微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 公開(kāi)課

1、專(zhuān)題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng),一、課題目標(biāo),掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物,無(wú)菌技術(shù)、平板劃線法等基本操作,二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn),三、技能目標(biāo),一.微生物的類(lèi)群,微生物,原核類(lèi),真核類(lèi),非細(xì)胞類(lèi),細(xì)菌、支原體、放線菌、藍(lán)藻,個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,酵母菌、霉菌、食用菌,真菌,原生生物,顯微藻類(lèi)、原生動(dòng)物（如：草履蟲(chóng)、變形蟲(chóng)等,病毒,微生物的共同特點(diǎn),1.細(xì)菌的形態(tài),2.細(xì)菌的菌落,定義,單個(gè)或者少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼

2、可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落,特征,大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等,功能,每種細(xì)菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù),幾種菌落及其形態(tài),1.概念,人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),二.培養(yǎng)基,思考：微生物要生存繁殖，需要“吃”什么,2.培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),1.水 2.碳源（提供碳元素的物質(zhì)） 3.氮源（提供氮元素的物質(zhì)） 4.無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)鹽,3.培養(yǎng)基的類(lèi)型,1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基,區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。 注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂,單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生

3、長(zhǎng)繁殖,可以形成肉眼可見(jiàn)子細(xì)胞的群體菌落,固體培養(yǎng)基用途：用于微生物純化、計(jì)數(shù)、鑒定,液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn),表面生長(zhǎng),均勻混濁生長(zhǎng),沉淀生長(zhǎng),半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng),天然培養(yǎng)基,合成培養(yǎng)基,化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物,如：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基,化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基,2）按化學(xué)成分劃分,鑒別培養(yǎng)基,將某種類(lèi)微生物從混雜的微生物群體中分離出來(lái),用于鑒別不同類(lèi)型微生物的培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基,3）按用途劃分,選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較,從眾多微生物中分離所需的微生物,鑒別不同種類(lèi)的微生物,不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基,伊紅美籃培養(yǎng)基使大腸桿菌的菌落呈黑色，可以鑒別大腸桿菌,

4、分離自養(yǎng)型微生物,2.無(wú)菌范圍,實(shí)驗(yàn)操作空間消毒,操作者的手、衣著消毒,實(shí)驗(yàn)用具滅菌,實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程,3.無(wú)菌的方法,酒精燈旁操作,三.無(wú)菌技術(shù),防止外來(lái)雜菌的污染,1.無(wú)菌的意義,消毒與滅菌,1）消毒,2）滅菌,概念,較為溫和理化方法 殺死部分有害微生物,強(qiáng)烈的理化因素 殺死所有的微生物,2.無(wú)菌的方法,接種室內(nèi)空氣、接種箱、超凈工作臺(tái),紫外線消毒,實(shí)驗(yàn)者的手臂、實(shí)驗(yàn)臺(tái)等,化學(xué)藥劑消毒,牛奶等不宜高溫消毒滅菌的,巴氏消毒,日常食物、罐裝食品,煮沸消毒法,適用范圍,方法,1）消毒,培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)器材,高壓蒸汽滅菌,耐高溫需干燥的物品（玻璃器皿等,干熱滅菌,接種的工具、試管口、瓶口,灼燒滅菌,適用對(duì)

5、象,滅菌方法,灼燒滅菌,干熱滅菌箱,高壓蒸汽滅菌鍋,2）滅菌,請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2） 玻璃棒、試管、燒瓶 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手,思考,答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒,我們已經(jīng)對(duì)培養(yǎng)基和無(wú)菌技術(shù)有了一定的了解， 你能不能用培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng),思考,大腸桿菌的純化培養(yǎng),一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,四. 實(shí)驗(yàn)操作,二）純化大腸桿菌,1.計(jì)算,依配方計(jì)算各成分的用量,2.稱量,3.溶化,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋,牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解,取紙,蛋白胨、NaCl,瓊脂

6、、攪拌,補(bǔ)水定容,4.滅菌,5.倒平板,一）制備培養(yǎng)基,培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿干熱滅菌,計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板,一）制備培養(yǎng)基,1.將培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞,1,2,3,4,2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過(guò)火焰,3.用左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上皿蓋,4.等待平板冷卻凝固（約需5 10min）。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使皿蓋在下，皿底在上,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度,問(wèn)題討論,答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)

7、溫度下降到剛剛不燙手即可,2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰,答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基,3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置,4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么,答：防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染 避免培養(yǎng)基中水分過(guò)快蒸發(fā),答：最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。 防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,單個(gè)細(xì)胞,單個(gè)菌落,二）純化大腸桿菌,如何純化,接種常見(jiàn)方法,平板劃線法,如何分散成單個(gè)細(xì)胞,稀釋涂布平板法,微生物群,分散,1.平板劃線法,分區(qū)劃線法,連續(xù)劃線法,1）概念與原理,聚集的菌群,

8、連續(xù)劃線,稀釋分散,單個(gè)細(xì)胞,菌落,生長(zhǎng)繁殖,2)“平板劃線”實(shí)驗(yàn)操作,1）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么,問(wèn)題討論,殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者,接種結(jié)束后,殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來(lái)源上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞,每次劃線前,殺死接種環(huán)上原有微生物,取菌種前,目的,灼燒時(shí)期,2）在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線,答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種,3）在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線,答：線條

9、末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落,3個(gè)劃線平板,1個(gè)不劃線平板,重復(fù)實(shí)驗(yàn),空白對(duì)照,3）培養(yǎng),放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h,2.稀釋涂布平板法,菌液的梯度稀釋,涂布平板操作,1)概念與原理,聚集的微生物,單個(gè)細(xì)胞,菌液梯度稀釋,菌落,涂布平板,2)操作,生長(zhǎng)繁殖,系列梯度稀釋操作,9mL無(wú)菌水,9mL無(wú)菌水,9mL無(wú)菌水,9mL無(wú)菌水,9mL無(wú)菌水,9mL無(wú)菌水,注意：移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌；試管口和移液管離火焰12cm處,涂布平板操作,各梯度分別涂布3個(gè)平板,1個(gè)不涂布作空白對(duì)照,放入37恒

10、溫箱中培養(yǎng)12h24h,3）培養(yǎng),1.臨時(shí)保藏,試管固體斜面培養(yǎng)基上,4,2.長(zhǎng)期保存,菌種易被污染、變異,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,三 菌種的保存,36個(gè)月，轉(zhuǎn)移培養(yǎng),2分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請(qǐng)回答： (1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是_和_。 (2)想一想這種培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？ _,有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏ㄒ坏?，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng),葡萄糖,尿素,3.培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是() 化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法 A B C D,A,四 成果評(píng)價(jià),如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備,二）接種操作是否符合無(wú)菌要求,如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明