研究生進(jìn)修課程臨床病理學(xué)復(fù)習(xí)

1、病理復(fù)習(xí)1. 請結(jié)合自己的專業(yè)，簡單設(shè)計(jì)一個(gè)免疫組織化學(xué)標(biāo)記的方案來研究一個(gè)課題.(一抗和二抗的名稱和來源、一抗的定位預(yù)測；實(shí)驗(yàn)方案、生物學(xué)意義和臨床意義、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（每個(gè)對照組的意義）、結(jié)果判斷。一抗：stk15（aurora-a）多克隆抗體（兔抗人）二抗：二步法抗兔通用型免疫組化檢測試劑盒一抗的定位預(yù)測：表達(dá)在細(xì)胞漿中 實(shí)驗(yàn)方案：選擇正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢惡性腫瘤組織三組石蠟標(biāo)本切片。通過抗體標(biāo)記stk15（aurora-a），經(jīng)過免疫組化染色后根據(jù)染色顆粒的強(qiáng)度與分布來判定aurora-a在細(xì)胞漿中的表達(dá)結(jié)果。 生物學(xué)意義：aurora-a在人類多個(gè)腫瘤細(xì)胞系內(nèi)被發(fā)現(xiàn)過度表達(dá)，是

2、一種與中心體異常密切相關(guān)的基因，其過度表達(dá)導(dǎo)致中心體過度復(fù)制，從而引起染色體分離異常，導(dǎo)致細(xì)胞分裂阻滯，形成異倍體，引起抑癌基因的缺失或癌基因的獲得或激活，從而引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。 臨床意義：aurora-a的異常可能與惡性腫瘤的病理特點(diǎn)、臨床分期、及預(yù)后有某些相關(guān)性。它在早期腫瘤中均有陽性表達(dá)，表明aurora-a蛋白水平的改變在卵巢癌中是常發(fā)事件，可能代表了卵巢癌的早期病變，在卵巢癌的發(fā)病中起重要作用。抑制aurora-a激酶的活性有可能成為一個(gè)治療腫瘤的有效手段。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：通過設(shè)立卵巢惡性腫瘤、卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織的對照組，對比各組所研究aurora-a在不同組織中

3、表達(dá)的差異，進(jìn)而得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論。 結(jié)果判斷：采用s-p免疫組化染色后，利用電腦的病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)進(jìn)行結(jié)果判讀，對染色結(jié)果定量分析，記各組織片內(nèi)腫瘤細(xì)胞aurora-a蛋白的表達(dá)情況。2. 免疫組化的應(yīng)用范圍：（1）提高病理診斷準(zhǔn)確性 （2）對疾病的預(yù)后和治療的意義 （3）癌基因蛋白的應(yīng)用 （4）對腫瘤增生程度的評價(jià) ki67 pcna （5）微小病灶的發(fā)現(xiàn) 微小癌 微小病灶（如羊水栓塞） （6）在腫瘤分期上的意義 （7）指導(dǎo)腫瘤治療 （8）免疫性疾病的輔助診斷 （9）病原微生物的檢測3. abc復(fù)合物：abc法是利用卵白素與生物素特有的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì)，先將生物素與辣根過氧化物酶(h

4、rp)結(jié)合，形成生物素化hrp，然后與卵白素按一定比例混合，形成abc復(fù)合物。卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物。4. 何謂抗原修復(fù) 組織在制作過程中，由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原，又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，致使在免疫組化的染色過程中不能將其顯示出來，為了解決上述的問題，利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來或修正過來的過程稱為抗原修復(fù)。5. 掌握免疫組化在臨床上應(yīng)用的初步方案。a：已知的特異性抗體或抗原能特異性結(jié)合。b： 通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶，金屬離子、同位素等，顯示一定的信號（如：顏色）。c： 借助顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察其顏

5、色變化，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)。6. “套餐式”免疫標(biāo)記：免疫組織化學(xué)技術(shù)以抗原抗體反應(yīng)為其理論基礎(chǔ)，對腫瘤的診斷和鑒別診斷有重要作用。目前常用抗體分為上皮性、間葉組織、神經(jīng)及神經(jīng)內(nèi)分泌、淋巴細(xì)胞標(biāo)志物等四類。由于腫瘤類型極多，部分腫瘤的診斷和分型又極其困難，因此診斷一些腫瘤的免疫組化方案必須是“套餐式”的，即每一種組織的標(biāo)記物必須用2種以上的抗體，除了能夠陽性正面證實(shí)的抗體，還要有能陰性反面證實(shí)的抗體。 例如： a. keratin,vimentin,lca,s100四種抗體組合，keratin陽性且其它陰性的結(jié)果可以篩選 出可疑癌或生殖細(xì)胞瘤；vimentin和lca陽性

6、的結(jié)果可以篩選出可疑淋巴瘤；vimentin和s100陽性的結(jié)果可以篩選出可疑神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤；vimentin陽性的結(jié)果可以篩選出可疑肉瘤。 b. 在keratin陽性的腫瘤中，ck17和ck18陽性的結(jié)果提示移行細(xì)胞癌和某些管狀腺癌； ck17陽性和ck18陰性的結(jié)果提示鱗癌、皮膚、鼻咽、食道癌等；ck17陰性和ck18陽性的結(jié)果提示腺癌。 7. 分子病理學(xué)臨床應(yīng)用的進(jìn)展，舉例說明。 臨床病理學(xué)的發(fā)展趨向：三段式診斷：形態(tài)學(xué)診斷+免疫學(xué)標(biāo)記+分子診斷。在經(jīng)典病理學(xué)的基礎(chǔ)上，采用現(xiàn)代輔助手段，提高病理診斷率和預(yù)測(預(yù)后)率。臨床分子病理學(xué)常用方法：免疫組織化學(xué)，基因克隆性重排的檢測，fish及

7、cgh，等位基因不平衡分析，雜合性缺失（loh）的檢測，微衛(wèi)星dna不穩(wěn)定性（msi）的檢測。i. tunel-免疫組化在細(xì)胞凋亡檢測中的應(yīng)用；2.免疫組化多重標(biāo)記的應(yīng)用，臨床上igh和tcr基因單克隆檢測在淋巴瘤的分子診斷中普遍應(yīng)用。當(dāng)前分子病理學(xué)技術(shù)在臨床的實(shí)際應(yīng)用：肺癌的分子病理學(xué)（60%85%的nsclc-腺癌細(xì)胞存在egfr突變過表達(dá)，這部分患者接受腫瘤分子靶向治療（egfr抑制劑）的臨床療效優(yōu)于常規(guī)化療），胃腸道間質(zhì)瘤(gist) 的分子病理學(xué)（c-kit突變是目前普遍認(rèn)可的確定gist的特異敏感指標(biāo)），乳腺癌的分子病理學(xué)（30%的浸潤性乳腺癌和70%的導(dǎo)管原位癌存在her-2基因

8、過表達(dá)。her-2陽性同時(shí)預(yù)示著腫瘤對內(nèi)分泌治療和常規(guī)cmf方案相對耐藥。注射用曲妥珠單抗(herceptin)是第一個(gè)用于治療her-2 fish陽性乳腺癌患者的分子靶向藥物。）， 結(jié)直腸癌的分子病理學(xué)（對k-ras基因第二、三外顯子（包括12號、13號、61號密碼子）突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測，為結(jié)直腸癌患者提供準(zhǔn)確可靠的用藥指導(dǎo)。），惡性淋巴瘤的分子病理學(xué)（許多淋巴瘤治療相關(guān)的靶點(diǎn)、通路，也相應(yīng)地研制出了許多針對相應(yīng)靶點(diǎn)和通路的藥物。）8. 生物信息學(xué) 隨著人類基因組計(jì)劃的實(shí)施，通過基因組測序、蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)解析等實(shí)驗(yàn)，分子生物學(xué)家提供了大量的有關(guān)生物分子的原始數(shù)據(jù)，需要利用現(xiàn)代計(jì)算技術(shù)對這些原

9、始數(shù)據(jù)進(jìn)行收集、整理、管理以便檢索使用，因而出現(xiàn)了生物信息學(xué)。生物信息學(xué)是多學(xué)科的交叉產(chǎn)物，涉及生物、數(shù)學(xué)、物理、計(jì)算機(jī)科學(xué)、信息科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。狹義的講，生物信息學(xué)是對生物信息的獲取、存儲、分析和解釋；計(jì)算生物學(xué)則是指為實(shí)現(xiàn)上述目的而進(jìn)行的相應(yīng)算法和計(jì)算機(jī)應(yīng)用程序的開發(fā)。這兩門學(xué)科之間沒有嚴(yán)格的分界線，統(tǒng)稱為生物信息學(xué)。9. 結(jié)合自己專業(yè)，利用生物信息學(xué)，查找xx（疾病+基因）在國內(nèi)外的研究現(xiàn)狀。寫出結(jié)論。有關(guān)子宮頸腺癌與鱗狀細(xì)胞癌中tp53基因突變的系統(tǒng)回顧在多種人類癌癥中可以見到腫瘤抑癌基因 tp53 突變。這項(xiàng)研究可提供不同地理區(qū)域的子宮頸鱗狀細(xì)胞癌和腺癌患者中tp53 突變的詳細(xì)分析

10、。這一分析顯示tp53 基因在子宮頸腺癌 （32/ 241 ； 13.3%）中有更高的突變率， 鱗狀細(xì)胞癌 (39/ 657 ； 5.9%；p = 0.0003）較腺癌突變率略低，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在北美，腺癌的tp53突變比例為4%，亞洲為19%。tp53 基因的六個(gè)熱點(diǎn)密碼子易發(fā)生突變，其中三個(gè)密碼子 (175、 248 和 273)在兩種類型的宮頸癌中均為常見突變，密碼子 (249) 主要在鱗狀細(xì)胞癌中可見突變，密碼子 (282) 只有在腺癌中可見突變。最常見的突變類型為g 與 a的轉(zhuǎn)換及 c與 t 的轉(zhuǎn)換，在鱗狀細(xì)胞癌中占 48.7%，腺癌中占 53.5%。在腺癌中25%的轉(zhuǎn)換發(fā)生于c

11、與a之間。鱗狀細(xì)胞癌 中14.6%的轉(zhuǎn)換發(fā)生于 g 與 t 之間。從這個(gè)系統(tǒng)回顧中可見看出，亞洲的子宮頸腺癌患者中可以見到tp53的高頻率突變。需要進(jìn)一步研究tp53在宮頸癌中的定位以了解對癌癥預(yù)后和結(jié)局突變的影響。tornesello ml, buonaguro l, buonaguro fm.gynecol oncol.2013mar;128(3):442-8. doi: 10.1016/j.ygyno.2012.11.017. epub 2012 nov 17.review.pmid:23168175 pubmed - indexed for medlinetp53在omim基因定位于1

12、7p13.110. 簡述淋巴細(xì)胞克隆性重排的概念及其應(yīng)用。 通常情況下，淋巴結(jié)、血液和骨髓中每一個(gè)淋巴細(xì)胞基因型是不一樣的。如果來自某一分化階段的單個(gè)淋巴細(xì)胞發(fā)生變異，同時(shí)失去正常的免疫監(jiān)視，形成單克隆性增生，克隆性擴(kuò)張的細(xì)胞基因型是一致的，這就是淋巴瘤形成的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，也是淋巴瘤分子病理學(xué)診斷的理論基礎(chǔ)。當(dāng)前對腫瘤分子本質(zhì)的共識：惡性腫瘤細(xì)胞克隆性增生。因此，檢測腫瘤細(xì)胞的克隆性存在，即可判斷惡性腫瘤。克隆性重排檢測 臨床上igh和tcr基因單克隆檢測在淋巴瘤的分子診斷中普遍應(yīng)用。作為淋巴細(xì)胞源性腫瘤的分子生物學(xué)標(biāo)記，是淋巴瘤早期診斷和療效評價(jià)的基本方法。 盲點(diǎn)：主要應(yīng)用與淋巴細(xì)胞源性腫瘤的

13、檢測，其它應(yīng)用尚少，存在假陽性。11. 大腸癌分子分型的臨床意義 a：分子醫(yī)學(xué)視野下的結(jié)直腸癌:1.近端遠(yuǎn)端結(jié)腸癌各有遺傳通道，2.遠(yuǎn)端結(jié)腸癌染色體5q,17q和18q等位基因缺失頻率是近端結(jié)腸癌的2倍，3.近端結(jié)腸癌msi頻率是遠(yuǎn)端結(jié)腸癌的10倍，4.結(jié)腸癌兩大家族:fap和hnpcc,前者好發(fā)于遠(yuǎn)端,與cin有關(guān);后者好發(fā)于近端,與msi有關(guān).，5.直腸癌基因突變多于結(jié)腸癌，6.上端,中下端直腸癌預(yù)后不一。b：新發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了新的治療模式的差異：如：表皮生長因子受體(egfr)靶向治療，k-ras的靶向治療。表皮生長因子受體(egfr)是原癌基因c-erbb-1的表達(dá)產(chǎn)物，egfr的過表達(dá)/突

14、變在多種腫瘤的生長、發(fā)展及預(yù)后中起關(guān)鍵作用，包括結(jié)直腸癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌及非小細(xì)胞肺癌等?？筫gfr的靶向藥物西妥昔單抗（愛必妥）已成為治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的一線用藥。k-ras基因是細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路中重要的“開關(guān)”，從而影響腫瘤的生長和擴(kuò)散。k-ras基因可以是正常狀態(tài)（野生型）或異常狀態(tài)（突變型），約有35%結(jié)直腸癌患者為k-ras突變型。 k-ras基因編碼異常的蛋白，刺激促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的生長和擴(kuò)散，并且不受上游egfr的信號影響，所以對愛必妥治療效果差。 晚期結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的治療顯示，k-ras野生型轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者一線接受西妥昔單抗+化療治療，客觀有效率達(dá)59%，腫瘤進(jìn)展風(fēng)

15、險(xiǎn)下降32%，疾病控制率在90%左右，患者中位生存時(shí)間達(dá)到25個(gè)月；而k-ras突變型患者無論采用標(biāo)準(zhǔn)劑量還是劑量遞增方案治療均無效。進(jìn)行k-ras基因檢測不僅可以深入了解癌基因的情況，更重要的是篩選出針對抗egfr靶向治療藥物有效的結(jié)直腸癌患者，幫助醫(yī)生選擇對腫瘤病人最有效的治療方法，從而真正實(shí)現(xiàn)腫瘤病人的個(gè)體化治療，還能大幅減少相關(guān)治療費(fèi)用和毒副作用。12. 現(xiàn)代腫瘤分子病理發(fā)病機(jī)制 a. 細(xì)胞癌基因在正常細(xì)胞中未激活，又稱為原癌基因。原癌基因由于結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，而被 激活成為癌基因。原癌基因可發(fā)生結(jié)構(gòu)改變（突變）而變?yōu)榘┗?；也可以是由于調(diào)節(jié)原癌基因表達(dá)的基因發(fā)生改變使原癌基因過度表達(dá)，進(jìn)

16、而導(dǎo)致細(xì)胞生長刺激信號的過度或持續(xù)出現(xiàn)，使細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。原癌基因的結(jié)構(gòu)改變包括點(diǎn)突變（如90的胰腺癌有ras 基因的點(diǎn)突變）、染色體易位（如伯基特淋巴瘤的t(8：14)，慢性粒細(xì)胞白血病的phl染色體）、插入誘變、基因缺失和基因擴(kuò)增（如神經(jīng)母細(xì)胞瘤的nmyc原癌基因可復(fù)制成多達(dá)幾百個(gè)拷貝，在細(xì)胞遺傳學(xué)上表現(xiàn)為染色體出現(xiàn)雙微小體和均染區(qū)）。癌基因編碼的蛋白質(zhì)（癌蛋白）與原癌基因的正常產(chǎn)物有質(zhì)或量的不同。癌蛋白調(diào)節(jié)其靶細(xì)胞的代謝、促使該細(xì)胞逐步轉(zhuǎn)化，成為腫瘤細(xì)胞。 b. 與原癌基因編碼的蛋白質(zhì)促進(jìn)細(xì)胞生長相反，正常情況下細(xì)胞內(nèi)的腫瘤抑制基因的產(chǎn)物 能抑制細(xì)胞的生長。若其功能喪失則可能促進(jìn)細(xì)胞的腫瘤

17、性轉(zhuǎn)化。目前了解最多的兩種腫瘤抑制基因是rb基因和p53基因。它們的產(chǎn)物都是以轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的方式控制細(xì)胞生長的核蛋白。腫瘤的發(fā)生可能是癌基因的激活與腫瘤抑制基因的失活共同作用的結(jié)果。 c. 惡性腫瘤的發(fā)生是一個(gè)長期的、多因素造成的分階段的過程，這已由流行病學(xué)、遺傳學(xué) 和化學(xué)致癌的動(dòng)物模式所證明。單個(gè)基因的改變不能造成細(xì)胞的完全惡性轉(zhuǎn)化，而是需要多基因的改變。癌基因以及腫瘤抑制基因的喪失或突變，這些階段梯性積累起來的不同基因分子水平的改變，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。13. gist 胃腸道間質(zhì)腫瘤。胃腸道間質(zhì)腫瘤已作為一種獨(dú)立的腫瘤，以區(qū)別原診斷的平滑肌或神經(jīng)源性腫瘤，多數(shù)來源胃腸道cajal間質(zhì)細(xì)胞，命名為“胃腸