規(guī)范的篩查實(shí)驗(yàn)室操作與記錄

1、湖南省疾病預(yù)防控制中心湖南省疾病預(yù)防控制中心地址：長沙市芙蓉中路一段450號1201室（410005）電話南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科江江 洋洋遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科HIV抗體檢測的意義 HIV感染的診斷、疾病進(jìn)展的監(jiān)測、抗病毒療效觀察和耐藥性監(jiān)測中至關(guān)重要。 HIV檢測不同于其它病原微生物檢測，要求十分嚴(yán)格，任何錯(cuò)誤的診斷，包括假陽性或假陰性，都會對被檢者產(chǎn)生十分重要的影響。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控

2、制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科試劑試劑包被抗原或抗包被抗原或抗體類型及來源體類型及來源窗口期窗口期方法方法檢測抗體檢測抗體描述描述第一代HIV-1型抗原 (病毒裂解產(chǎn)物)30-60天間接法lgG假陽性較多，血清要高度稀釋，靈敏度低，僅能檢測HIV-1第二代HIV（1+2型）抗原（基因重組或合成多肽）28-35天間接法lgG靈敏度和特異性優(yōu)于第一代，但只能檢測HIV-lgG第三代HIV（1+2型）抗原（基因重組）14-25天雙抗夾心法LgG+lgM可檢測HIV不同的抗體亞類（lgG、lgM、 lgA等）靈敏度、特異性均較高第四代HIV（1+2型）抗原（基因重組+抗-

3、p24抗體）10-18天雙抗原夾心法和雙抗體夾心法LgG+lgM+Ag檢測HIV（1+2型）抗體和p24抗原，明顯縮短窗口期，進(jìn)一步降低輸血的殘余危險(xiǎn)度遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科試劑評估遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋

4、病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科 第四代HIV診斷試劑是一種HIV-1/HIV-2抗體與HIV-1 O亞群抗體及p24抗原的聯(lián)合檢測方法，增加了p24抗原檢測，在對第四代試劑的研究中發(fā)現(xiàn)p24抗原滴度降低時(shí)，血清陽轉(zhuǎn)過程中S/CO值卻并未降低，也沒有發(fā)現(xiàn)第四代試劑檢測陰性而第三代試劑檢測為陽性的樣本。 第四代試劑由于可同時(shí)檢測抗原和抗體，因而獻(xiàn)血員篩查時(shí)，建議用第四代試劑進(jìn)行檢測，以盡量提高輸血的安全性。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋

5、病防治科酶聯(lián)試驗(yàn)酶聯(lián)試驗(yàn)一一 實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄檢測報(bào)告檢測報(bào)告遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作 目的：是為臨床提供準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)診斷依據(jù)。 我們?yōu)榱吮ＷC實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中必須堅(jiān)持全面質(zhì)量控制（ TQC total quality control ）. 對影響臨床檢驗(yàn)結(jié)果可靠性的各方面因素及各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制, 全過程質(zhì)量控制包括實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中、和實(shí)驗(yàn)后三個(gè)階段的質(zhì)量控制。在實(shí)驗(yàn)誤差中實(shí)驗(yàn)前誤差占70%，因而實(shí)驗(yàn)前質(zhì)量保證對

6、減少實(shí)驗(yàn)誤差顯得尤其重要。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備 ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的是，測定中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的是，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來在室溫下放置來在室溫下放置30分鐘以上后，再進(jìn)行測分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求

7、的高度，以滿足測定要求。地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科 在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用，而在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科樣品登記 實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自己的情況來選擇樣品登記，樣

8、品登記主要使用樣品登記本；有條件的實(shí)驗(yàn)室使用樣品登記軟件，不僅可以做樣品的記錄還可以用來發(fā)放檢測報(bào)告。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科HIV抗體檢測實(shí)驗(yàn)抗體檢測實(shí)驗(yàn) 對于我們常用的對于我們常用的ELISA實(shí)驗(yàn)大致可以分為以下幾實(shí)驗(yàn)大致可以分為以下幾個(gè)步驟：個(gè)步驟：1、加樣、加樣2、溫育、溫育3、加酶標(biāo)抗體、加酶標(biāo)抗體4、加底物液顯色、加底物液顯色 5、終止反應(yīng)、終止反應(yīng)6、結(jié)果判定、結(jié)果判定 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科加血清樣品的

9、注意事項(xiàng)加血清樣品的注意事項(xiàng)加樣品的速度：加樣品的速度：加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性，要慢吸輕放性和均一性，要慢吸輕放加樣品的位置：加樣品的位置：加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附特異吸附不允許濺出和產(chǎn)生不允許濺出和產(chǎn)生氣泡：氣泡：濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染，出現(xiàn)氣泡濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染，出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面會有差異，影響酶標(biāo)儀則反應(yīng)液界面會有差異，影響酶標(biāo)儀讀數(shù)結(jié)果讀數(shù)結(jié)果加樣移液器不能混加樣移液器不能混合使用：合使用：不可用加血液樣品的移液器和加試劑不可用加血液樣品的移液器和加試劑用的移液器混用：用的移液器混

10、用：加入的樣品量要精加入的樣品量要精準(zhǔn)：準(zhǔn)：選擇合格廠家生產(chǎn)的移液器，查看產(chǎn)選擇合格廠家生產(chǎn)的移液器，查看產(chǎn)品校準(zhǔn)證書記錄，認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室每半品校準(zhǔn)證書記錄，認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室每半年都要做自校準(zhǔn)記錄年都要做自校準(zhǔn)記錄遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科移液器的使用移液器的使用 垂直加樣垂直加樣 吸頭尖端需浸入液面吸頭尖端需浸入液面3mm以下以下 慢吸慢放，控制好彈簧的伸縮速度慢吸慢放，控制好彈簧的伸縮速度 放液時(shí)吸頭尖端靠在容器內(nèi)壁放液時(shí)吸頭尖端靠在容器內(nèi)壁2/3遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾

11、滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科移液器的使用移液器的使用 反向吸液：反向吸液： 適用于粘稠液體和易揮發(fā)的液體適用于粘稠液體和易揮發(fā)的液體 多吸入的液體可以補(bǔ)償吸頭內(nèi)部的表面吸多吸入的液體可以補(bǔ)償吸頭內(nèi)部的表面吸附，因此定量實(shí)驗(yàn)都采用此方法附，因此定量實(shí)驗(yàn)都采用此方法遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科移液器的維護(hù)和保養(yǎng)移液器的維護(hù)和保養(yǎng) 每次實(shí)驗(yàn)完畢后可用每次實(shí)驗(yàn)完畢后可用75%的酒精棉球來擦的酒精棉球來擦拭，然后用雙蒸水將移液器下半部分拆卸拭，然后用雙蒸水將移液器下半部分拆卸清洗、最后置于紫外線照射下

12、進(jìn)行表面消清洗、最后置于紫外線照射下進(jìn)行表面消毒、晾干以備下次使用。毒、晾干以備下次使用。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科洗滌洗滌 洗滌的方式分為機(jī)洗和手洗，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室洗滌的方式分為機(jī)洗和手洗，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室由于都配備了洗板機(jī)已基本取代了手工操由于都配備了洗板機(jī)已基本取代了手工操作，作， 機(jī)洗采用浸泡式機(jī)洗采用浸泡式 常用于自動洗滌儀器常用于自動洗滌儀器實(shí)驗(yàn)中，浸泡時(shí)間約為實(shí)驗(yàn)中，浸泡時(shí)間約為30-60秒秒 ，洗板條件，洗板條件按試劑盒說明設(shè)定。按試劑盒說明設(shè)定。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中

13、心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科洗滌洗滌 其次，目前的商品其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量，且不可使用污染過的離子水應(yīng)保證質(zhì)量，且不可使用污染過的水源或自來水。水源或自來水。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科 洗滌在洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。也決

14、定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清分離游離和結(jié)合酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)?？梢哉f在體的干擾物質(zhì)?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，最主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒廠家要求來洗滌操作者應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒廠家要求來洗滌遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控

15、制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科溫育溫育 溫育是溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關(guān)測定中影響測定成敗最為關(guān)鍵的一個(gè)因素。鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相的免作為一種固相的免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對較短。間相對較短。遏制艾

16、滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科溫育溫育 通常目前國內(nèi)通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為育時(shí)間為37 30分鐘分鐘1小時(shí)，進(jìn)口小時(shí)，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為試劑盒則通常為37 12小時(shí)才能有較完小時(shí)才能有較完全的結(jié)合，低于試劑盒所要求的時(shí)間，就全的結(jié)合，低于試劑盒所要求的時(shí)間，就可能會影響測定的下限。因此，關(guān)于溫育，可能會影響測定的下限。因此，關(guān)于溫育，要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間 。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心

17、性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科顯色顯色 ELISA試劑的顯色液在使用前制備，制備好的顯試劑的顯色液在使用前制備，制備好的顯色液要在色液要在30分鐘內(nèi)使用，并且要避光保存，如果分鐘內(nèi)使用，并且要避光保存，如果有沒用完的顯色液切不可重復(fù)使用有沒用完的顯色液切不可重復(fù)使用 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科比色比色 加入顯色劑以后應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附加入顯色劑以后應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中，架中，比色結(jié)

18、果以光密度（比色結(jié)果以光密度（oplical densityoplical density，ODOD）表達(dá)，表達(dá)， 臨界值（臨界值（cut off cut off ） 根據(jù)試劑盒說明書根據(jù)試劑盒說明書設(shè)定計(jì)算公式。設(shè)定計(jì)算公式。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科酶標(biāo)比色儀酶標(biāo)比色儀 酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指專用于測讀酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指專用于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì)，許多試劑公司配套結(jié)果吸光度的光度計(jì)，許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。供應(yīng)酶標(biāo)儀。 酶標(biāo)儀的主要特點(diǎn)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、酶標(biāo)儀的主

19、要特點(diǎn)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準(zhǔn)確性為，準(zhǔn)確性為1%遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科 酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室溫宜在溫宜在1530，使用前先預(yù)熱儀器，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定，可根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)測讀結(jié)果更穩(wěn)定，可根據(jù)試劑盒說明書的要求進(jìn)行選擇合適的波長進(jìn)行測定行選擇合適的波長

20、進(jìn)行測定遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科 單波長測定就是選擇一個(gè)測定波長單波長測定就是選擇一個(gè)測定波長,直接測定樣本直接測定樣本的吸光度的吸光度 雙波長測量是采用兩個(gè)不同的波長雙波長測量是采用兩個(gè)不同的波長,即測定波長即測定波長(又叫主波長又叫主波長)和參比波長和參比波長(又叫次波長又叫次波長)同時(shí)測定樣同時(shí)測定樣品的吸光度品的吸光度,以消除一些外在影響因素以消除一些外在影響因素,提高測定結(jié)提高測定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度果的精密度和準(zhǔn)確度遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省

21、疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科實(shí)驗(yàn)有效性實(shí)驗(yàn)有效性 比色時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，比色時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，每次比色都要設(shè)置實(shí)驗(yàn)有效性才可進(jìn)行測每次比色都要設(shè)置實(shí)驗(yàn)有效性才可進(jìn)行測定，對不符合有效性的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行重復(fù)檢測！定，對不符合有效性的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行重復(fù)檢測?。▽?shí)驗(yàn)有效性設(shè)置見廠家試劑盒說明書實(shí)驗(yàn)有效性設(shè)置見廠家試劑盒說明書）遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科結(jié)果判讀結(jié)果判讀 陽性判定值（陽性判定值（cut-off ）一般為陰性對照均值加上）一般為陰性對照均值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽性

22、或陰性一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。的標(biāo)準(zhǔn)。 用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定，試劑的用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定，試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化，陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一制備必須標(biāo)準(zhǔn)化，陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴(yán)格按規(guī)定操定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴(yán)格按規(guī)定操作。作。 陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的。過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科血清標(biāo)本的保

23、存血清標(biāo)本的保存 血清標(biāo)本如果是以無菌操作分離（使用滅菌后的槍頭和凍存管），則可以在28下保存一周，如果為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在-40以下。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科標(biāo)本的采集工作標(biāo)本的采集工作 使用一次性真空采血管（一管一針），按照采血管規(guī)格采使用一次性真空采血管（一管一針），按照采血管規(guī)格采集，通常采血量以采血管規(guī)格集，通常采血量以采血管規(guī)格6080%為宜，但要保證為宜，但要保證擁有足夠的標(biāo)本量用于擁有足夠的標(biāo)本量用于ELISA實(shí)驗(yàn)檢測。實(shí)驗(yàn)檢測。 真空采血管大致分為：真空采血管

24、大致分為： 1肝素納肝素納 2肝素理肝素理 3促凝管促凝管 4血沉管血沉管 5 PT管管 6血常規(guī)管血常規(guī)管 7分離膠促凝劑分離膠促凝劑 8EDTA-K2，K3，Na2 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科血清凍存管血清凍存管 往上級確證單位送檢時(shí)請轉(zhuǎn)管 選擇適合的離心凍存管和凍存盒保存血清標(biāo)本，血清凍存管規(guī)格要求： 1、2ML 2、帶螺口 3、帶內(nèi)密封圈遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科血清標(biāo)本的分離血清標(biāo)本的分離 標(biāo)本離心前一般會自行凝集

25、，通常放置于室溫（2225）3060 min 可自發(fā)完全凝集； 使用離心機(jī)時(shí)應(yīng)注意平衡和避免液體飛濺，必須等離心機(jī)停止工作后才可打開蓋板以免發(fā)生意外。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科溶血溶血 紅細(xì)胞破裂，血紅蛋白逸出導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，簡紅細(xì)胞破裂，血紅蛋白逸出導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，簡稱稱溶血溶血。 可由多種理化因素和毒素引起?？捎啥喾N理化因素和毒素引起。 在體外，如低滲溶液、機(jī)械性強(qiáng)力的振蕩、突然在體外，如低滲溶液、機(jī)械性強(qiáng)力的振蕩、突然低溫都可引發(fā)。低溫都可引發(fā)。 血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，有類似過氧化物的血紅蛋白中含有

26、血紅素基團(tuán)，有類似過氧化物的活性，因此在以標(biāo)記酶的活性，因此在以標(biāo)記酶的ELISAELISA測定中，如果血清測定中，如果血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，從而與后面加入的底標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，從而與后面加入的底物反應(yīng)顯色，容易造成物反應(yīng)顯色，容易造成假陽性假陽性反應(yīng)。反應(yīng)。 建議樣品采集建議樣品采集2 2小時(shí)左右分離出血清小時(shí)左右分離出血清遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科血清標(biāo)本的保存需要注意的問題血清標(biāo)本的保存需要注意的問題 標(biāo)本要有詳細(xì)的標(biāo)識以備查詢（包括樣品受理號、標(biāo)本要有詳細(xì)的標(biāo)識以備查詢（包括樣品受理號、患

27、者姓名）患者姓名） 冰箱和超低溫冰箱的溫度記錄表冰箱和超低溫冰箱的溫度記錄表 使用冷凍標(biāo)簽紙?zhí)顚憳悠窐?biāo)識使用冷凍標(biāo)簽紙?zhí)顚憳悠窐?biāo)識遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科血清標(biāo)本保存血清標(biāo)本保存 一、樣本的采集及血清分離中要注意盡量一、樣本的采集及血清分離中要注意盡量 避免細(xì)菌污染，長時(shí)間存放的標(biāo)本會導(dǎo)致避免細(xì)菌污染，長時(shí)間存放的標(biāo)本會導(dǎo)致一些細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能一些細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；例如會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；例如一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶，會對測定方法產(chǎn)生一些細(xì)

28、菌的內(nèi)源性酶，會對測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。所以在不再進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)非特異性干擾。所以在不再進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)把標(biāo)本放置于冷凍保存。時(shí)應(yīng)把標(biāo)本放置于冷凍保存。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科 二、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停二、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)此外，凍

29、融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科 三、標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的三、標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。測。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科ELISA試驗(yàn)受諸多因素影響試驗(yàn)受諸多因素影響 其中試劑盒的質(zhì)量以及操作者的水平將直其中試劑盒的質(zhì)量以及操作者的水平將直接影響到這一過

30、程的成功與否。因此在完接影響到這一過程的成功與否。因此在完全按照試劑盒要求的前提下，均一，穩(wěn)定全按照試劑盒要求的前提下，均一，穩(wěn)定的操作過程和試驗(yàn)條件是獲得最佳試驗(yàn)結(jié)的操作過程和試驗(yàn)條件是獲得最佳試驗(yàn)結(jié)果的必要條件。果的必要條件。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科外部質(zhì)控外部質(zhì)控 HIV抗體檢測實(shí)驗(yàn)每次實(shí)驗(yàn)都要設(shè)置一孔外抗體檢測實(shí)驗(yàn)每次實(shí)驗(yàn)都要設(shè)置一孔外部對照。制備方法部對照。制備方法: 按一年使用量配置，取按一年使用量配置，取HIV抗體陰性血清和陽性血清，抗體陰性血清和陽性血清，56 30分分鐘滅活，鐘滅活，30

31、00轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)/分離心分離心15分鐘，經(jīng)梯度稀分鐘，經(jīng)梯度稀釋后用釋后用0.2um濾膜過濾除菌。濾膜過濾除菌。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科質(zhì)控質(zhì)控 外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一套對照血清，包括強(qiáng)陽由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一套對照血清，包括強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽性對照，以該試劑盒臨界值置一個(gè)弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut off）

32、的）的23倍為宜。倍為宜。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科質(zhì)控質(zhì)控 可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室自身情況采用商用質(zhì)控品或自制可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室自身情況采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品，以下情況必須要做質(zhì)量控制：質(zhì)控品，以下情況必須要做質(zhì)量控制： 更換試劑批號；更換試劑批號； 更換檢測人員；更換檢測人員； 更換包裝；更換包裝； 更換廠家；更換廠家；遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科ELISA實(shí)驗(yàn)的自身防護(hù)實(shí)驗(yàn)的自身防護(hù) HIV-ELISA實(shí)驗(yàn)盡量使用一次性塑膠實(shí)驗(yàn)

33、器材，實(shí)驗(yàn)盡量使用一次性塑膠實(shí)驗(yàn)器材，由于玻璃器皿容易造成劃傷，建議不要使用。由于玻璃器皿容易造成劃傷，建議不要使用。 加樣及分離標(biāo)本時(shí)應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作，如沒加樣及分離標(biāo)本時(shí)應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作，如沒有配備生物安全柜的實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)人員操作時(shí)可有配備生物安全柜的實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)人員操作時(shí)可以帶口罩和防護(hù)眼鏡進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。以帶口罩和防護(hù)眼鏡進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。 實(shí)驗(yàn)做完應(yīng)及時(shí)將標(biāo)本和實(shí)驗(yàn)耗材做高壓消毒處實(shí)驗(yàn)做完應(yīng)及時(shí)將標(biāo)本和實(shí)驗(yàn)耗材做高壓消毒處理。理。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科收樣登記表收樣登記表 規(guī)范的樣品登記應(yīng)記錄

34、詳細(xì)，包括樣品的個(gè)人信息，病史，以往檢測結(jié)果的記錄等。 HIV血清抗體檢測的樣品登記主要包括： 送檢單位、患者姓名、性別、年齡、職業(yè)、人群類別、身份證號、家庭地址、收樣日期、收樣人姓名以及標(biāo)本狀態(tài)和檢測的結(jié)果 樣品登記本(表)遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科信息采集的重要性信息采集的重要性 每一份做每一份做HIV檢測的標(biāo)本，檢測的結(jié)果涉及到病檢測的標(biāo)本，檢測的結(jié)果涉及到病人的后續(xù)治療，包括流行病學(xué)追蹤、免

35、疫功能檢人的后續(xù)治療，包括流行病學(xué)追蹤、免疫功能檢測和抗病毒治療，做好樣品登記工作可以避免患測和抗病毒治療，做好樣品登記工作可以避免患者延誤治療。者延誤治療。遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科規(guī)范的實(shí)驗(yàn)記錄規(guī)范的實(shí)驗(yàn)記錄 每次做完實(shí)驗(yàn)一定要做好實(shí)驗(yàn)的記錄，對每次做完實(shí)驗(yàn)一定要做好實(shí)驗(yàn)的記錄，對來樣的登記要詳細(xì)規(guī)范來樣的登記要詳細(xì)規(guī)范,實(shí)驗(yàn)記錄盡量使用實(shí)驗(yàn)記錄盡量使用A4紙保存紙保存,有條件的實(shí)驗(yàn)室也可保存電子檔有條件的實(shí)驗(yàn)室也可保存電子檔案以便于查詢案以便于查詢,對于篩查實(shí)驗(yàn)室所使用的記對于篩查實(shí)驗(yàn)室所使用的記錄表格包括樣品登記，試驗(yàn)原始記錄，樣錄表格包括樣品登記，試驗(yàn)原始記錄，樣品送檢單，以及篩查報(bào)告等都要妥善保存。品送檢單，以及篩查報(bào)告等都要妥善保存。儀器試用記錄和消毒滅菌記錄要填寫完整。儀器試用記錄和消毒滅菌記錄要填寫完整。 遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科遏制艾滋遏制艾滋 履行承諾履行承諾 湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治科湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病