內(nèi)酰胺酶檢測(cè)分析論文

1、內(nèi)酰胺酶檢測(cè)分析論文摘要目的：研究呼吸科肺炎克雷伯菌對(duì)14種常用抗生素的耐藥性及其產(chǎn)超廣譜內(nèi)酰胺酶(ESBLs)菌株的檢出率。方法：選擇從臨床呼吸科分離的肺炎克雷伯菌，用KB紙片擴(kuò)散法、雙紙片協(xié)同試驗(yàn)和紙片確證試驗(yàn)篩選和確認(rèn)產(chǎn)ESBLs的菌株。結(jié)果：3a中呼吸科肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs總檢出率為36.7%(94/256)，產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)亞胺培南高度敏感(100%)，對(duì)氨芐西林、頭孢唑林、頭孢噻肟、頭孢曲松、慶大霉素、環(huán)丙沙星均有極高的耐藥性(耐藥率80%)，高于不產(chǎn)ESBLs組，差異有顯著性(P0.005)。結(jié)論：呼吸科肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs菌株的臨床分離率高，對(duì)多種抗生素具有較高耐藥性

2、，亞胺培南是治療產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌感染的首選藥物。 關(guān)鍵詞肺炎克雷伯菌；內(nèi)酰胺酶；耐藥性；呼吸科 質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的產(chǎn)生和傳播是革蘭陰性桿菌對(duì)內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的重要原因之一1。肺炎克雷伯菌是最常見的產(chǎn)ESBLs菌株2，已成為醫(yī)院感染的重要病原菌之一，可造成嚴(yán)重的醫(yī)院感染暴發(fā)和院外耐藥菌株的傳播3。特別是質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLs因其底物譜廣、傳播速度快而引起廣泛關(guān)注。我們對(duì)2003年1月至2005年12月本院呼吸科分離的肺炎克雷伯菌進(jìn)行了抗生素敏感度測(cè)定及對(duì)產(chǎn)ESBLs菌株進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。 1材料與方法 1.1材料 1.1.1菌株肺炎克雷伯菌來源于2003年1月

3、至2005年12月本院呼吸科患者送檢痰標(biāo)本，10天內(nèi)分離出相同菌種取第1次分離株。 1.1.2試劑API試條、MH瓊脂(法國(guó)梅里埃公司產(chǎn)品)，藥敏紙片：頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢噻肟/棒酸、頭孢他啶/棒酸購于英國(guó)Oxoid公司，其他藥敏紙片購于杭州天和微生物試劑廠。 1.2方法 1.2.1菌種鑒定根據(jù)全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程操作，采用API試條和APILABPLUS細(xì)菌鑒定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。 1.2.2藥敏試驗(yàn)采用KB法，結(jié)果判讀按NCCLS2002年推薦標(biāo)準(zhǔn)。 1.2.3ESBLs檢測(cè)采用雙紙片協(xié)同試驗(yàn)法，選取對(duì)頭孢噻肟耐藥或中介耐藥的肺炎克雷伯菌株，按常規(guī)紙片擴(kuò)散法在MH瓊脂平板上涂布受試菌，先

4、在平板中心貼上20g/1g阿莫西林/克拉維酸紙片，爾后在其上下左右貼30g/片頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢他啶和氨曲南紙片，其紙片中心距復(fù)合劑紙片中心30mm或20mm，35孵育18h20h。如周圍4個(gè)藥敏紙片中有任何一個(gè)抑菌環(huán)在靠近復(fù)合紙片一側(cè)的邊緣出現(xiàn)擴(kuò)大或增強(qiáng)，說明該菌產(chǎn)ESBLs。如結(jié)果可疑或協(xié)同試驗(yàn)陰性，但KB藥敏結(jié)果提示可能產(chǎn)ESBLs，則用確證試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)2002年推薦的標(biāo)準(zhǔn)判讀。ESBLs陰性質(zhì)控株為大腸埃希菌ATCC25922，ESBLs陽性質(zhì)控菌為ATCC700603。 2結(jié)果 2.1ESBLs檢出率3年中從下呼吸道感染標(biāo)本中共檢出2

5、56株肺炎克雷伯菌，其中有94株產(chǎn)ESBLs，檢出率為36.7%(94/256)，較盧小軍等4報(bào)道的19.6%要高得多，較朱冬林等5報(bào)道的43.1%低。3年中呼吸科下呼吸道感染標(biāo)本中產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌分離率，分別為33.3%(20/60)、37.5%(30/80)、37.9%(44/116)。 2.2產(chǎn)ESBLs和非產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌耐藥情況(中介歸于耐藥)產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌對(duì)亞胺培南全部敏感，對(duì)頭孢派酮/舒巴坦等加酶抑制劑的藥物耐藥率從2003年2.0%上升到2005年的11.8%，對(duì)頭孢唑林、頭孢噻肟、頭孢曲松、慶大霉素、環(huán)丙沙星耐藥突出，均超過80%，有的超過90%，

6、對(duì)氨芐西林100%耐藥，而非產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)上述除氨芐西林外的其他抗生素，均表現(xiàn)出較好的敏感率。結(jié)果見表1。 表1256株肺炎克雷伯菌耐藥表型結(jié)果（略） 3討論 有文獻(xiàn)6報(bào)道，肺炎克雷伯菌在痰培養(yǎng)所得革蘭陰性桿菌中占第二位，肺炎克雷伯菌是最常見的產(chǎn)ESBLs菌株。細(xì)菌產(chǎn)ESBLs多由于使用了超廣譜內(nèi)酰胺類抗生素，使它們?cè)薪?jīng)典酶TEM1、TEM2及SHV1經(jīng)點(diǎn)的突變而形成，它們可以不同程度的水解內(nèi)酰胺類抗生素，如青霉素類、三代頭孢菌素等。肺炎克雷伯菌對(duì)氨基糖苷類耐藥的一個(gè)重要機(jī)制為鈍化酶的產(chǎn)生。ESBLs抑制劑與內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)合應(yīng)用是治療耐藥菌的有效途徑之一。值得注意的是亞胺培南本身對(duì)ES

7、BLs穩(wěn)定，在臨床上能有效治療產(chǎn)酶細(xì)菌的感染，但同時(shí)亞胺培南卻是一種強(qiáng)有力的ESBLs誘導(dǎo)劑，能誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的ESBLs，其作用的兩面性值得重視7。 參考文獻(xiàn)： 1王志軍，倪語星.超廣譜TEM內(nèi)酰胺酶檢測(cè)及分型J.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1999，22(6)：347348. 2熊劍輝.Etest用于革蘭陰性桿菌超廣譜內(nèi)酰胺酶測(cè)定J.臨床檢驗(yàn)雜志，1998，16(2)：138140. 3WienerJ,QuinnJP,BradfordPA,etal.MultipleantibioticresistantKlebsiellaandEscherichiacoliinnursinghomesJ.JAMA,1999,281:517523. 4盧小軍，吳升，張麗君，等.產(chǎn)超廣譜內(nèi)酰胺酶菌在老年患者中的感染J.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2003，13(6)：586587. 5朱冬林，張嶸.陰溝腸桿菌等細(xì)菌超廣譜內(nèi)酰胺酶檢測(cè)的探討J.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2002，17(6