實驗5-微生物大小及數(shù)量測定PPT課件

1、Central Laboratory of Biology,實驗五微生物大小及數(shù)量測定,微生物學實驗,2,課前提問與目的要求,課前提問,1.顯微測微尺測量微生物大小的原理是什么？ 2.測定過程中應注意哪些問題,目的要求,1. 學習并掌握使用顯微測微尺測定微生物大小的方法。 2. 掌握對不同形態(tài)細菌細胞大小測定的分類學基本要求，增強對微生物細胞大小的感性認識,3,基本原理,微生物細胞的大小是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。其測量工具有目鏡測微尺和鏡臺測微尺。鏡臺測微尺是中央部分刻標準刻尺的載玻片，其尺度總長為1mm，精確分為10個大格，每個大格又分為10個小格，共100小格，每一小

2、格長度為0.01mm，即10m,圖5-1 鏡臺測微尺中央部分及鏡臺測微尺校正目鏡測微尺,4,目鏡測微尺是一塊可放入接目鏡內的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，一般有等分為50小格和100小格兩種。測量時，需將其放在接目鏡中的隔板上，用以測量經(jīng)顯微放大后的細胞物象。由于不同顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合放大倍數(shù)不同，目鏡測微尺每小格在不同條件下所代表的實際長度也不一樣,基本原理,5,實驗用品,1.菌種：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和迂回螺菌的染色玻片標本。 2.試劑：香柏油，二甲苯。 3.儀器和其他用品：鏡臺測微尺，目鏡測微尺，普通光學顯微鏡，擦鏡紙等,6,方法步驟,目鏡測微尺的安裝 校正目鏡測

3、微尺 菌體大小的測定 測定完畢,7,1）使用鏡臺測微尺進行校正時，若一時無法直接找到測微尺，可先對刻尺外的圓圈線進行準焦后再通過移動標本推進器進行尋找。 2）細菌個體微小，在進行細胞大小測定時一般應盡量使用油鏡，以減少誤差。 3）細菌在不同的生長時期細胞大小有時會有較大變化，若需自己制樣進行細菌細胞大小測定時，應注意選擇處于對數(shù)生長期的菌體細胞材料,獲得本實驗成功的關鍵,8,注意事項,1.目鏡測微尺很輕、很薄，在取放時應特別注意防止使其跌落而損壞。 2.觀察時光線不宜過強，否則難以找到鏡臺測微尺的刻度；換高倍鏡和油鏡校正時，務必十分細心，防止接物鏡壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭,9,實驗報告,1.

4、結果 1）將目鏡測微尺校正結果填入表5-1中 表5-1 目鏡測微尺校正結果,目鏡放大倍數(shù),10,2）將各菌測定結果記錄填入表5-2中,注：球菌用直徑（寬度）表示細胞大小，桿菌和螺菌用寬度長度表示細胞大小,表5-2 金黃色葡萄球菌大小測定記錄,實驗報告,11,3）用表5-3對各菌測定結果進行計算和表述,注：球菌用直徑（寬度）表示細胞大小，桿菌和螺菌用寬度長度表示細胞大小,實驗報告,12,2. 思考題 1）為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？ 2）在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細菌的大小時，其測定結果是否相同？為什么,實驗報

5、告,13,第二部分 顯微鏡直接計數(shù)法測定微生物數(shù)量,課前提問,1.血球計數(shù)板的基本原理是什么？ 2.顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)缺點是什么,目的要求,1.明確顯微鏡計數(shù)的原理； 2.學習使用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法,14,基本原理,血細胞計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由4條槽構成3個平臺。中間較寬的平臺又被一段橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分9個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16小方格（圖5-2）；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計

6、數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為1mm，則每一個大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1mm，所以計數(shù)室的容積為0.1mm3（10-4mL,15,以25個中方格的計數(shù)板為例，設5個中方格中的總菌數(shù)為A， 菌液稀釋倍數(shù)為B，則,25104B,1mL菌液中的總菌數(shù),圖5-2 血球計數(shù)板側面及兩種類型的計數(shù)室,基本原理,16,圖 5-2 血球計數(shù)板,17,實驗用品,菌種：酵母菌懸液。 儀器及其他：普通光學顯微鏡，血細胞計數(shù)板，蓋玻片，擦鏡紙，酒精燈，無菌毛細管，三角燒瓶,方法步驟,菌懸液制備 檢查血球計數(shù)板 加樣品 顯微鏡計數(shù) 清洗,18,獲得本實驗成功的關鍵,1）活細胞是透明的，因此在進行顯微計數(shù)時應適當減低視野亮度，以增大反差。 2）進行顯微計數(shù)時應先在低倍鏡下尋找大方格的位置，找到計數(shù)室后將其移至視野中央，再換高倍鏡觀察和計數(shù),注意事項,1）使用酒精燈時注意不要被火焰灼傷或燒到衣物。 2）取放過微生物培養(yǎng)物的接種環(huán)在放回試驗臺前應記得再次在火焰上灼燒滅菌，以免造成實驗臺污染。 3）用接種環(huán)在培養(yǎng)基斜面上刮取時動作要輕，不要將瓊脂培養(yǎng)基一起刮起,19,實驗報告,1. 結果：表5-4 顯微計數(shù)結果,2. 思考題 1）根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應如何盡量減少誤差，力求