化學指示物,作為滅菌過程的標志；每包內最難滅菌位置放置包內化學指示物，通過觀察其顏色變化，判定其是否達到滅菌合格要求。生物監(jiān)測法應每天至少進行一次滅菌循環(huán)的生物監(jiān)測，監(jiān)測方法應符合國家的有關規(guī)定。,5.低溫甲醛蒸汽滅菌的監(jiān)測物理監(jiān)測法每滅菌批次應進行物理監(jiān)測。詳細記錄滅菌過程的參數(shù)，包括滅菌溫度、濕度、壓力與時間。滅菌參數(shù)符合滅菌器的使用說明或操作手冊的要求?；瘜W監(jiān)測法每個滅菌物品包外應使用包外化學指示物,作為滅菌過程的標志；每包內最難滅菌位置放置包內化學指示物，通過觀察其顏色變化，判定其是否達到滅菌合格要求。生物監(jiān)測法應每周監(jiān)測一次，監(jiān)測方法應符合國家的有關規(guī)定。,（二）紫外線強度檢測方法,紫外線輻照強度檢測時，對室內環(huán)境的要求：電壓為220V5V，溫度為2025，相對濕度為60%。輻射照度測定使用中的燈管，可在原裝置處進行測定。測定位置在燈管下方垂直距離1m的中心處。使用中30W普通直管型紫外線燈管的輻射照度值應不低于70W/cm2，低于此值者應予更換。,可同時檢測紫外線燈管,（三）ATP法測定方法1.清洗效果,使用后、清洗后和消毒后的采樣液（50ml裝在100ml的玻璃試管里），在手心拍打均勻，用移液器吸取50微升的樣液，置入微試管中，然后吸入50微升裂解液，輕輕拍打，5-10s后加入400微升的熒光素酶，放入儀器中讀值為M1，然后加入10微升的ATP標準品，讀值為M2，由儀器自動計算出ATP的amol值。,樣品ATP的計算,例如，ATP標準品為1015amol，10微升的標準品中含有ATP量為1010amol（10151010-6=1010amol），對應的RLU(相對吸光度值)為100RLU。當測試的樣品測得的吸光度值為50RLU時，對應樣品中ATP的含量為：X101050100=X1010X=0.51010amol注：amol=10-18mol,ATP檢測試劑,關于清洗效果的合格標準,ATP測定方法目前尚無標準，正在制定過程中可能考慮為2000amol/件？,2.ATP法測定細菌含量ATP消除劑,ATP水解酶,細胞裂解液即水解酶稀釋液,細菌外ATP消除劑,ATP消去劑（又稱體細胞消去劑）能夠裂解非細菌的細胞，并水解非細菌產(chǎn)生的游離ATP，消除細菌外ATP的干擾,待檢測樣品,器械表面可能殘留含ATP的細菌、細胞以及游離的ATP，用消去劑消除細菌外的ATP對檢測結果的影響,采樣及并消除非細菌細胞產(chǎn)生的ATP,3、采樣拭子放回試管，與ATP消除劑混合靜置10分鐘,1、試管中加細菌外ATP消除劑，并將潤濕拭子,細菌ATP,ATP水解酶,細菌外ATP,采樣及靜置過程中，ATP消除劑裂解非細菌的細胞，并水解細菌外的游離ATP；細菌ATP受到細胞壁的保護，免受水解,細菌裂解,細菌裂解液,不含游離ATP的拭子,細菌ATP,失活的ATP水解酶,被消除劑處理后不含游離ATP的拭子用細菌裂解液浸潤；細菌裂解液在中和ATP水解酶同時，將細菌裂解，釋放ATP,中和ATP水解酶并裂解細菌,ATP檢測液,熒光素酶,熒光素酶溶解液,熒光素酶檢測液,ATP存在情況下，檢測液中的熒光素酶將熒光素氧化，反應中的能量以光子的形式釋放；使用BT-112D熒光檢測儀可測定反應的相對發(fā)光值RLU，通過加入一定量的標準品可定量測定ATP的殘留量；,細菌ATP的化學發(fā)光檢測,ATP檢測液,含ATP的檢測管,反應管,檢測液跟ATP反應,檢測ATP標準品發(fā)光信號,ATP標準品,反應管,檢測管中添加一定量的ATP標準品，以減少環(huán)境對檢測結果的影響，并計算出樣品中ATP含量,更強光信號的反應管,細菌數(shù)計算,檢測管中ATP標準品添加前后的發(fā)光值變化,檢測過程中加入ATP標準品，以減少環(huán)境的影響；加入10ul的10-7M的ATP，相當于加入5105個細菌（210-18molATP/細菌)；細菌數(shù)=5105Ma/(Mb-Ma),ATP含量跟光信號呈線性關系,日本（龜甲萬）LUMITESTERATP熒光檢測儀,測定極限：10-15molATP/assay測定時間：10秒測試范圍：0to999,999RLU數(shù)據(jù)輸出：RLU數(shù)據(jù)存儲：2000組數(shù)據(jù)電源：5號電池2節(jié)（附帶）尺寸：6517532mm重量：235g（主機）,檢測步驟,1.用LuciPacPen涂抹棒涂抹需要檢測的區(qū)域。2.把涂抹棒放回原塑料管,按下頂部的激活頭，直到刺破試劑儲存室使液體流下。3.振蕩整個涂抹棒,使所有的液體流出儲存室，充分反應。4.把激活后的LuciPacPen試劑棒插入PD-20檢測儀，蓋好檢測室蓋。按下“確定”鍵后，等10秒鐘就可得到檢測結果。,檢測步驟,日本醫(yī)院衛(wèi)生環(huán)境