藥物分析生物堿類藥物的分析ppt課件

1、第六節(jié) 生物堿類藥物的分析,生物堿（alkaloids）是一類重要的天然有機(jī)化合物，多數(shù)具有復(fù)雜的氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)，生理活性顯著，多顯堿性, 絕大多數(shù)存在于植物體內(nèi)，已有數(shù)十種廣泛應(yīng)用于臨床。 中國藥典收錄的生物堿類化學(xué)藥物主要有苯烴胺類、托烷類、喹啉類、吲哚類、黃嘌呤類等,一）概述,二）常見藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,性狀,大部分由C、H、O、N等元素組成 多為結(jié)晶或非晶型固體 無色，少數(shù)為有色物質(zhì) 多具有苦味，個別味極苦而辛辣，一般無臭 固體多具有確定的熔點(diǎn)，部分具有揮發(fā)性或升華性,一）概述,多具有堿性，受電效應(yīng)及立體效應(yīng)等影響，強(qiáng)弱差異較大。 堿性順序為： 季銨堿 脂環(huán)胺

2、和脂肪胺 芳香脂胺 氨 芳胺 N-芳雜胺 環(huán)酰胺（近中性）； 嗎啡兼有兩性；茶堿顯酸性。 堿性的生物堿可利用堿性與酸成鹽，如鹽酸麻黃堿； 堿性極弱的生物堿，以游離狀態(tài)存在，如咖啡因和利血平,堿性,游離生物堿大都不溶或難溶于水，溶于或易溶于有機(jī)溶劑 堿性生物堿在稀酸溶液中成鹽而溶解。 生物堿的鹽類多易溶于水，不溶或難溶于有機(jī)溶劑,溶解性,多具旋光性。 中國藥典中對許多生物堿都規(guī)定了旋光度測定,旋光性,藥典收載藥物,中國藥典（2010年版）主要收載有麻黃堿、偽麻黃堿、秋水仙堿、阿托品、山莨菪堿、硫酸奎寧、奎尼丁、嗎啡、可待因、小檗堿、士的寧、長春堿、長春新堿、利血平、咖啡因、茶堿、毛果蕓香堿、川芎

3、嗪等常用生物堿類藥物,二）常見生物堿類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),1. 苯烴胺類生物堿,2. 托烷類生物堿,3. 喹啉類生物堿,4. 異喹啉類生物堿,5. 吲哚類生物堿,6. 黃嘌呤類生物堿,其它種類,1. 苯烴胺類生物堿,藥物結(jié)構(gòu),理化性質(zhì),鹽酸麻黃堿（ephedrine hydrochloride） 鹽酸偽麻黃堿（pseudoephedrine hydrochloride） 秋水仙堿（colchicine,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,苯烴胺類藥物結(jié)構(gòu),鹽酸麻黃堿 （ephedrine hydrochloride,白色針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭，味苦,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,鹽酸偽麻黃堿

4、（pseudoephedrine hydrochloride,苯烴胺類藥物結(jié)構(gòu),白色結(jié)晶性粉末，無臭、味苦,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,苯烴胺類藥物結(jié)構(gòu),秋水仙堿 （colchicine,淡黃色結(jié)晶性粉末,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,苯烴胺類藥物理化性質(zhì),性狀及溶解性,堿性,氨基醇雙縮脲反應(yīng),旋光性,紫外特征吸收,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,鹽酸麻黃堿水中易溶，乙醇中溶解，三氯甲烷和乙醚中不溶；鹽酸偽麻黃堿極易溶于水，易溶于乙醇，微溶于三氯甲烷；秋水仙堿無臭，遇光色漸變深，乙醇、三氯甲烷中易溶，水中溶解，乙醚中極微溶,苯烴胺類藥物理化性質(zhì),性狀及溶解性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分

5、析,麻黃堿和偽麻黃堿，堿性較強(qiáng)，易與酸成鹽； 秋水仙堿堿性很弱，不與酸成鹽,苯烴胺類藥物理化性質(zhì),堿性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿具有氨基醇結(jié)構(gòu)，可發(fā)生雙縮脲反應(yīng),苯烴胺類藥物理化性質(zhì),氨基醇雙縮脲反應(yīng),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,鹽酸麻黃堿為左旋體，50mg/ml溶液測定比旋度為3335.5；鹽酸偽麻黃堿為右旋體，50mg/ml溶液測定比旋度為61.062.5；秋水仙堿為左旋體， 10mg/ml溶液比旋度為425450,苯烴胺類藥物理化性質(zhì),旋光性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,苯烴胺類藥物理化性質(zhì),紫外特征吸收,鹽酸偽麻黃堿0.5mg/ml溶液在251、25

6、7、263nm波長處有最大吸收； 秋水仙堿在243與350nm波長處的吸光度比值為1.702.00,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,2. 托烷類生物堿,硫酸阿托品（atropine sulfate） 消旋山莨菪堿（raceanisodamine） 氫溴酸東莨菪堿（scopolamine hydrobromide,藥物結(jié)構(gòu),理化性質(zhì),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,硫酸阿托品 （atropine sulfate,托烷類藥物結(jié)構(gòu),無色結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，無臭,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,消旋山莨菪堿 （raceanisodamine,托烷類藥物結(jié)構(gòu),白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭，味苦,一、生物

7、堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,氫溴酸東莨菪堿 （scopolamine hydrobromide,托烷類藥物結(jié)構(gòu),無色結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，無臭，具有微風(fēng)化性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,托烷類藥物理化性質(zhì),溶解性,堿性,穩(wěn)定性,旋光性,莨菪酸反應(yīng),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,托烷類藥物理化性質(zhì),溶解性,硫酸阿托品水中極易溶解，乙醇中易溶；消旋山莨菪堿在乙醇或鹽酸中易溶，水中溶解；氫溴酸東莨菪堿水中易溶，乙醇中略溶，三氯甲烷中極微溶，乙醚中不溶,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,托烷類藥物理化性質(zhì),堿性,托烷類生物堿氮原子位于五元環(huán)內(nèi)，為叔氮 堿性較強(qiáng)，易與酸成鹽,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分

8、析,為莨菪醇和莨菪酸組成的酯類物質(zhì) 易于發(fā)生水解,托烷類藥物理化性質(zhì),穩(wěn)定性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,氫溴酸東莨菪堿為左旋體，50mg/ml溶液比旋度為2427；硫酸阿托品和消旋山莨菪堿均為消旋體，無旋光,托烷類藥物理化性質(zhì),旋光性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,水解生成莨菪酸，可為發(fā)煙硝酸硝化，在堿性醇溶液中呈現(xiàn)深紫色，后轉(zhuǎn)暗紅色，最后顏色消失（Vatili反應(yīng)）； 亦可與硫酸、重鉻酸鉀在加熱條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)而生成具有苦杏仁味的苯甲醛,托烷類藥物理化性質(zhì),莨菪酸反應(yīng),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,藥物結(jié)構(gòu),理化性質(zhì),3.喹啉類生物堿,硫酸奎寧（quinine sulfate）

9、 硫酸奎尼?。╭uinidine sulfate,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,硫酸奎寧 （quinine sulfate,白色細(xì)微的針狀結(jié)晶，輕柔，易壓縮，無臭，味極苦，遇光漸變色,喹啉類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,硫酸奎尼丁 （quinidine sulfate,喹啉類藥物結(jié)構(gòu),白色細(xì)針狀結(jié)晶,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,喹啉類藥物理化性質(zhì),溶解性,堿性,6位含氧的喹啉衍生物,旋光性,熒光特性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,溶解性,喹啉類藥物理化性質(zhì),硫酸奎寧，易溶于三氯甲烷-無水乙醇（21）的混合液，水、乙醇、三氯甲烷、乙醚中微溶。 硫酸奎尼丁，易溶于沸水，溶于三氯

10、甲烷、乙醇，水中微溶，不溶于乙醚,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,堿性,喹啉類藥物理化性質(zhì),均具有喹啉環(huán)和喹核堿，含有二個氮原子 喹啉氮為芳香氮，堿性較弱，不可與酸成鹽； 喹核氮為脂環(huán)氮，是叔氮，堿性較強(qiáng)，可與酸成鹽 1分子硫酸與2分子藥物成鹽,喹核氮,喹 啉 氮,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,喹啉類藥物理化性質(zhì),硫酸奎寧和硫酸奎尼丁是對映異構(gòu)體，僅喹核堿部分立體結(jié)構(gòu)不同，硫酸奎寧是左旋體，20mg/ml水溶液比旋度為237244；硫酸奎尼丁為右旋體，20mg/ml水溶液，比旋度為275290,旋光性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,喹啉類藥物理化性質(zhì),與氯水、氨水發(fā)生綠奎寧反應(yīng),6位含氧的

11、喹啉衍生物,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,喹啉類藥物理化性質(zhì),在稀酸條件下，均顯藍(lán)色熒光，可用于鑒別,熒光特性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,藥物結(jié)構(gòu),理化性質(zhì),4.異喹啉類生物堿,硫酸嗎啡（morphine sullfate） 鹽酸嗎啡（morphine hydrochloride） 磷酸可待因（codeine phosphate） 鹽酸小檗堿（berberine hydrochloride,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,硫酸嗎啡 （morphine sullfate,白色針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭，遇光易變質(zhì),異喹啉類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,鹽酸嗎啡 （morphi

12、ne hydrochloride,白色，有絲光的針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭，遇光易變質(zhì),異喹啉類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,磷酸可待因 （codeine phosphate,白色細(xì)微的針狀結(jié)晶性粉末，無臭，有風(fēng)化性,異喹啉類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,鹽酸小檗堿 （berberine hydrochloride,黃色結(jié)晶性粉末，無臭，味極苦,異喹啉類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,異喹啉類生物堿理化性質(zhì),溶解性,酸性和堿性,嗎啡生物堿的特征反應(yīng),還原性,小檗堿的呈色反應(yīng),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,溶解性,異喹啉類藥物理化性質(zhì),硫酸嗎啡與鹽酸嗎啡，在水

13、中溶解，乙醇中略溶，三氯甲烷和乙醚中不溶,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,酸性和堿性,異喹啉類藥物理化性質(zhì),嗎啡結(jié)構(gòu)中具有酚羥基和叔氮基團(tuán)，具有酸堿兩性，可溶于氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液，但堿性略強(qiáng)； 可待因分子中酚羥基被甲氧化，僅有叔氮基團(tuán)，堿性較強(qiáng)，不溶于氫氧化鈉溶液； 小檗堿具有-羥胺結(jié)構(gòu)，能形成醇式、季銨式、醛式互變異構(gòu)，季銨式最穩(wěn)定，并離子化呈強(qiáng)堿性，可與酸成鹽,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,異喹啉類藥物理化性質(zhì),嗎啡A環(huán)酚羥基具有弱還原性，易被氧化； 可待因不具有酚羥基，不易氧化 此性質(zhì)可用于區(qū)別嗎啡和可待因,還原性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,異喹啉類藥物理化性質(zhì),與甲醛試液的

14、Marquis反應(yīng) 與鉬硫酸試液的Frohde反應(yīng),嗎啡生物堿的特征反應(yīng),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,異喹啉類藥物理化性質(zhì),游離小檗堿可與丙酮結(jié)合為丙酮小檗堿，析出黃色沉淀；220加熱可分解為紅色的小檗紅堿；在酸性溶液中加漂白粉（或通氯氣）溶液即顯櫻紅色；與5沒食子酸水浴加熱，顯翠綠色,小檗堿的呈色反應(yīng),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,藥物結(jié)構(gòu),理化性質(zhì),5.吲哚類生物堿,硝酸士的寧（strychnine nitrate） 利血平（reserpine） 硫酸長春堿（vinblastine sulfate） 硫酸長春新堿（vincristine sulfate,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析

15、,硝酸士的寧 （strychnine nitrate,無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，無臭，味極苦,吲哚類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,利血平 （reserpine,白色或淡黃褐色的結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭，幾乎無味，遇光色漸變深,吲哚類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,硫酸長春堿 （vinblastine sulfate,白色或類白色的結(jié)晶性粉末，無臭，有引濕性，遇光或熱易變黃,吲哚類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,硫酸長春新堿 （vincristine sulfate,白色或類白色結(jié)晶性粉末，無臭，有引濕性，遇光或熱易變黃,吲哚類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)

16、構(gòu)分析,吲哚類生物堿理化性質(zhì),溶解性,堿性,士的寧,旋光性,利血平的還原性,利血平吲哚環(huán)-位氫,長春堿與長春新堿,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,溶解性,硝酸士的寧沸水中易溶，水中略溶，微溶于乙醇、三氯甲烷，乙醚中不溶；利血平三氯甲烷中易溶，丙酮或苯中微溶，不溶于水、甲醇、乙醇或乙醚；硫酸長春堿和長春新堿水中易溶，甲醇、三氯甲烷中溶解，乙醇中極微溶解,吲哚類生物堿理化性質(zhì),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,吲哚類生物堿理化性質(zhì),結(jié)構(gòu)中均具有吲哚氮和脂環(huán)氮。 吲哚氮與芳環(huán)共軛，堿性較弱，不與酸成鹽； 士的寧結(jié)構(gòu)中脂環(huán)氮為叔氮，堿性較強(qiáng)，可與硝酸成鹽； 利血平結(jié)構(gòu)中的脂環(huán)氮由于鄰近基團(tuán)存在立體位阻效

17、應(yīng)，堿性較弱，不能與酸成鹽，以游離藥物形式存在； 長春堿和長春新堿結(jié)構(gòu)中的脂環(huán)氮有兩個，均具有一定的堿性，故可與一分子二元酸成鹽,堿 性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,吲哚類生物堿理化性質(zhì),利血平為左旋體，10mg/ml三氯甲烷液比旋度為115131,旋光性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,吲哚類生物堿理化性質(zhì),用硫酸溶解后，可與重鉻酸鉀反應(yīng)呈現(xiàn)紫色,士的寧,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,吲哚類生物堿理化性質(zhì),易于氧化，產(chǎn)物為黃色的3,4-二去氫利血平，伴有黃綠色熒光，進(jìn)一步可氧化為3,4,5,6-四去氫利血平，具有藍(lán)色熒光,利血平的還原性,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,吲哚類生物堿理化

18、性質(zhì),較活潑，可與芳醛發(fā)生縮合反應(yīng)而顯色,利血平吲哚環(huán)-位氫,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,藥物結(jié)構(gòu),理化性質(zhì),6.黃嘌呤類生物堿,咖啡因（caffeine） 茶堿（theophylline） 氨茶堿（aminophylline,一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,咖啡因 （caffeine,白色或帶極微黃綠色、有絲光的針狀結(jié)晶，無臭，味苦，有風(fēng)化性,黃嘌呤類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,茶堿 （theophylline,白色結(jié)晶性粉末，無臭、味苦,黃嘌呤類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,氨茶堿 （aminophylline,白色或微黃色的顆粒或粉末，微有氨臭，味苦,黃嘌呤

19、類藥物結(jié)構(gòu),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,黃嘌呤類生物堿理化性質(zhì),溶解性,酸性和堿性,黃嘌呤生物堿的紫脲酸銨反應(yīng),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,溶解性,咖啡因在熱水或三氯甲烷中易溶，在水、乙醇或丙酮中略溶，乙醚中極微溶；茶堿在乙醇、三氯甲烷中微溶，水中極微溶，氫氧化鉀或氨溶液中易溶；氨茶堿在水中溶解，乙醚中不溶,黃嘌呤類生物堿理化性質(zhì),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,酸性和堿性,咖啡因不顯酸性； 茶堿7位N-H可解離顯酸性，可與乙二胺成氨-茶堿； 黃嘌呤環(huán)上N-9堿性極弱，近中性，游離堿可供藥用,黃嘌呤類生物堿理化性質(zhì),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,黃嘌呤生物堿的紫脲酸銨反應(yīng),咖啡因和茶

20、堿具有黃嘌呤結(jié)構(gòu)，與鹽酸和氯酸鉀水浴蒸干，遇氨氣生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色，加氫氧化鈉紫色消失,黃嘌呤類生物堿理化性質(zhì),一、生物堿類藥物性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析,一）生物堿一般鑒別試驗,1. 熔點(diǎn)測定,2. 生物堿顯色反應(yīng),3. 生物堿沉淀反應(yīng),4. 紫外分光光度法,5. 紅外分光光度法,6. 薄層色譜法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,固體生物堿類藥物大多具有一定的熔點(diǎn)， 某些生物堿藥物采用測定游離生物堿熔點(diǎn)的鑒別方法,1. 熔點(diǎn)測定,一）生物堿一般鑒別試驗,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,磷酸可待因的鑒別,取本品約0.2g，加水4ml溶解后，在不斷攪拌下滴加20氫氧化鈉溶液至出現(xiàn)白色沉淀，用玻璃棒摩擦器壁使

21、沉淀完全，濾過；沉淀用水洗凈，在105干燥1小時，測定熔點(diǎn)為154158,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常用顯色試劑有濃硫酸、濃硝酸、鉬硫酸、礬硫酸、甲醛-硫酸、硫酸鈰銨等 顯色反應(yīng)的機(jī)制可能是脫水、氧化、縮合等,一）生物堿一般鑒別試驗,2. 生物堿顯色反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,中國藥典（2010年版）中硝酸士的寧鑒別,取硝酸士的寧0.5mg，置蒸發(fā)皿中，加硫酸1滴溶解后，加重鉻酸鉀的結(jié)晶一小粒，周圍即顯紫色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿的顯色鑒別試驗,茶堿 磷酸可待因 鹽酸小檗堿 利血平 硝酸士的寧,硫酸長春新堿 硫酸長春堿 硫酸奎寧、奎尼丁 硝酸毛果蕓香堿,表1,表2,二、

22、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿的顯色鑒別試驗表1,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿的顯色鑒別試驗表2,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常用的生物堿沉淀劑有：碘化鉍鉀、碘化汞鉀、碘-碘試液、二氯化汞等 由于反應(yīng)專屬性不高，中國藥典（2010年版）僅對個別生物堿類藥物的鑒別使用此類反應(yīng),一）生物堿一般鑒別試驗,3. 生物堿沉淀反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,生物堿類藥物大都含有芳環(huán)、芳雜環(huán)以及共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，具有特征的紫外吸收，可供鑒別,一）生物堿一般鑒別試驗,4. 紫外分光光度法,中國藥典（2010年版）紫外鑒別方法,常見生物堿類藥物的紫外鑒別,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,中國藥典（201

23、0年版）紫外鑒別方法,1）對比吸收光譜的特征參數(shù)。 （2）對比吸收光譜的一致性。 （3）對比吸光度比值的一致性,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,常見生物堿類藥物的紫外鑒別,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,除硝酸士的寧、磷酸奎尼丁外均采用此法鑒別,一）生物堿一般鑒別試驗,5. 紅外分光光度法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,一）生物堿一般鑒別試驗,6. 薄層色譜法,實例分析】消旋山莨菪堿的鑒別,實例分析】消旋山莨菪堿的鑒別,分析,展開劑中添加堿性的氨溶液,顯色方法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,一）生物堿一般鑒別試驗,6. 薄層色譜法,實例分析】消旋山莨菪堿的鑒別,藥典方法,取本品與消旋山莨菪堿對照品，分別加

24、甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，照薄層色譜法，吸取上述溶液各10l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，用甲醇-丙酮-乙醇-濃氨液（450.60.4）為展開劑，展開后晾干，置紫外燈（254nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置應(yīng)與對照溶液的主斑點(diǎn)相同,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,中和硅膠的弱酸性，防止生物堿在薄層板上吸附太牢，導(dǎo)致嚴(yán)重拖尾 除氨溶液外，還可使用乙二胺,展開劑中添加堿性的氨溶液,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,采用GF254的熒光背景 普通硅膠板，可利用生物堿自身的顏色、熒光性質(zhì)以及與生物堿沉淀劑的顯色反應(yīng)顯色,顯色方法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,二）生物堿特征鑒別試驗,1.具

25、有氨基醇結(jié)構(gòu)生物堿的特征反應(yīng),2.托烷生物堿的特征反應(yīng),3. 6位含氧喹啉衍生物的特征反應(yīng),4.嗎啡生物堿的特征反應(yīng),5.吲哚生物堿的特征反應(yīng),6.黃嘌呤類生物堿的特征反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,二）生物堿特征鑒別試驗,1.具有氨基醇結(jié)構(gòu)生物堿的特征反應(yīng),雙縮脲反應(yīng),中國藥典（2010年版）鹽酸麻黃堿的鑒別,反應(yīng)原理,方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,反應(yīng)原理,Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，溶于乙醚層顯紫紅色，四水配合物溶于水層呈藍(lán)色,無水配合物及一水配合物,四水配合物,乙醚,水層,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,雙縮脲反應(yīng)方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,中國藥典（2010年版

26、）鹽酸麻黃堿的鑒別,取鹽酸麻黃堿約10mg，加水1ml溶解后，加硫酸銅試液2滴與20的氫氧化鈉溶液1ml，即顯藍(lán)紫色；加乙醚1ml，振搖后，放置，乙醚層即顯紫紅色，水層變?yōu)樗{(lán)色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,2.托烷生物堿的特征反應(yīng),莨菪酸，與發(fā)煙硝酸和醇制氫氧化鉀發(fā)生特征維他立（Vitali）反應(yīng)。 中國藥典（2005年版）對氫溴酸東莨菪堿、消旋山莨菪堿、硫酸阿托品均采用此法鑒別,二）生物堿特征鑒別試驗,Vitali反應(yīng),中國藥典附錄III-Vitali反應(yīng),反應(yīng)原理,方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,Vitali反應(yīng)原理,酸性條件下，托烷類生物堿酯鍵水解，生成莨菪酸，莨菪酸為硝酸硝化為三硝

27、基衍生物，在醇制氫氧化鉀堿性條件下，轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙孽臀镔|(zhì),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,Vitali方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,中國藥典附錄III-Vitali反應(yīng),取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇23滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,奎寧和奎尼丁在酸性溶液中，與溴水（或氯水）及氨水發(fā)生綠奎寧反應(yīng) 中國藥典（2010年版）采用此法鑒別上述藥物,二）生物堿特征鑒別試驗,3. 6位含氧喹啉衍生物的特征反應(yīng),綠奎寧 （Thalleioquin）反應(yīng),中國藥典（2010年版）硫酸奎寧鑒別,方程式,二、生物堿類藥物的鑒

28、別試驗,中國藥典（2010年版）硫酸奎寧鑒別,取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液5ml，加溴試液3滴與氨試液1ml，即顯翠綠色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,綠奎寧反應(yīng)方程式,翠綠色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,二）生物堿特征鑒別試驗,4. 嗎啡生物堿的特征反應(yīng),1） Marquis反應(yīng),2）Frohde反應(yīng),3）還原反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,嗎啡為含有酚羥基的異喹啉類生物堿，可與甲醛硫酸反應(yīng)，產(chǎn)物為具有特征紫紅色的醌式化合物,1） Marquis反應(yīng),方法：取本品約1mg，加甲醛硫酸試液1滴，即顯紫堇色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,嗎啡與鉬硫酸試液發(fā)生顯色反應(yīng)，呈紫色-藍(lán)色

29、-棕綠色的漸變。靈敏度為0.05g,2）Frohde反應(yīng),方法：取本品約1mg，加鉬硫酸試液0.5ml，即顯紫色，繼變?yōu)樗{(lán)色，最后變?yōu)樽鼐G色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,3）還原反應(yīng),原理,反應(yīng)式,方法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,原理,嗎啡酚羥基鄰位C2具有弱還原性，鐵氰化鉀試液可將其氧化生成偽嗎啡，自身被還原為亞鐵氰化鉀，再與三氯化鐵反應(yīng)生成普魯士藍(lán)（亞鐵氰化鐵,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,反應(yīng)式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,返 回,方法,方法：取本品約1mg，加水1ml溶解后，加稀鐵氰化鉀試液1滴，即顯藍(lán)綠色（與可待因區(qū)別,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,利血平吲哚環(huán)上的-氫原子較活潑，可與

30、香草醛縮合顯玫瑰紅色，與對-二甲氨基苯甲醛縮合顯綠色,二）生物堿特征鑒別試驗,5.吲哚生物堿的特征反應(yīng),官能團(tuán)反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,黃嘌呤生物堿與鹽酸及氯酸鉀加熱后，咪唑環(huán)開環(huán)，遇氨氣即縮合生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色,二）生物堿特征鑒別試驗,6. 黃嘌呤類生物堿的特征反應(yīng),紫脲酸銨反應(yīng),方程式,反應(yīng)方法,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,紫脲酸銨方程式,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,反應(yīng)方法,方法：取本品約10mg，加鹽酸1ml與氯酸鉀0.1g，置水浴上蒸干，遺留淺紅色的殘渣，遇氨氣即變?yōu)樽仙辉偌託溲趸c試液數(shù)滴，紫色即消失,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,相關(guān)鏈接】無機(jī)酸根鑒別試驗 藥典附

31、錄III（一般鑒別實驗,如硝酸士的寧應(yīng)顯硝酸鹽的鑒別反應(yīng) 鹽酸麻黃堿應(yīng)顯氯化物的鑒別反應(yīng) 硫酸阿托品應(yīng)顯硫酸鹽的鑒別反應(yīng) 磷酸川芎嗪應(yīng)顯磷酸鹽的鑒別反應(yīng)等,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,1.氯化物的鑒別反應(yīng),2.硫酸鹽的鑒別反應(yīng),3.硝酸鹽的鑒別反應(yīng),4.溴化物的鑒別反應(yīng),5.磷酸鹽的鑒別反應(yīng),無機(jī)酸根鑒別試驗 藥典附錄III（一般鑒別實驗,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,取供試品試液，加硝酸使成酸性后，加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加硝酸，沉淀復(fù)生成。如供試品為生物堿或其他有機(jī)堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進(jìn)行試驗。 取供試品少量，

32、置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使?jié)駶櫟牡饣浀矸墼嚰堬@藍(lán)色,三）無機(jī)酸根鑒別試驗,1.氯化物的鑒別反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,取供試品溶液，滴加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。 取供試品溶液，滴加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀（與硫代硫酸鹽區(qū)別,三）無機(jī)酸根鑒別試驗,2.硫酸鹽的鑒別反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,取供試品溶液，置試管中，加等量的硫酸，小心混合，冷后，沿管壁加硫酸亞鐵試液，使成兩液層，接界面顯棕色。取供試品溶液，加硫酸與銅絲

33、，加熱，即發(fā)生紅棕色的蒸汽。取供試品溶液，滴加高錳酸鉀試液，紫色不應(yīng)褪去（與亞硝酸鹽區(qū)別,三）無機(jī)酸根鑒別試驗,3.硝酸鹽的鑒別反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,取供試品溶液，加硝酸銀試液，即生成淡黃色凝乳狀沉淀；分離，沉淀能在氨試液中微溶，但在硝酸中幾乎不溶。取供試品溶液，滴加氯試液，溴即游離，加三氯甲烷振搖，三氯甲烷層顯黃色或紅棕色,三）無機(jī)酸根鑒別試驗,4.溴化物的鑒別反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,取供試品的中性溶液，加硝酸銀試液即生成淺黃色沉淀；分離，沉淀在氨試液或稀硝酸中均易溶解。取供試品溶液，加氯化銨鎂試液，即生成白色結(jié)晶性沉淀。取供試品溶液，加鉬酸銨試液與硝酸后，加熱即生成黃

34、色沉淀；分離，沉淀能在氨試液中溶解,三）無機(jī)酸根鑒別試驗,5.磷酸鹽的鑒別反應(yīng),二、生物堿類藥物的鑒別試驗,雙縮脲反應(yīng),藍(lán)紫色,鹽酸麻黃堿,Vitali反應(yīng),紫色,硫酸阿托品,硫酸奎寧,翠綠色,綠奎寧反應(yīng),鹽酸嗎啡,Marquis反應(yīng),紫紅色,硝酸士的寧,硫酸，重鉻酸鉀,紫色,二、生物堿類藥物的鑒別試驗,1. 利用旋光性差異,檢查硫酸阿托品中的莨菪堿 莨菪堿為左旋體，而阿托品無旋光性，要求硫酸阿托品供試品溶液（50mg/ml）的旋光度不得超過0.40,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,檢查硫酸阿托品中的其它生物堿（東莨菪堿、山莨菪堿和樟柳堿等） 堿性較阿托品弱，鹽酸鹽可為氨試液置換為游離生物堿，

35、不溶于水，鹽酸阿托品不游離，仍溶解于水。 取供試品溶液，加氨試液2ml，振搖，不得立即發(fā)生渾濁,2. 利用溶解性差異,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,3. 利用光學(xué)性質(zhì)差異,檢查利血平中的氧化產(chǎn)物。 利血平氧化變質(zhì)，產(chǎn)物具有熒光。 將供試品置紫外光燈（365nm）下檢視,不得顯明顯的熒光,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,二）利用雜質(zhì)和藥物化學(xué)性質(zhì)區(qū)別進(jìn)行檢查,1.中國藥典（2010年版）鹽酸嗎啡中特殊雜質(zhì)檢查,2.中國藥典（2010年版）硝酸士的寧中馬錢子堿的檢查,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,1.中國藥典（2005年版）鹽酸嗎啡中特殊雜質(zhì)檢查,阿撲嗎啡,罌粟酸,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢

36、查,阿撲嗎啡,利用阿撲嗎啡具有還原性，產(chǎn)物在水溶液中為綠色，乙醚中為寶石紅色，而藥物沒有此性質(zhì) 檢查時，規(guī)定乙醚層不得顯紅色，水層不得顯綠色，以此控制阿樸嗎啡限量,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,罌粟酸,利用罌粟酸可與三氯化鐵在微酸性條件下生成紅色的罌粟酸鐵，嗎啡沒有此現(xiàn)象 要求在加入2滴三氯化鐵試液后，溶液不得顯紅色,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,三）利用雜質(zhì)和藥物色譜學(xué)行為差異進(jìn)行檢查,1.薄層色譜法,2.高效液相色譜法,3.【實例分析,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,1.薄層色譜法檢查“特殊雜質(zhì),中國藥典（2010年版）對藥物中“其他生物堿”的檢查,雜質(zhì)對照品法，如氫溴酸山莨菪堿中其它

37、生物堿的檢查。 供試品溶液的自身稀釋對照法，如硫酸奎寧中其它金雞鈉堿的檢查。 雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法并用，如鹽酸嗎啡中其它生物堿的檢查,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,高效液相色譜法具有分離效能高、專屬性強(qiáng)、檢測靈敏等特點(diǎn)，其在雜質(zhì)檢查上的應(yīng)用，在近版藥典中有逐漸增加的趨勢， 如中國藥典（2010年版）對長春新堿中其他生物堿、磷酸川芎嗪中有關(guān)物質(zhì)的檢查,2.高效液相色譜法檢查特殊雜質(zhì),三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,3.【實例分析】生物堿中特殊雜質(zhì)色譜法檢查,薄層色譜檢查,高效液相色譜法檢查,硫酸奎寧其它金雞納堿,鹽酸嗎啡其它生物堿,薄層色譜法討論,硫酸長春新堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查

38、,磷酸川芎嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,附表-藥典中常見生物堿特殊雜質(zhì)及檢查方法,硫酸阿托品 氫溴酸東莨菪堿 鹽酸偽麻黃堿 硫酸奎寧 硫酸奎尼丁,表1,表2,表3,鹽酸嗎啡 硫酸嗎啡 磷酸可待因 鹽酸小檗堿 硝酸士的寧 利血平,硫酸長春新堿 硫酸長春堿 咖啡因 茶堿 氨茶堿 硝酸毛果蕓香堿 磷酸川芎嗪,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,藥典中常見生物堿特殊雜質(zhì)及檢查方法 表1,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,藥典中常見生物堿特殊雜質(zhì)及檢查方法 表2,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,藥典中常見生物堿特殊雜質(zhì)及檢查方法 表3,三、生物堿類藥物的特殊雜質(zhì)檢查,一）非水滴定法,二）提

39、取酸堿滴定法,中國藥典(2010年版)常用生物堿藥物含量測定方法一覽表,三）酸性染料比色法,四）紫外分光光度法,五）高效液相色譜法,四、生物堿類藥物的含量測定,一）非水滴定法,1. 高氯酸法基本原理,2. 一般方法,3. 滴定注意事項,實例分析,相關(guān)鏈接,四、生物堿類藥物的含量測定,1.高氯酸滴定法基本原理,高氯酸置換出與生物堿結(jié)合的較弱的酸的反應(yīng),BH+A-：表示生物堿鹽類； HA：表示被置換出的弱酸,四、生物堿類藥物的含量測定,不同HA在醋酸中的酸性情況如示： HClO4 HBr H2SO4 HCl HSO4 HNO3 H3PO4及其它弱酸,四、生物堿類藥物的含量測定,2. 一般方法,除另

40、有規(guī)定外，精密稱取供試品適量消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）約8ml，加冰醋酸1030ml使溶解，加各品種項下規(guī)定的指示液12滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。終點(diǎn)顏色應(yīng)以電位滴定時的突躍點(diǎn)為準(zhǔn)，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正,四、生物堿類藥物的含量測定,3. 滴定注意事項,1）方法的適用對象,2）不同酸根的影響,硝酸鹽,磷酸鹽及有機(jī)酸鹽,氫鹵酸鹽,硫酸鹽,3）滴定終點(diǎn)的指示方法,4）滴定劑的注意事項,四、生物堿類藥物的含量測定,1）方法的適用對象,適于Kb10-8的有機(jī)堿、有機(jī)酸的堿金屬鹽的含量測定。 Kb為10-810-10，宜選冰醋酸作溶劑； Kb為10-1010-12時，選用

41、冰醋酸與醋酐的混合溶劑； Kb10-12，選擇醋酐作溶劑。 如咖啡因（Kb10-14.15）的含量測定選擇醋酸和醋酐的混合溶劑,四、生物堿類藥物的含量測定,2）不同酸根的影響,磷酸鹽及有機(jī)酸鹽,在冰醋酸中酸性極弱，不干擾高氯酸滴定，故可直接滴定,四、生物堿類藥物的含量測定,2）不同酸根的影響,氫鹵酸鹽,在醋酸中酸性較強(qiáng)，反應(yīng)不能完全 藥典規(guī)定生物堿的氫鹵酸鹽不可直接滴定 需加入5醋酸汞冰醋酸試液35ml后，使其生成在醋酸溶劑中難解離的鹵化汞，再進(jìn)行滴定，此時可反應(yīng)完全 Hg(Ac) 2 2BH+X- HgX2 + 2BHX,四、生物堿類藥物的含量測定,2）不同酸根的影響,硝酸鹽,可直接滴定 硝

42、酸有較強(qiáng)的氧化性，可氧化指示劑結(jié)晶紫 硝酸鹽不宜用結(jié)晶紫作指示劑，改用電位法指示終點(diǎn)。 電位滴定時用玻璃電極作為指示電極，飽和甘汞電極（玻璃套管內(nèi)裝氯化鉀的飽和無水甲醇溶液）為參比電極,四、生物堿類藥物的含量測定,2）不同酸根的影響,硫酸鹽,硫酸在醋酸中酸性較弱，是一元酸 只能被置換為HSO4，僅滴定至硫酸氫鹽為止。 當(dāng)生物堿的硫酸鹽分子中具有不同堿性的氮原子時，反應(yīng)的定量關(guān)系需格外注意,四、生物堿類藥物的含量測定,3）滴定終點(diǎn)的指示方法,終點(diǎn)判定有電位法和指示劑法二種。 硝酸鹽類采用電位法 其余生物堿、有機(jī)堿性藥物的終點(diǎn)判定多使用指示劑法。 常用指示劑為結(jié)晶紫,四、生物堿類藥物的含量測定,結(jié)

43、晶紫終點(diǎn)指示,不同的堿及鹽，終點(diǎn)顏色有較大差異。 終點(diǎn)顏色呈現(xiàn)的變化為紫、藍(lán)、藍(lán)綠、綠、黃。 一般堿性較強(qiáng)的藥物，終點(diǎn)為藍(lán)色，如硫酸阿托品； 堿性中等的藥物，為藍(lán)綠色或綠色，如硫酸奎寧； 堿性較弱的則以黃綠或黃色為終點(diǎn)顏色，如咖啡因,四、生物堿類藥物的含量測定,常見生物堿非水滴定法終點(diǎn)判定,四、生物堿類藥物的含量測定,4）滴定劑的注意事項,冰醋酸具有揮發(fā)性，且體積膨脹系數(shù)較大，長期貯存或溫度變化均影響濃度，故高氯酸的醋酸滴定液需根據(jù)溫度變化校正，使用時與標(biāo)定時的溫度差超過10則需重新標(biāo)定； 冰醋酸和高氯酸中含有微量水分，可干擾突躍，配制高氯酸滴定液時需加入計算量的醋酐； 濃高氯酸與醋酐混合會引

44、起爆炸，配制時應(yīng)將高氯酸用冰醋酸稀釋后，再加醋酐,四、生物堿類藥物的含量測定,一）非水酸堿滴定法,實例分析,中國藥典（2010）鹽酸麻黃堿原料的含量測定,中國藥典（2010）常見生物堿硫酸鹽的含量測定,硫酸阿托品原料的含量測定,硫酸奎寧的含量測定,硫酸奎寧片的含量測定,硫酸奎寧含量測定小結(jié),四、生物堿類藥物的含量測定,方法：取本品約0.15g，精密稱定，加冰醋酸10ml，加熱溶解后，加醋酸汞試液4ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯翠綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正 1mol的鹽酸麻黃堿與1mol的高氯酸反應(yīng)，每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于2

45、0.17mg的C10H15NOHCl,中國藥典鹽酸麻黃堿原料的含量測定,四、生物堿類藥物的含量測定,四、生物堿類藥物的含量測定,反應(yīng)式,含量計算,含量（,四、生物堿類藥物的含量測定,V：供試液消耗高氯酸的體積； V0: 空白試驗驗消耗的高氯酸的體積； F: 高氯酸（0.1mol/L）濃度校正系數(shù)； W：供試品取量,硫酸阿托品原料的含量測定,方法：取本品約0.5g，精密稱定，加冰醋酸與醋酐各10ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液12滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯純藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。 硫酸鹽在醋酸中僅滴定至硫酸氫鹽，1mol的硫酸阿托品可與1mol的高氯酸反應(yīng)，每1m

46、l高氯酸滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于67.68mg的(C17H23NO3)2H2SO4,C17H23NO3)2H2SO4 HClO4 C17H23NO3H+ClO4 C17H23NO3H+HSO4,四、生物堿類藥物的含量測定,硫酸奎寧的含量測定,藥典方法,方程式,分析,四、生物堿類藥物的含量測定,藥典方法,取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml與結(jié)晶紫指示液l2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍(lán)綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正,四、生物堿類藥物的含量測定,分析,硫酸奎寧為2分子喹核堿與1分子硫酸的鹽， 高氯酸只能與其中1個喹核氮發(fā)生反應(yīng)，置換

47、出硫酸氫根； 奎寧具有的喹啉氮，在醋酸溶劑下，可為高氯酸滴定,四、生物堿類藥物的含量測定,方程式,C20H24N2O2)2H2SO4 3HClO4 (C20H24N2O22H+)2ClO4 (C20H24N2O22H+)HSO4ClO4 喹啉氮被高氯酸滴定 喹核堿硫酸鹽被高氯酸滴定,滴定時，1mol的硫酸奎寧可與3mol的高氯酸反應(yīng)。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于24.90mg的C20H24N2O2)2H2SO4,四、生物堿類藥物的含量測定,硫酸奎寧片的含量測定,藥典方法,方程式,分析,四、生物堿類藥物的含量測定,藥典方法,取本品10片，除去包衣后，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適

48、量(約相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g)，置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加三氯甲烷50ml，振搖10分鐘，靜置，分取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5m1與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正,四、生物堿類藥物的含量測定,分析,硫酸奎寧片需采用堿化及三氯甲烷提取以與賦型劑等干擾成分分離。 強(qiáng)堿溶液使其堿化為奎寧游離堿，1分子硫酸奎寧生成2分子奎寧游離堿，喹啉氮和喹核氮此時均可與高氯酸反應(yīng)，1mol的硫酸奎寧可消耗4mol的高氯酸,四、生物堿類藥物的含量測定,方程

49、式,C20H24N2O2)2H2SO4 2NaOH 2C20H24N2O2 Na2SO4 2H2O 2C20H24N2O2 4HClO4 2(C20H24N2O22H+)2ClO4 硫酸奎寧片劑分析的滴定度不同于原料藥，每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于19.57mg的(C20H24N2O2)2H2SO42H2O,四、生物堿類藥物的含量測定,硫酸奎寧含量測定小結(jié),硫酸奎寧原料 1mol的硫酸奎寧可與3mol的高氯酸反應(yīng) 硫酸奎寧片 1mol的硫酸奎寧片可與4mol的高氯酸反應(yīng),四、生物堿類藥物的含量測定,1. 非水溶劑的種類,1）酸性溶劑?？娠@著地增強(qiáng)有機(jī)弱堿的堿度，最常用的酸性溶

50、劑為冰醋酸。 （2）堿性溶劑 可顯著地增強(qiáng)有機(jī)弱酸相對酸度，最常用的堿性溶劑為二甲基甲酰胺。 （3）兩性溶劑 兼有酸、堿兩種性能，最常用的溶劑為甲醇。 （4）惰性溶劑 這一類溶劑沒有酸、堿性，如苯、三氯甲烷,四、生物堿類藥物的含量測定,返 回,二）提取酸堿滴定法,1.基本原理,2.測定方法及討論,簡述,四、生物堿類藥物的含量測定,簡述,堿性較強(qiáng)的生物堿（pKb 69）的鹽類，水相即可達(dá)到明顯的滴定突躍。經(jīng)堿性試劑堿化、有機(jī)溶劑提取后，可采用直接酸堿滴定法測定含量，本方法尤其適于此類藥物制劑的含量測定,四、生物堿類藥物的含量測定,二）提取酸堿滴定法,1.基本原理,供試品溶于水或稀酸,堿性試劑,有

51、機(jī)溶劑,有機(jī)相,生物堿游離,水洗,混存的堿性試劑 和水溶性雜質(zhì),游離生物堿 有機(jī)相,無水硫酸鈉和西黃蓍膠,脫水,濾過,游離生物堿有機(jī)相,酸堿滴定法測定,四、生物堿類藥物的含量測定,可采用的酸堿滴定法形式,有機(jī)溶劑蒸干后，殘渣用中性乙醇溶解，酸滴定液直接滴定； 用過量的酸滴定液溶解，用堿滴定液回滴剩余的酸； 不蒸干有機(jī)溶劑，加入定量過量的酸滴定液使游離生物堿重新成鹽溶于水相，再用堿滴定液回滴水相,四、生物堿類藥物的含量測定,二）提取酸堿滴定法,2.測定方法及討論,實例分析】磷酸可待因片的含量測定,藥典方法,分析,1）常用堿化試劑,2）適宜提取溶劑及用量,3）滴定指示劑,四、生物堿類藥物的含量測定

52、,取本品15片（30mg規(guī)格）或25片（15mg規(guī)格），精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于磷酸可待因15g），置100ml量瓶中，加水適量使成混懸液，加0.25mol/L硫酸溶液20ml，時時振搖約30min，使磷酸可待因溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，置分液漏斗中，加氨試液使成堿性，用三氯甲烷振搖提取至少4次，第一次25ml，以后每次各15ml，至可待因提盡為止，每次得到的三氯甲烷液均用同一份水10ml洗滌，洗液用三氯甲烷5ml振搖提取，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）25ml，加熱使溶解，放冷，加甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉

53、滴定液（0.02mol/L）滴定，每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于8.488mg的磷酸可待因,磷酸可待因片的含量測定,四、生物堿類藥物的含量測定,提取酸堿滴定法分析,氨水是常用的使生物堿鹽堿化為游離生物堿的試劑 強(qiáng)度適中，pKb為4.76，不會造成生物堿分解或乳化現(xiàn)象，易于揮發(fā)除去，對酸滴定液的滴定不產(chǎn)生干擾,1）常用堿化試劑,四、生物堿類藥物的含量測定,提取酸堿滴定法分析,藥典常用的游離生物堿提取溶劑為三氯甲烷， 優(yōu)點(diǎn)：溶解度大，共存物質(zhì)不溶，不與水混溶，易于揮發(fā) 缺點(diǎn)：加熱可分解為鹽酸，不宜完全蒸干，不適于強(qiáng)堿性生物堿的提取和鹽酸小檗堿等可與三氯甲烷發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的藥物。 分4

54、次，體積一般為生物堿溶液體積的一半（首次）或1/4,2）適宜提取溶劑及用量,四、生物堿類藥物的含量測定,提取酸堿滴定法分析,甲基紅、溴酚藍(lán)、溴甲酚紫等在酸性區(qū)變色的指示劑,3）滴定指示劑,四、生物堿類藥物的含量測定,三）酸性染料比色法,1.基本原理,2.測定影響因素,反應(yīng)過程流程圖,含量測定方法,四、生物堿類藥物的含量測定,酸性染料是指一些具有酸性基團(tuán)的酸堿指示劑，如溴百里酚藍(lán)、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)、溴甲酚綠等，可在適宜條件下解離為陰離子（In）。生物堿類及堿性藥物可在適宜介質(zhì)中與H結(jié)合，生成陽離子（BH）。兩種離子可定量結(jié)合，生成易溶于有機(jī)溶劑，難溶于水的，有顏色的離子對（BHIn）。用有機(jī)溶劑

55、定量提取該有色離子對，測定該有色溶液的吸光度，計算藥物的含量,三）酸性染料比色法,1.基本原理,四、生物堿類藥物的含量測定,反應(yīng)過程,四、生物堿類藥物的含量測定,含量測定方法,使用有機(jī)溶劑定量提取該有色離子對，并在一定波長處測定該有色溶液的吸光度，計算藥物的含量。 分離出有機(jī)提取相，用堿化試劑堿化有機(jī)相，將離子對中的酸性染料釋放出來，用水提取In，測定水中染料的吸光度，間接計算出堿性藥物的含量。 硫酸阿托品、氫溴酸東莨菪堿的片劑和注射劑的含量測定均采用此法,四、生物堿類藥物的含量測定,三）酸性染料比色法,2.影響因素,1）試驗最佳pH值選擇,2）適宜的酸性染料及濃度的選擇,3）提取溶劑的選擇,

56、4）水分的干擾及排除,實例分析】硫酸阿托品注射劑的含量測定,四、生物堿類藥物的含量測定,三）酸性染料比色法,1）試驗最佳pH值選擇,最佳pH值應(yīng)當(dāng)能夠使有機(jī)堿性藥物全部以BH存在，而溶液中產(chǎn)生的In足夠與其定量結(jié)合。此值可通過藥物和染料的pK值及二者在有機(jī)相及水相的分配系數(shù)制定。 中國藥典多采用鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液,四、生物堿類藥物的含量測定,三）酸性染料比色法,2）適宜的酸性染料及濃度的選擇,生成的離子對在有機(jī)相中的溶解度足夠大，有色染料本身在有機(jī)相中的溶解度足夠小，離子對在所測定波長處有較大的吸收系數(shù)。 常用的酸性染料有溴麝香草酚藍(lán)（BTB）、溴酚藍(lán)（BPB）、溴甲酚紫（BCP）、溴甲酚綠

57、（BCG）和甲基橙。 其濃度應(yīng)保證足夠量，適當(dāng)增加濃度，可提高測定的靈敏度,四、生物堿類藥物的含量測定,三）酸性染料比色法,3）提取溶劑的選擇,常用的溶劑有三氯甲烷、二氯甲烷、苯、甲苯、四氯化碳等。 三氯甲烷因提取效率高、選擇性好，水中溶解度小，可形成氫鍵，最為常用,四、生物堿類藥物的含量測定,三）酸性染料比色法,4）水分的干擾及排除,嚴(yán)格避免水分進(jìn)入有機(jī)相， 水相中過量的有機(jī)染料會干擾測定結(jié)果， 水分，會使溶液混濁，使測定出現(xiàn)誤差。 待測有機(jī)相存在少許水分時，可采用加入脫水劑(如無水硫酸鈉)或用干燥濾紙過濾的方法除去,四、生物堿類藥物的含量測定,三）酸性染料比色法,實例分析】硫酸阿托品注射劑的含量測定,藥典方法,含量計算,四、生物堿類藥物的含量測定,精密量取本品適量（約相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，另取硫酸阿托品對照品25