化妝品中10種α-羥基酸的檢測(cè)方法

1、附件8化妝品中10種a-羥基酸的檢測(cè)方法Determ in ati on of 10a-hydroxy acid incosmetics1范圍本方法規(guī)定了高效液相色譜法測(cè)定化妝品中a-羥基酸的含量。本方法適用于水劑、膏霜乳液化妝品中a-羥基酸含量的測(cè)定。本方法所指的a-羥基酸包括葡糖醛酸、酒石酸、羥基乙酸、 蘋果酸、乳酸、檸檬酸、2-羥基丁酸、扁桃酸、二苯乙醇酸和 羥基辛酸。2方法提要以水提取化妝品中葡糖醛酸等 10種a-羥基酸組分，用高效液相色譜儀進(jìn)行分析，以保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，峰面積疋量本方法中10種a-羥基酸的檢出限、定量下限及取樣量為1g時(shí)檢出濃度和最低定量濃度見表 1。表1 1

2、0種a羥基酸的檢出限、定量下限和檢出濃度、最低定量濃度a羥基酸檢出限定量下限檢出濃度最低定量濃度組分（卩g （卩g（卩g/g（卩g/g葡糖醛酸0.080.24150450酒石酸0.030.0960180羥基乙酸0.020.0640120蘋果酸0.020.0640120乳酸0.050.15100300檸檬酸0.020.06401202-羥基丁酸0.040.1280240扁桃酸0.0010.00326二苯乙醇酸0.0010.00313羥基辛酸0.020.06401203試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格， 水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1磷酸氫二銨，分析純。3.2

3、磷酸，優(yōu)級(jí)純。3.3甲醇，色譜純。3.4 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：10種a羥基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、CAS登錄號(hào)列于表2。3.5混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別精密稱?。ň_到O.OOOIg） 葡糖醛酸400mg、酒石酸200mg、羥基乙酸400mg、蘋果酸 400mg、乳酸500mg、檸檬酸400mg、2-羥基丁酸500mg、扁桃 酸10mg、二苯乙醇酸10mg和羥基辛酸400mg于同一 50mL容量 瓶中，加水40mL, 60C超聲15min使溶解，用水定容，配制成 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。表2 10種a羥基酸中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量序號(hào)中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分

4、子質(zhì) 量1葡糖醛酸Glucuro nic acid6556-12-3C6H10O7194.142酒石酸Tartaric acid87-69-4C4H 6。6150.093羥基乙酸Glycolic acid79-14-1C2H 4。376.054蘋果酸Malic acid97-67-6C4H 6。5134.095乳酸Lactic acid79-33-4C3H6O390.086檸檬酸Citric acid77-92-9C6H 8。7192.1272-羥基丁酸鈉DL-2-Hydroxybutyric Acid5094-24-6C4H7NaO3126.09Sodium8扁桃酸Man delic aci

5、d90-64-2C8H 8。3152.159二苯乙醇酸Ben zilic acid76-93-7C14H 12。3228.2410羥基辛酸Hydroxycaprylic acid617-73-2C8H 16。3160.214儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器。4.2 天平。4.3超聲波清洗器。4.4水浴鍋。4.5 高速離心機(jī)。4.6 pH 計(jì)。4.7渦旋振蕩器。5分析步驟5.1混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備分別精密移取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.5 ）于10mL容量瓶中，用水定容，配制成濃度如表3所示的混合標(biāo)準(zhǔn) 系列溶液。表3 10種a羥基酸的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度a羥基酸葡糖酒石羥基蘋果乳酸

6、檸檬2-羥 基丁酸扁桃二苯 乙醇 酸羥基組分醛酸酸乙酸酸酸酸辛酸100501001001251001252.52.5100混合標(biāo)準(zhǔn)系200100200200250200250552004002004004005004005001010400列溶液，800400800800100080010002020800mg/L200010002000200025002000250050502000400020004000400050004000500010010040005.2樣品處理稱取樣品1g （精確到0.0001g）于10mL具塞比色管中，置于90C水浴中30min以去除揮發(fā)性有機(jī)溶劑，加水至 10

7、mL刻度，充分渦旋混合 30s, 60C超聲提取30min，取適量樣品在 10000rpm下高速離心15min ,取上清液過(guò)0.45艸的濾膜后作為 待測(cè)溶液。如樣品為油包水等難于在水中分散劑型，可先加入1ml異丙醇渦旋混合30s使分散均勻，再加水至10mL刻度。5.3參考色譜條件色譜柱：Ci8柱(250mm x 4.6mm x )卩或等效色譜柱； 當(dāng)樣品基質(zhì)對(duì)待測(cè)a羥基酸有干擾時(shí)，可采用Ci8柱(250mm x 4.6mmX 3訕按相同流動(dòng)相梯度洗脫程序進(jìn)行分離；流動(dòng)相：A : 0.1mol/L的磷酸氫二銨溶液，用磷酸調(diào) pH值為3.0; B :甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm;柱溫：室溫；進(jìn)樣量：

8、5 I L流動(dòng)相梯度洗脫程序：時(shí)間/min流速 /mL/minV （流動(dòng)相A） /%V （流動(dòng)相B） /%00.7100070.710007.11.01000141.0505014.11.03565231.0356523.10.71000280.710005.4測(cè)定P沢V在“ 5.3色譜條件下，取一基酸的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液m(5.1 )分別進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為橫 坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取“ 5.2項(xiàng)下的待測(cè)溶液進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，測(cè)得峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)溶液中a羥基酸的濃度。按“計(jì)算樣品中a羥基酸的含量。6分析結(jié)果的表述式中：3 樣品中a

9、羥基酸組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，卩g；P從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)組分的質(zhì)量濃度，卩g/mLV 樣品定容體積，mL ;m樣品取樣量，go7圖譜=一心 近址 E OH Q Q o Q o o -n*rw.| I i i | i i i | i i n | i i i | i i i | i i i | i n i | i i i | i i i | i i i | i i i | i i i | i i i | i i i0.00200 4 d(D &CD 1000 12CD 14.00 00 U&OO 2D.00 2200 24.00 26.00 2BWMrii圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(250mm x 4.6m

10、m x ) m1:葡糖醛酸(4.289min) ; 2:酒石酸(4.692min) ; 3:羥基乙酸(5.219min); 4:蘋果酸(6.105min); 5:乳酸(7.449min); 6:檸 檬酸(7.886min) ； 7: 2-羥基丁酸(12.485min) ； 8:扁桃酸(16.446min)； 9:二苯乙醇酸(19.817min) 10:羥基辛酸(20.487min)。圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(250mm x 4.6mm x 3 m1:葡糖醛酸(4.176min) ; 2:酒石酸(4.710min) ; 3:羥基乙酸(5.285min ) ; 4:蘋果酸(6.611min) ;

11、5:乳酸(8.260min ) ; 6:檸 檬酸(9.187min) ; 7: 2-羥基丁酸(13.921min) ; 8:扁桃酸(17.636min);9:二苯乙醇酸(21.613min) 10:羥基辛酸(22.480min)附錄A10種a羥基酸結(jié)果的確證Annex AConfirmation of 10 -hydroxy acid in cosmetics因a羥基酸紫外吸收光譜圖不特征，必要時(shí)可采用液相色譜-質(zhì)譜法確證結(jié)果，以檢查化妝品中是否有其他組分干擾 a羥基酸的測(cè)定。葡糖酸會(huì)干擾酒石酸的測(cè)定，乳糖酸會(huì)干擾葡糖醛酸的測(cè)定。在相同的液相色譜-質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件下，如果樣品中色譜峰的保留時(shí)間和紫

12、外光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)成分一致，所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液 的離子相對(duì)豐度比的差不超過(guò)表 1規(guī)定范圍，則可以判定樣品 中存在對(duì)應(yīng)的測(cè)定成分。表1結(jié)果確證時(shí)相對(duì)離子豐度比的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（k）k50%50% k20%20鳩 k10%kLB.10(-)103A50 .CH100.000| W149.1S7.10(-)550 CK100.0001 w151.2075 IOC-) 11r50.(100.000J 芒75.2043 M-)4,r50.(手133.20115.00(02loo.ooo5&JH| 專89 20 =43IOO.OOQ臚50.fl 篤L91JCrlil.l0(03100.0001 J50.(A 宥1D3.2(K7.KX-14100.00050(H100.0001 花50.thI Z227.10-18130(-)8100.000黑1丄 LA圖1