上傳人：s***

認(rèn)證信息

認(rèn)證類型：個(gè)人認(rèn)證

認(rèn)證主體：孫**（實(shí)名認(rèn)證）

IP屬地：天津

IP屬地：天津 上傳時(shí)間：2021-05-07 格式：DOCX 頁(yè)數(shù)：5 大?。?2.55KB 積分：15 舉報(bào) 版權(quán)申訴

1、仲景“炙”法原貌考證及炙甘草抗?jié)冏饔玫难芯勘尘案什菔菑堉倬白畛Ｓ玫乃幬镏?, 在傷寒論中記載了生甘草、炙甘 草兩種規(guī)格 , 其中炙甘草最為常用。傷寒論中雖記載了甘草的炮制方法 , 但對(duì) 炮制的過(guò)程沒(méi)有詳細(xì)的論述。現(xiàn)今所說(shuō)的炙甘草多指蜜炙甘草 , 本團(tuán)隊(duì)在考證甘草炮制沿革的過(guò)程中發(fā)現(xiàn) 漢代到清代出現(xiàn)過(guò)的甘草炮制方法有炙法、炒法、炮法等 6 種;用來(lái)炮制的輔料 有酥、鹽、醋、蜜等 11 種。其中以蜜炮制甘草的方法最早出現(xiàn)在唐代的千金 翼方中 ,而“蜜炙甘草”清代才出現(xiàn) , 仲景所用甘草是否為蜜炙甘草 ,仍存在疑問(wèn)。所以考證傷寒論中甘草炮制方法的原貌并對(duì)該炮制方法背后的科學(xué)道理 進(jìn)行探索 , 可

2、能對(duì)深入理解仲景辨證論治的學(xué)術(shù)思想、提高經(jīng)方運(yùn)用水平有重要 的意義。目的 1. 通過(guò)文獻(xiàn)考證出傷寒論中炙甘草炮制方法的原貌。2. 利用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)篩選出高溫炮制后甘草中抗?jié)兊挠行С煞?( 以下簡(jiǎn)稱有 效成分); 優(yōu)化能夠制備出活性最佳的有效成分的工藝 , 并對(duì)其形貌特征、光學(xué)性 質(zhì)、元素組成、表面活性基團(tuán)進(jìn)行分析 ; 研究有效成分的細(xì)胞毒性、抗?jié)冏饔?及作用機(jī)制。 3. 分析有效成分對(duì)生甘草水溶液中小分子溶出度的影響。評(píng)價(jià)其對(duì)生甘草抗?jié)冏饔眉跋嚓P(guān)作用機(jī)制的影響。方法1. 利用馬弗爐將 甘草高溫碳化 , 以透析的方法將碳化甘草的水煎液分離為透析袋內(nèi)和透析袋外兩 種溶液, 以急性酒精性胃潰瘍模

3、型初步評(píng)價(jià)兩種溶液的抗?jié)冏饔?,以發(fā)現(xiàn)其有效成分。2. 考察利用馬弗爐制備碳化甘草及其有效成分的溫度和時(shí)間 , 利用熒光光譜、 紅外光譜、紫外光譜初步觀察不同條件下制備的有效成分的光學(xué)性質(zhì)和所含基團(tuán)。以透射電子顯微鏡(TEM)觀察不同條件下制備的有效成分的粒徑大小、分布均勻 程度。以抗?jié)冃Ч麨樵u(píng)價(jià)指標(biāo) , 優(yōu)化碳化甘草中有效成分的制備條件。 3. 利用TEM高分辨透射電子顯微鏡(HRTEM、X射線衍射技術(shù)(XRD)分析碳化甘草中有效成分的形貌特征、粒徑大小和晶格間距 ; 利用熒光光譜、紅外光譜、紫外光譜 初步觀察光學(xué)性質(zhì)和所含基團(tuán)；利用XPS分析其的元素組成及表面基團(tuán)分布。以高效液相色譜法

4、分析碳化甘草中有效成分與生甘草所含成分的異同。 4.利用細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)不同濃度碳化甘草中有效成分溶液對(duì)細(xì)胞 活力的影響 , 以評(píng)價(jià)其是否有細(xì)胞毒性 , 初步獲取安全性參數(shù)。5. 利用急性酒精性胃潰瘍模型 , 評(píng)價(jià)有效成分的抗?jié)兓钚院妥饔脵C(jī)制。 6.利用高效液相色譜法探索碳化甘草中有效成分對(duì)生甘草中小分子溶出度的影響。運(yùn)用急性酒精性胃潰瘍模型考察 GRRC-NGs生甘草和生甘草與GRRC-NC的混合溶液的抗?jié)冏饔煤涂寡趸瘷C(jī)制 , 初步評(píng)價(jià)碳化甘草對(duì)生甘草藥效的影響。結(jié)果 1. 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 , 碳化甘草中有效成分為透析袋內(nèi)部分。透析袋內(nèi)溶液組潰瘍指數(shù)明顯低于模型組和透析袋

5、外溶液組 (P<；0.05),而透析袋外溶液與模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P 0.05)。組織觀察顯示：透析袋內(nèi)溶液 組小鼠的胃黏膜和組織損傷明顯輕于模型組和透析袋。2.制備方法考察結(jié)果顯示,以325C、350C、375C、400E制備的碳化甘草中有效成分 , 粒徑均在納米級(jí)別 , 我們將其命名為甘草炭納米類成分 (GRRC-NCs。)不同溫度制備的GRRC-NC所含活性基團(tuán)相似,溫度越高粒徑越小,其中375C、400E制備的GRRC-NC符合碳點(diǎn)的形貌特征。綜合電鏡結(jié)果和抗?jié)冃Ч?優(yōu)選375E作為GRRC-NC的制備溫度。進(jìn)一步考察以375r燒制的時(shí)間,結(jié)果表明燒制60min和80min時(shí)可以

6、制備出分散均勻, 粒徑適中的碳點(diǎn)。綜合GRRC-NC的形貌特征和抗?jié)兓钚?最終篩選出制備GRRC-NC的條件 為以馬弗爐375r燒制60min。3.GRRC-NCS勺成分分析：形貌特征:GRRC-NCs 為均勻分布的球體，其粒徑在2-10nm間均有分布，以5-6nm的最多，符合碳點(diǎn)的粒 徑要求。晶格間距為0.357nm,2 0角度為:23.02 光譜分析：熒光光譜結(jié)果顯 示,GRRC-NCS勺最大激發(fā)波長(zhǎng)為372nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為452nm紅外光譜顯示主要基團(tuán)有3400cm-1左右的寬大的吸收峰，為O-H特征 峰;2900cm-1處為C-H伸縮振動(dòng);1380cm-1處的尖銳吸收峰為C-H;

7、1100cm-1附近 的吸收峰推測(cè)為C-O,1000 cm-1以下的小吸收峰為C-H。紫外-可見(jiàn)吸收光譜圖顯示200nm-500nm間有寬大的吸收峰。200nm-220nm處的吸收峰為 N H S元素的n-廠躍遷，可能為O-H N-H等基團(tuán)。（3）元素組成及表面活性基團(tuán)分析：GRRC-NC中有C、ON、P、S等元素, 其中含量最高的兩種元素為C和O,分別占總原子百分比的53.95%和40.28%。沒(méi)有檢測(cè)到Ca Mg等金屬元素，說(shuō)明GRRC-NC中沒(méi)有金屬離子和鹽類。XPS全掃描譜中顯示的284.38eV、401.68eV和536.88eV處的峰分別對(duì)應(yīng)于 C 1s、N 1s 和 O 1s。C

8、 1s 可以分成 4個(gè)小峰, 分別為 284.8 eV 處的 C-C,285.8 eV 處的C-C-O,286.6 eV處的C-OH和 288.2eV處的C=O;O 1s可以分為3個(gè)小峰，分別為 531.2eV處的O=C,533.8 eV處的O-N和534.1eV處的O-Co N可以分為兩個(gè)小峰，分別是400.6eV處的C-NH2和403.2eV處的N-G(4)以同樣的色譜條件下對(duì)生甘草水煎液和 GRRC-NC水溶液進(jìn)行成分分析,結(jié)果表明原存在于生甘草水煎液高效液相色譜圖中甘草的有效成分的特征峰 ,在GRRC-NC水溶液的色譜圖中均沒(méi)有出現(xiàn)。4.當(dāng)GRRC-NC濃度為19.5卩g/mL-500

9、0卩g/mL時(shí),沒(méi)有表現(xiàn)出細(xì)胞毒性,反而會(huì)提高細(xì)胞的存活率。5.GRRC-NC有良好的抗?jié)冏饔?可以減輕酒精對(duì)胃黏膜和組織的氧化損傷。6.GRRC-NC與生甘草以不同的比例混合后的煎煮液中小分子溶出程度明顯 升高。當(dāng)GRRC-NC的含量為30%寸，小分子的溶出度最高。小鼠的胃潰瘍指數(shù)的結(jié) 果表明：相比模型組，GRRC-NC、生甘草、GRRC-NC與生甘草混合溶液均有良好的抗?jié)冏饔?, 其中混合溶液的抗?jié)冃Ч^好 (P<0.05)。GRRC-NCs生甘草和混合溶液可以降低小鼠血清和胃組織中的MDA和NO的含量(P&It;0.05),顯著提高血清中SOD勺含量(P<0.01),結(jié)果表明混合溶液 的抗氧化作用優(yōu)于GRRC-NC和生甘草,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論1.GRRC-NC是甘草高溫炮制過(guò)程中產(chǎn)生的新物質(zhì),利用馬弗爐375r燒制60min制備出的GRRC-NC為均勻分布的球體,其粒徑在2-10nm間均有分布,以5-6nm 的最多 , 符合碳點(diǎn)的粒徑要求。其熒光光譜中最大激發(fā)波長(zhǎng)為晶格間距為0.357nm,20角度為:23.02 。372nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為452nm主要元素為C N O,組成了 C-C、C-C-OC-OH、 C-H、 C=O、 O-H、 C-NH2、N-C等基團(tuán),不含金屬離子、鹽類和小分子