化妝品中維甲酸異維甲酸的檢測方法

1、附件 11 化妝品中維甲酸和異維甲酸的檢測方法 1 適用范圍 本方法規(guī)定了采用高效液相法測定化妝品中維甲酸（CAS: 302-79-4 ）和異維甲酸（ CAS: 4975-48-2）含量的方法。 本方法適用于膏霜、乳液、水類化妝品中維甲酸和異維甲酸的測定。對于陽性結(jié)果，可用 液相色譜質(zhì)譜進(jìn)行進(jìn)一步確證。 2 方法提要 樣品經(jīng)過提取后，經(jīng)高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，根據(jù)保留時間和紫外光 譜圖定性， 峰面積定量， 以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。 本方法對維甲酸及異維甲酸的檢出限均為1ng， 定量下限為 3 ng；若取 0.2 g 樣品測定，則維甲酸及異維甲酸的檢出濃度均為 0.0005 %，最

2、低定 量濃度為 0.0015 %。 3 試劑和材料 除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為一級實驗用水。以下操作均在避光條件下進(jìn)行。 3.1 甲醇，色譜純。 3.2 冰醋酸。 3.3 2 %醋酸溶液：量取冰醋酸（ 3.2） 20mL ，用 980mL 水溶解。 3.4 維甲酸，純度 98%。 3.5 異維甲酸，純度 98%。 3.6 混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別準(zhǔn)確稱取維甲酸及異維甲酸10 mg（準(zhǔn)確至 0.1mg），置于 100 mL 棕 色容量瓶中，用甲醇（ 3.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，得 100 g/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。該標(biāo) 準(zhǔn)儲備液在 4下可保存 7 天。 3.7 系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用

3、甲醇（ 3.1）將儲備液配制成濃度分別為 1 g/m、L 5 g/m、L 10 g/mL、 50 g/mL、 100 g/mL的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。 4 儀器 4.1 高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器。 4.2 液相色譜三重四級桿聯(lián)用儀。 4.3 天平：感量 0.0001 g。 4.4 天平：感量 0.001g。 4.5 高速離心機(jī)。 4.6 超聲波清洗儀。 5 測定步驟 以下操作均在避光條件下進(jìn)行。 5.1 樣品處理 準(zhǔn)確稱取樣品約 0.2 g（精確至 0.001 g），置于 10 mL 具塞比色管中，用甲醇（ 3.1）定容， 混勻，冰浴超聲提取 15 min ，必要時以 10000

4、r/min 離心 5min 。取上清液經(jīng) 0.45 m濾膜過濾， 濾液作為待測溶液。 5.2 測定 5.2.1 色譜參考條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱； 流動相：甲醇（ 3.1）+2%醋酸溶液（ 3.3） 90+10； 流速： 1.0 mL/min ； 檢測波長： 355 nm； 柱溫： 30 ； 進(jìn)樣量： 10 L 。 5.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 在設(shè)定色譜條件下，取系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.7） 10L 進(jìn)行高效液相色譜分析 。根據(jù) 標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度和峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 5.2.3 樣品測定 在設(shè)定色譜條件下，進(jìn) 10L 待測樣液進(jìn)行高效液相色譜分析。色譜圖檢出的物質(zhì)，經(jīng)與該

5、 物質(zhì)對照品的保留時間和紫外光譜圖比較確證后， 根據(jù)峰面積， 從校準(zhǔn)曲線上獲取相應(yīng)組分的質(zhì) 量濃度。 若待測溶液中目標(biāo)物質(zhì)量濃度超過了校準(zhǔn)曲線線性范圍的上限， 需對待測溶液進(jìn)行適當(dāng) 稀釋。 6 平行實驗 按以上步驟操作，對同一樣品獨立進(jìn)行測定獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不得超過 算術(shù)平均值的 10%。 7 計算 DV w 6 100 m 10 式中： w 樣品中待測組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)， %； 待測溶液中待測組分的質(zhì)量濃度， g/mL； V 樣品定容體積， mL ； m 化妝品取樣量， g； D 稀釋倍數(shù)（不稀釋則取 1）。 8 回收率和精密度 多家實驗室驗證，回收率在 87.7%114.2%之

6、間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在 0.4% 4.2%之間。 10 陽性結(jié)果確證 如液相方法中檢出陽性結(jié)果，可采用液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)一步確證。 在相同的實驗條件下， 如果樣品中檢出的色譜峰的保留時間和紫外光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng) 成分一致，所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子相對豐度比的偏差不超 過表 1 規(guī)定范圍，則可以判定樣品中存在對應(yīng)的待測成分。 表 1 陽性結(jié)果確證時相對離子豐度比的最大允許偏差 相對離子豐度（ k ） k50% 50%k20% 20% k10% k10% 最大允許偏差 20% 25% 30% 50% 10.1 液相色譜參考條件： 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱；流速： 0.3 mL/min ； 柱溫： 30 ； 流動相：甲醇 +水 90+ 10； 進(jìn)樣量： 10 L 。 10.2 質(zhì)譜參考條件： 離子源：電噴霧離子源（ ESI 源）。 監(jiān)測模式：負(fù)離子監(jiān)測模式； 離子源電壓： 4200V ； 檢測模式： MS2 全掃描，掃描范圍（ m/z ）：50 350； 碰撞電壓： 25eV ； 去簇電壓： 30eV 。 表 2 待測成分的定性離子對 編號 待測成分 母離子（