復(fù)合蛋白酶水解四棱豆條件的研究精品資料

1、Bffrto治且ro褐txE11 S?BFO畀S袒 -*r氐f1fcl|EFrWW5Tn四O (DBr牙 -*峯fr褐CLW呈FCD皿fKFsT曲r袒把T寄a篠r*r&frUO CXI sW靦1忙rKWoS州fU怒rS報rF褐rW怒a些芒KBTffr礫M.肝 姚HWrfWOM駅IIfflO d袒W6褐褐W變CXI) TS TrnWI二ITfCXI三四)UrFOCXIx OCXI1-3試驗方法131四棱豆蛋白質(zhì)溶液的制備稱取適量的四棱豆用水浸泡24h后剝皮按料水比17的比例加入蒸八、餾水用組織搗碎機打漿3miin然后用潔凈的紗布過濾將所得四棱豆蛋白質(zhì)濾液在電爐上加熱30min即自制的四棱豆蛋白質(zhì)

2、溶液待其/、冷卻后測疋其/、蛋白質(zhì)含量并儲存在冰箱中備用。13-2四棱豆蛋白質(zhì)溶液的酶解取適量的蛋白質(zhì)溶液用2m()I/L的NaOH和H2SO#溶液調(diào)節(jié)至試驗設(shè)疋的pH值加入疋量的復(fù)合蛋白酶放入設(shè)制一一一疋溫度的電熱恒溫水浴鍋中進行反應(yīng)水解至預(yù)疋時間后將酶解液沸水浴鈍化蛋白酶5miin。冷卻放置一一一段時間后再測疋氨基態(tài)氮含量。133水解度的測疋方法粗蛋白含量的測疋:采用GB/T155892:*008。氨基態(tài)氮測疋采用ZBK660387氨基態(tài)氮測疋法。水解度的計算方法:水解度(DH)=(游離氨基氮/總氮)X-00%0 0134酶解條件的單因素試驗(1)酶用量對酶解反應(yīng)的影響在pH值為6-0酶解

3、溫度50酶解時間為4h的酶解條件下以水解度為指標(biāo)設(shè)計酶用量為1%、2%、3%、4%、5%、6%考察不同復(fù)合蛋白酶用量(以蛋白質(zhì)溶液質(zhì)量為基準(zhǔn)下同)對酶解反應(yīng)的影響。酶解溫度對酶解反應(yīng)的影響在復(fù)合蛋白酶用量為5%pH值60酶解時間為4h的酶解條件下設(shè)制溫度分別為40 r、45r、5Cr、55、60以水解度為指標(biāo)考察不同溫度對酶解反應(yīng)的影響。酶解時間對酶解反應(yīng)的影響在酶解溫度為50pH值為6-0和復(fù)合蛋白酶用量為5%的酶解條件下酶解時間為1h、2h、3h、4h、5h、6h以水解度為指標(biāo)考察不同時間對酶解反應(yīng)的影響。pH值對酶解反應(yīng)的影響在酶解時間為5h、酶解溫度為50、復(fù)合蛋白酶用量為5%的酶解條

4、件下設(shè)計pH值為4、5、6、7、8、9以水解度為指標(biāo)考察不同pH值對酶解反應(yīng)的影響。135復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)的正交試驗為了確疋復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)的最佳條件在單因素試驗的基礎(chǔ)上進行正交試驗。選擇酶解溫度、pH、復(fù)合蛋白酶用量和酶解時間作為正交試驗的4個因素進行4因素3水平的正交試驗因素水平表見表101-3-6復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)的最佳條件驗證試驗重復(fù)上述4因素3水平正交試驗驗證復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)的最佳條件是否正確2結(jié)果與分析21四棱豆乳濁液中蛋白質(zhì)的含量將四棱豆去皮以料水比1 :7打成漿過濾重復(fù)3次取樣測疋此時乳濁液的蛋白質(zhì)含量o由表2可知四棱豆在以料水比為1 :7

5、的情況下四棱豆乳濁液的蛋白質(zhì)含量為2-89%D o22復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白的單因素試驗221酶用量對酶解反應(yīng)的影響用復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)溶液時酶用量對酶解反應(yīng)有很大影響酶用量對酶解反應(yīng)的試驗結(jié)果見圖1從圖1可以看出當(dāng)復(fù)合蛋白酶用量小于時，一四棱豆蛋白一質(zhì)溶液一的一水解度隨著復(fù)一合.蛋.白.酶一用.量.增.加.迅.速.增.大.當(dāng).復(fù)一合.蛋.白.酶用量大-于5%時-四-棱豆蛋白質(zhì)溶液的水-解度隨一*酶用.量.增.加-并一沒.有.顯.著一增.大.-這.是.丄酶一量一增.加-，-酶一與-底物一作.用一得一更一充.分一提一高一了-酶一對不一溶性蛋白的作一用匕匕 厶冃力一隨著酶量的繼續(xù)增加-，

6、-酶與底物一的作-用達.到飽和一，-反應(yīng)達到一最n大，一即一使一再一增一加一酶一量一，一四一棱一豆一蛋一白一質(zhì)一溶一液一的一水一解度變化也不-會明顯1因此,考慮到經(jīng)濟一成本以一及-對一資一源一的一有-效一利一用一，一復(fù)一合-蛋一白_酶一用一量一為一時一，一酶一解一反一應(yīng)一效一果一最一為一理一想一2亠2亠2酶解溫度對一酶解反應(yīng)一的影響酶解溫度一對一復(fù)一合-蛋一白-酶一活一性一的一影一響一很一大一隨一著一溫一度一的一升一高一，-酶一催一化一反一應(yīng)一速一度-加一快一亠至一達一到一最一大一反一應(yīng)一速一率-為-止一，-高一溫一時一酶一反一應(yīng)一速-度-減一小一，-這一是-酶一本一身-由一丄高-溫一變一性一

7、所致一試驗一結(jié)一果一見一圖一2-亠從一圖一2可一以看出一，-當(dāng)溫度為50時，-四一棱豆蛋白質(zhì)溶-液-的-水-解一度-達一到-最-高-值-當(dāng)一低一丄時一亠隨-著-溫-度-的一提-高-蛋-白一酶-的一酶-活一增-加一亠酶-對一底-物一的作用效果增強,四棱豆蛋白質(zhì)溶液的水解度隨之增加J當(dāng)溫度高于50時酶活性逐漸降低四棱豆蛋白質(zhì)溶液的水解度降低同時過高的溫度會使酶的活性中心結(jié)構(gòu)被破壞導(dǎo)致酶變性部分或全部失去催化活性因此初步確疋最適酶解溫度為502-2-3酶解時間對酶解反應(yīng)的影響酶解時間也是影響復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)溶液的重要影響因素之一一一合適的酶解時間能一夠有效地提高生產(chǎn)效率節(jié)省成本試驗結(jié)果見圖

8、3。從圖3可以看出當(dāng)酶解時間小于5h時四棱豆蛋白質(zhì)溶液的水解度隨著時間的增加逐漸增大J當(dāng)酶解時間大于5h時四棱豆蛋白質(zhì)溶液的水解度隨著時間的延長變化不大這是因為隨著時間的延長底物不斷減少酶解充分13L因此最適提取時間為5h224pH值對酶解反應(yīng)的影響同溫度一一一樣pH值對復(fù)合蛋白酶的活性影響也很大過酸過堿都會影響酶蛋白的構(gòu)象甚至?xí)姑缸冃允Щ睢．?dāng)pH值變化不是很劇烈時酶雖未變性但活力會受到影響從而抑制或促進酶解反應(yīng)。試驗結(jié)果見圖4從圖4可以看出pH值對水解度的影響較.大當(dāng)pH值小于或大于7-0時復(fù)合蛋白酶的活性受到抑制致使水解度降低在pH值為7-0時四棱豆蛋白質(zhì)溶液的水解度達到最大值因此復(fù)合蛋

9、白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)時調(diào)節(jié)pH值為7-0左右時效果最佳23復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)最佳水解條件優(yōu)化本試驗選擇酶解溫度、pH、復(fù)合蛋白酶用量和酶解時間作為正交試驗的4個因素進行4因素3水平的正交試驗正交試驗結(jié)果見表3由表3可知酶解試驗中影響四棱豆水解效果的主次因素為:DCBA說明在用復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)的酶解條件中因素D即酶解時間為最重要因素J其/、次分別是因素C和因素B即復(fù)合蛋白酶用量和酶解時的pH值J因素A即酶解溫度為不重要因素復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)的最佳酶解優(yōu)化工-藝參數(shù)為A1B2C2D2即:酶解溫度為45pH值為7-0復(fù)合蛋白酶用量為5%酶解時間為5h。2-4復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)最佳水解條件驗證結(jié)果驗證試驗結(jié)果表明:在復(fù)合蛋白酶用量為5%、酶解溫度45、pH值70、酶解時間5h的水解條件下用復(fù)合蛋白酶水解四棱豆蛋白質(zhì)溶液獲得的酶解液的水解度最高達到18