烏雞家雞血清測定結題報告課件

1、血清成分分析 陳佳麗 潘茜茜 林艷青 指導老師：張旭老師 2012-12-29 1烏雞家雞血清測定結題報告 目錄 1血清膽固醇的測定 2血清清蛋白-球蛋白的分離與鑒定 3谷丙轉氨酶活性的鑒定及活力單位的測定 2烏雞家雞血清測定結題報告 實驗原理 膽固醇及其酯在硫酸存在下和鄰二甲醛作用。產生紫紅色膽固醇及其酯在硫酸存在下和鄰二甲醛作用。產生紫紅色 物質，此物質對物質，此物質對550nm550nm波長的光有最大吸收，可用比色法波長的光有最大吸收，可用比色法 定量測定。定量測定。100ml100ml樣品中膽固醇含量在樣品中膽固醇含量在400mg400mg以內與光吸度以內與光吸度 呈良好線性關系。呈良

2、好線性關系。 實驗材料 血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清 鄰苯二甲醛試劑，鄰苯二甲醛試劑，90%90%醋酸，混合酸，標準膽固醇貯液醋酸，混合酸，標準膽固醇貯液 （1mg/mL1mg/mL），標準膽固醇應用液（），標準膽固醇應用液（0.1mg/mL0.1mg/mL） 3烏雞家雞血清測定結題報告 實驗步驟 1 取清潔干燥試管5支，編號，按表格加入試劑。 2 加畢，混勻，靜置10min，以550nm波長比色測定， 以吸光度值為縱坐標，膽固醇含量為橫坐標，做標 準曲線。本 1 取3支清潔干燥試管，編號后，按表格加入 試劑。 2 加畢，混勻，靜置10min，于

3、550nm波長比色， 以對照管校零點，對照標準曲線即知100mL樣 品中總膽固醇含量（mg）。本 繪制表格記錄標準曲線及樣品各試劑吸光值。 繪制標準曲線，在曲線上描出與樣品吸光值對 應的膽固醇含量。 4烏雞家雞血清測定結題報告 實驗結果 對照標準曲線可得：家雞血清對照標準曲線可得：家雞血清550nm550nm處的光波吸收值為處的光波吸收值為 0.130 0.130 。 100ml100ml家雞血清中膽固醇的含量為家雞血清中膽固醇的含量為75mg75mg。 根據(jù)參考資料雞的血清膽固醇的含量在根據(jù)參考資料雞的血清膽固醇的含量在51-196mg/100ml51-196mg/100ml之間是在之間是在

4、 可信范圍內可信范圍內11。所以本實驗測得家雞血清膽固醇含量。所以本實驗測得家雞血清膽固醇含量75mg/100ml75mg/100ml 是在可信范圍內。是在可信范圍內。 5烏雞家雞血清測定結題報告 實驗分析 返回返回 6烏雞家雞血清測定結題報告 目錄 1 血清清蛋白與血清清蛋白與-球蛋白的鹽析球蛋白的鹽析 2 蛋白質透析與濃縮蛋白質透析與濃縮 3 凝膠層析的實驗凝膠層析的實驗 4 醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維素薄膜電泳 7烏雞家雞血清測定結題報告 實驗原理血清清蛋白與血清清蛋白與-球蛋白的鹽析球蛋白的鹽析 血清中含有清蛋白和各種球蛋白（血清中含有清蛋白和各種球蛋白（-球蛋白等），球蛋白等）， 由

5、于它們所帶電荷不同、相對分子質量不同，在高濃度鹽由于它們所帶電荷不同、相對分子質量不同，在高濃度鹽 溶液中的溶解度不同，因此可利用它們在中性鹽溶液中溶溶液中的溶解度不同，因此可利用它們在中性鹽溶液中溶 解度的差異而進行沉淀分離，此法稱為鹽析法。解度的差異而進行沉淀分離，此法稱為鹽析法。 實驗材料 血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清 PBS （NH4NH4）2SO42SO4溶液溶液 雙縮脲試劑雙縮脲試劑 酪蛋白酪蛋白 蔗糖蔗糖 BaCl2BaCl2溶液溶液 8烏雞家雞血清測定結題報告 實驗步驟血清清蛋白與血清清蛋白與-球蛋白的鹽析球蛋白的鹽析 返回返回

6、9烏雞家雞血清測定結題報告 實驗原理蛋白質透析與濃縮蛋白質透析與濃縮 1.1.透析是利用蛋白質等生物大分子不能通過半透膜的性質透析是利用蛋白質等生物大分子不能通過半透膜的性質 的一類純化方法的一類純化方法, ,可利用該方法分離大分子和小分子混合可利用該方法分離大分子和小分子混合 物物. . 2.2.由于由于NHNH4 4+ +和和SOSO4 4 2+2+可以通過半透膜，二血清清蛋白不能，因此，可以通過半透膜，二血清清蛋白不能，因此， 可以利用透析的方法是清蛋白溶液脫鹽。可以利用透析的方法是清蛋白溶液脫鹽。 3.3.將盛有待濃縮餓將盛有待濃縮餓 大分子溶液的透析袋放入高濃度的吸水性強大分子溶液的

7、透析袋放入高濃度的吸水性強 的蔗糖固體顆粒中，袋內溶液中的水杯的蔗糖固體顆粒中，袋內溶液中的水杯 袋外的袋外的 多聚物所吸收而多聚物所吸收而 有效地濃縮。有效地濃縮。 實驗材料 透析袋、蔗糖固體顆粒透析袋、蔗糖固體顆粒 10烏雞家雞血清測定結題報告 實驗步驟蛋白質透析與濃縮的實驗步驟 1. 取玻璃紙（15cm15cm）兩張，折成袋狀。將前面第一次鹽析得 到的含有清蛋白的上清液和-球蛋白分別倒入兩個透析袋中，用線繩 系緊上口。 2. 用玻璃棒懸掛在盛有半杯蒸餾水的100mL燒杯中，使透析 袋下半部浸入水中，流水透析1h。 。 3. 將兩透析袋取出，埋入蔗糖中濃縮 返回返回 11烏雞家雞血清測定結

8、題報告 實驗步驟凝膠層析的實驗步驟 12烏雞家雞血清測定結題報告 實驗結果凝膠層析凝膠層析 重鉻酸鉀 藍葡聚糖 13烏雞家雞血清測定結題報告 實驗結果 洗脫曲線 14烏雞家雞血清測定結題報告 實驗分析 返回返回 15烏雞家雞血清測定結題報告 實驗原理醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維素薄膜電泳 醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維素薄膜電泳 是以醋酸纖維素薄膜作為支持物的是以醋酸纖維素薄膜作為支持物的 電泳方法電泳方法 實驗材料 醋酸纖維素薄膜、電泳槽醋酸纖維素薄膜、電泳槽 16烏雞家雞血清測定結題報告 實驗步驟醋酸纖維素薄膜電泳的實驗步驟 17烏雞家雞血清測定結題報告 實驗結果 18烏雞家雞血清測定結題報告

9、實驗分析 返回返回 19烏雞家雞血清測定結題報告 實驗原理 紙層析法底物谷氨酸的減少和產物丙氨酸的生成。丙酮酸與2， 4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙。此物質在堿性條件下 呈棕紅色，其顏色的深淺與丙酮酸的含量成正比。 實驗材料 血清：一管為家雞血清，一管為烏骨雞血清 1% 谷氨酸溶液， 1% 丙酮酸鈉溶液，0.1% KHCO3溶液 0.025% 溴乙酸溶液，2% 乙酸溶液 ，0.1% 水合茚三酮的正丁醇溶液 ，0.1% 標準谷氨 酸溶液，0.1% 標準丙氨酸溶液 ，1/15 mol/L pH=7.4的磷酸緩 沖液，GPT基質液 ，1mmol/L 2，4-二硝基苯0.4mol/LNaOH

10、溶液 20烏雞家雞血清測定結題報告 實驗步驟 1 取清潔干燥試管5支，編號，按要求試劑。 2 加畢，混勻，置于37水浴靜置10min，再加入2，4-二硝基苯肼 0.5ml加畢，混勻，置于37水浴靜置20min，再加5mlNaOH加畢，混勻， 靜置10min.以520nm波長比色測定，以吸光度值為縱坐標，酶活力單位 為橫坐標，做標準曲線。 1 取清潔干燥試管3支，編號，按要求試劑。 2 加畢，混勻，置于37水浴靜置10min，再加入2，4-二硝基 苯肼0.5ml加畢，混勻，置于37水浴靜置20min，再按要求加 試劑，加畢，混勻，靜置10min.以520nm波長比色測定，以吸 光度值為縱坐標，酶活力單位為橫坐標，做標準曲線。 繪制表格記錄標準曲線及樣品各試劑吸光值。 繪制標準曲線，在曲線上描出與樣品吸光值對 應的酶活力單位。 21烏雞家雞血清測定結題報告 實驗結果 家雞血清家雞血清550nm550nm處的光波吸收值為處的光波吸收值為 0.026 0.026。 烏雞血清烏雞血清550nm550nm處的光波吸收值為處的光波吸收值為 0.150. 0.150. 對照標準曲線可得對照標準曲線可得 100ml100ml血清谷丙氨酸酶活力單位數(shù)家雞是血清谷丙氨酸酶活力單位