可見光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度概念

1、 光度準(zhǔn)確度( Photometric Accur acy ) 是一個(gè)非常重要的技術(shù)指標(biāo)。任何使用者買一臺(tái)紫外可見分光光度計(jì)都是為了分析工作, 進(jìn)行分析工作的目的是出數(shù)據(jù), 其基本要求是數(shù)據(jù)要準(zhǔn)確可靠, 這在很大程度上取決于儀器的光度準(zhǔn)確度這個(gè)最重要的技術(shù)指標(biāo)及其有關(guān)指標(biāo)。一、光度準(zhǔn)確度的表示方法 目前, 國(guó)際上對(duì)紫外可見分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的表示方法主要有兩種:一種是吸光度準(zhǔn)確度( Absorbance Accuracy ) 或吸光度誤差( Absorbance Er ror ) , 用AA (或A) 表示; 另一種是透射比準(zhǔn)確度( Transmittance Accuracy) 或透射比誤

2、差, 用TA ( 或T) 表示。國(guó)外的紫外可見分光光度計(jì)制造商, 絕大多數(shù)都給出吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) , 并都指出在什么吸光度情況下測(cè)量。如美國(guó)Varian 公司的Cary500、美國(guó)P-E 公司的Lambda9、Lambda900 等儀器, 都給出在1. 0Ab s 時(shí), 吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A (或A) 為0. 003Ab s。但國(guó)外有少數(shù)儀器制造商在給出吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 的同時(shí), 還給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA(或T)。如日本島津公司的UV-260、UV-2450PC、UV-2550PC 等儀器, 都給出在吸光度為00. 5A 時(shí),

3、吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 為0. 002A; 吸光度為0. 5 1. 0A 時(shí), 吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 為0. 004A。但同時(shí)又給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA (或T) 為0. 3% T。我國(guó)生產(chǎn)紫外可見分光光度計(jì)的廠商, 很多都在給出吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 的同時(shí), 也給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA(或T)。如北京普析通用公司的TU-1901、T U-1800 系列, 北京瑞利公司的UV-2100 , 上海分析儀器總廠的760MC 等紫外可見分光光度計(jì)等, 在給出吸光度為00. 5A 時(shí), 吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A (或A) 為

4、0. 002A;吸光度為0. 5 1. 0A 時(shí), 吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A ) 為0. 004A。但同時(shí)又給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA (或T) 為0. 3%T。還有許多制造商只給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA (或T) , 并且不講明在多少透射比情況下測(cè)試, 這是不對(duì)的。我們認(rèn)為, 給出吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A (或A) , 同時(shí)也給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA (或T) 是對(duì)的。只給出吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A (或A) , 不給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA ( 或T) 也是可以的, 因?yàn)榉鲜褂谜咧灰蠡蛑皇褂梦舛缺硎痉治鰷y(cè)試結(jié)果的習(xí)慣。只給透射比準(zhǔn)確度或

5、透射比誤差TA (或T) ,而不給吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A (或A) 是不合適的, 原因如下: 第一,若給出TA (或T) = 0. 5%T, 而不講明在什么透射比情況下測(cè)試, 就應(yīng)理解為在0100%T 范圍內(nèi)的任何地方測(cè)試都能達(dá)到TA (或T) = 0. 5% T。但實(shí)際上, 若在10% T 處測(cè)量, TA ( 或T) = 0. 5% T 時(shí)產(chǎn)生的透射比相對(duì)誤差為5%。而在90%T 處測(cè)量, 則TA (或T) = 0. 5% T 時(shí)產(chǎn)生的透射比相對(duì)誤差為0. 56% , 二者相差很大。也就是說, 不可能在0100%T 范圍內(nèi)的任何地方測(cè)試都能達(dá)到TA (或T) = 0. 5% T。第二,

6、 用戶在使用紫外可見分光光度計(jì)時(shí), 基本上沒有人只用透射比T 和透射比誤差T A ( 或T)來表示光度準(zhǔn)確度和分析測(cè)試誤差。相反, 大家一般都用吸光度值A(chǔ) 和吸光度誤差A(yù)A (或A) 來表示分析測(cè)試結(jié)果和分析誤差。第三, 為了與國(guó)際接軌, 應(yīng)采用吸光度值A(chǔ) 和吸光度誤差A(yù)A (或A) 來表示紫外可見分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確度。因?yàn)? 目前國(guó)際上絕大多數(shù)使用者, 都是采用吸光度值A(chǔ)和吸光度誤差A(yù)A (或A) 來表示紫外可見分光光度計(jì)的分析測(cè)試結(jié)果和分析誤差。第四, 吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A (或A) 和透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA ( 或T) , 在使用時(shí)二者在數(shù)值上會(huì)相差很大。若要把TA(或T

7、) = 0. 5% T 換算成AA ( 或A) , 則在10% T 處( 相當(dāng)在1A 處) ,0. 5% T 的透射比誤差, 產(chǎn)生的AA ( 或A ) 為0. 022A, 而在90% T 處(相當(dāng)在0. 0046A 處) , TA ( 或T) = 0. 5% T 時(shí)產(chǎn)生的AA ( 或A) 為0. 0024A, 這同樣是一個(gè)驚人的差距。因此, 在給出一臺(tái)紫外可見分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確度時(shí), 不管是用吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 表示,還是用透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA ( 或T) 表示, 都應(yīng)該指出在多少吸光度或在多少透射比情況下測(cè)試。否則, 既會(huì)使人在物理概念上的含糊不清,又會(huì)給使用

8、者帶來極大的麻煩。 但是, 目前仍有許多廠商在給出透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA ( 或T)時(shí), 都一律寫成0. 3% T。特別是許多制造廠商對(duì)自稱是高檔紫外可見分光光度計(jì)的儀器, 基本上都是寫成“ 0. 3% T ( 0100% T )”。如日本島津的UV-2401PC、UV-2450PC、UV-2550PC 等紫外可見分光光度計(jì), 國(guó)內(nèi)的TU1900、UV-2100、UV-760MC 等紫外可見分光光度計(jì)等。從理論上講任何高檔紫外可見分光光度計(jì)的透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA (或T) 不可能在0100% T 內(nèi)都能達(dá)到0. 3%T 的透射比準(zhǔn)確度。 在紫外可見分光光度計(jì)的技術(shù)指標(biāo)表示方法上,

9、 之所以產(chǎn)生錯(cuò)誤, 主要原因有兩個(gè): 第一, 不甚了解透射比準(zhǔn)確度或透射比誤差TA (或T) 與透過率真值T 的關(guān)系, 不懂得吸光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 與吸光度真值A(chǔ) 的關(guān)系。不知道影響透射比誤差TA (或T) 和吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 的主要因素。第二, 商業(yè)上的需要, 人家給出的都是 0. 3% T ( 0 100% T) , 我如果不這樣寫, 就會(huì)影響銷售。 目前國(guó)內(nèi)外都有一些廠商在說明書或儀器樣本中稱“ 光度準(zhǔn)確度” 為“ 測(cè)光精度”, 這種稱謂混淆了準(zhǔn)確度( Accuuracy) 和精密度( Pr ecision ) 的概念。準(zhǔn)確度是指的測(cè)量值與理論值之差, 該偏

10、差越小說明測(cè)量的數(shù)據(jù)越準(zhǔn)確可靠, 或者說光度準(zhǔn)確度越高。而精密度是指的分析測(cè)試數(shù)據(jù)的離散性或重復(fù)性, 是指同一操作者, 在一次開機(jī)中連續(xù)重復(fù)多次測(cè)試某一吸收峰的吸光度值中最大與最小值之差。該差值越小, 說明該儀器的光度重復(fù)性越好。“ 光度準(zhǔn)確度” 和“ 光度精密度” 二者不能混淆。正確的說法應(yīng)該是紫外可見分光光度計(jì)的“ 光度準(zhǔn)確度” 而不能說成“ 測(cè)光精度”。 還有人講“ 紫外可見分光光度計(jì)沒有準(zhǔn)確度, 光度精密度或光度重復(fù)性就是光度準(zhǔn)確度”。這也是一個(gè)錯(cuò)誤的。光度精密度或光度重復(fù)性是指多次測(cè)量中的離散性。如3 次或5 次測(cè)量中吸光度的最大值與最小值之差即為光度精密度或光度重復(fù)性。而準(zhǔn)確度則是

11、指實(shí)際測(cè)量的吸光度值與真值或理論值之差。Owen 為了說明精密度( Precision ) 和準(zhǔn)確度( Accuuracy ) 的區(qū)別, 用打靶的例子作了精辟的說明( 見圖4-1 )。二、影響光度準(zhǔn)確度的主要因素 影響紫外可見分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的主要因素有以下幾個(gè)方面。 儀器的雜散光大小。 儀器的光度噪聲。 儀器的基線平直度。 儀器的光譜帶寬。 試樣的來源, 包括樣品的制備, 取樣的方法。 樣品的制備, 包括稱量、容量、溶劑、試劑、pH 值、時(shí)間、溫度等。 比色皿的性能等。 由此可知, 光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差A(yù)A ( 或A) 是一個(gè)綜合性的技術(shù)指標(biāo)。要使用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)

12、, 必須注重上述幾個(gè)方面的影響。否則, 不可能得到準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)。特別應(yīng)該指出的是, 在給出吸光度誤差A(yù)A (或A) , 同時(shí)也給出透射比誤差TA ( 或T) 時(shí), 二者不能相互矛盾。三、吸光度準(zhǔn)確度和透射比準(zhǔn)確度的關(guān)系 比耳定律指出: A = - lg T, 故T = 10 - A ; C = ( - 1/ ab) lg T, 故T =10 - abc 。 式和式中, A 為吸光度; T 為透射比; a 為摩爾吸光系數(shù); b 為光程;c 為被測(cè)試樣的濃度。由此可見, A、T、C 之間有著密切的關(guān)系。由于A 或T 的測(cè)量誤差可引起對(duì)被測(cè)試樣濃度C 的測(cè)量誤差。若設(shè)T 的誤差為T A ( 或T)

13、 , 則可求出不同TA ( 或T) 的情況下, 相對(duì)吸光度誤差A(yù)A/ A ( AA 為吸光度真值A(chǔ) 與測(cè)量值A(chǔ)m 之差) 與A 的關(guān)系?；蚯蟪霾煌珹 下AA/ A ( 或A/ A) 與TA 的關(guān)系。 作者研究了AA/ A 與TA 和A 的關(guān)系, 導(dǎo)出了AA/ A 與T A 和A 之間的關(guān)系的理論計(jì)算公式, 具有普遍的指導(dǎo)意義。式( 4-9 ) 為吸光度誤差A(yù)A 與吸光度真值A(chǔ) 和透射比絕對(duì)誤差T A 關(guān)系的理論計(jì)算公式。由此可見, AA 與A 和T A 的數(shù)學(xué)關(guān)系式比較復(fù)雜; 當(dāng)TA 一定時(shí),AA 可通過不同的A 求得; 當(dāng)A 一定時(shí), AA 可通過不同的TA 求得。圖4-2 透射比誤差T(

14、TA ) 與吸光度誤差A(yù) 和吸光度真值A(chǔ)0 的關(guān)系 作者根據(jù)式( 4-9 ) , 計(jì)算出了7 種透射比誤差下, 透射比誤差TA 與吸光度真值A(chǔ) 的關(guān)系(即分析測(cè)試結(jié)果的相對(duì)誤差) , 繪制了這6 條誤差曲線很適用, 可以覆蓋目前各國(guó)不同廠家制造的、各種不同類型和型號(hào)的紫外可見分光光度計(jì)的誤差關(guān)系。分析測(cè)試工作者只要知道自 圖4-2 透射比誤差T( TA ) 與吸光度誤差A(yù) 和吸光度真值A(chǔ)0 的關(guān)系己使用的儀器的TA ( 制造商都會(huì)提供, 最好使用自己測(cè)試的數(shù)據(jù)) , 再根據(jù)使用者當(dāng)時(shí)測(cè)試的吸光度數(shù)據(jù), 就可以從圖4-2 查得使用者當(dāng)時(shí)所測(cè)數(shù)據(jù)因?yàn)閮x器的TA 而引起的相對(duì)誤差, 從而知道自己分析

15、測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性。如某廠商給出的儀器指標(biāo)中, TA 為0. 5% T , 而分析測(cè)試要求的準(zhǔn)確度為1% , 則可馬上從圖4-2 上查得該儀器肯定不能滿足自己的使用要求; 又如若儀器給出的TA 為0. 3%T , 但分析測(cè)試要求的準(zhǔn)確度為1% (相對(duì)誤差) , 則可馬上從圖4-2 上查得該儀器因?yàn)門A 為0. 3% T, 由于TA (或T) 的限制, 即使其他因素不產(chǎn)生誤差, 它也只能滿足對(duì)吸光度為0. 250. 75A 的試樣的分析測(cè)試要求; 若試樣的吸光度 0. 75A ( 濃度偏高) 時(shí),則測(cè)量誤差都會(huì)超過1%。 目前, 國(guó)內(nèi)外許多儀器廠商, 對(duì)光度準(zhǔn)確度這個(gè)非常關(guān)鍵的技術(shù)指標(biāo)經(jīng)常同時(shí)用兩

16、種方法表示: 一種是AA ( 或A) , 另一種是TA ( 或T) , 但其中很多二者是自相矛盾的。如日本島津的UV-3101PC 型紫外可見分光光度計(jì),它給出的光度準(zhǔn)確度分別表示為: 吸光度誤差A(yù)A (或A) 為0. 002A (00. 5A) ; 0. 004A ( 0. 5 1. 0A ) ; 同時(shí)又給出透射比誤差TA ( 或T) 為0. 3% T。從圖4-2 可知, 這是一組自相矛盾的技術(shù)指標(biāo)。因?yàn)? 從圖4-2 可查到TA ( 或T) 為0. 3% T 時(shí), 若要求AA ( 或A) 為0. 002A, 則只能在0. 2A 內(nèi)(即在00. 2A) 才可達(dá)到。不可能在00. 5A 內(nèi)保證

17、AA ( 或A) 為0. 002A。同樣, TA (或T) 為0. 3%T 時(shí), 若要求AA ( 或A)為0. 004A, 則只能在00. 45A 內(nèi)才是可靠的。在試樣吸光度為0. 45A 以上時(shí), AA ( 或A) 就超過 0. 004A, 若在1. 0A 處, 則AA ( 或A) =0. 0128A, 超過0. 004A 的3 倍左右。所以, 日本島津的UV-3101PC 型紫外可見分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確度指標(biāo)中, AA ( 或A) 和TA ( 或T) 是自相矛盾的。同樣, 日本日立的U-3400 型紫外可見分光光度計(jì)的這一指標(biāo)也和日本島津的UV-3101PC 一樣是自相矛盾的。而美國(guó)P-E

18、 公司的Lambda 9 ,Lambda 900 , 美國(guó)Varian 公司的Cary5、Cary500 和Cary6000 等給出的光度準(zhǔn)確度指標(biāo)AA ( 或A) 為0. 003A ( 1A ) ; TA ( 或T) = 0. 08% T。從圖4-2 可知, 二者比較一致。從表3-7 可查到: 在TA ( 或T) = 0. 08% T時(shí), AA (或A) 為 0. 0034A ( 1A ) 。所以, 美國(guó)P-E 公司的Lambda 9 ,Lambda 900 , 美國(guó)Varian 公司的Cary5、Cary500 和Cary6000 等紫外可見分光光度計(jì)儀器給出的光度準(zhǔn)確度指標(biāo)AA ( 或A

19、) 為 0. 003A ( 1A ) ; TA(或T) = 0. 08%T 是可靠的。四、光度準(zhǔn)確度測(cè)試方法 用于紫外可見分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確度測(cè)試的材料, 應(yīng)該是純度高、穩(wěn)定性好的物質(zhì)。這些物質(zhì)中最主要的是鉻酸鉀( K2 CrO4 , 一般在堿性溶液中)、重鉻酸鉀( K2 Cr2 O7 , 一般在酸性溶液中) 、硝酸鉀、中性濾光片等。在堿性溶液中的鉻酸鉀是一種好材料, 但是因?yàn)楹袎A性, 不能儲(chǔ)藏在普通玻璃容器中, 而需要儲(chǔ)藏在石英器皿中, 硝酸鉀本身不大穩(wěn)定。這些都限制了它們的使用。因此, 最好選擇易于純化又溶于酸性介質(zhì)中的物質(zhì), 并且它們的稀溶液也是很穩(wěn)定的。因此, 重鉻酸鉀的0. 00

20、5mol/ L H2 SO4 溶液經(jīng)常被使用。許多科學(xué)家認(rèn)為, 用紫外濾光片來測(cè)試紫外可見分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確度, 具有很大的優(yōu)點(diǎn)。因?yàn)樗鼈兊姆€(wěn)定性更好, 又便于攜帶, 還有許多優(yōu)點(diǎn)將在后面討論。紫外可見分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確度測(cè)試方法, 目前國(guó)內(nèi)外各生產(chǎn)廠家作法不一, 其主要原因是各國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)不同; 如美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定: “選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)參比材料, 在規(guī)定的波長(zhǎng)處, 連續(xù)測(cè)10 個(gè)吸光度或透射比讀數(shù), 取10個(gè)讀數(shù)的平均值, 實(shí)際吸光度或透射比與觀測(cè)值的平均值之差, 即為光度準(zhǔn)確度”。美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)還規(guī)定了計(jì)算光度準(zhǔn)確度的標(biāo)準(zhǔn)偏差S 的方法; 規(guī)定指出吸光度準(zhǔn)確度用AA 表示, 則有式( 4-

21、10) 、式( 4-11) 中, S 為標(biāo)準(zhǔn)偏差; Ai 或T i 為每次測(cè)量時(shí)吸光度或透射比的讀數(shù)值; Aa 或Ta 為吸光度或透射比的平均值; n 為測(cè)量次數(shù)( 一般取57 次)。 美國(guó)NBS 規(guī)定, 在可見區(qū)用930 標(biāo)準(zhǔn)片來測(cè)定光度準(zhǔn)確度, 其標(biāo)準(zhǔn)透射比值分別為10%、20%、30%的中性玻璃濾光片。規(guī)定還指出也可用NBS 的931 , 它是一種溶液。而在紫外區(qū)內(nèi), 則規(guī)定用NBS 的203 來測(cè)定光度準(zhǔn)確度; 它是一種標(biāo)準(zhǔn)透射比值分別為90%、30%、10% 熔融石英濾光片。此外,美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)還規(guī)定在紫外區(qū)內(nèi), 用戶還可以自己配置高純度的化合物溶液來測(cè)定光度準(zhǔn)確度。為此, 美國(guó)NBS 已

22、發(fā)布了鉻酸鉀(K2 CrO4 )、重鉻酸鉀( K2 Cr2 O7 )等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可供選用。 我國(guó)在1992 年制訂的紫外可見分光光度計(jì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定, 用重鉻酸鉀溶液來測(cè)試紫外區(qū)的光度準(zhǔn)確度, 并明確指出了測(cè)試波長(zhǎng)。在可見光區(qū)規(guī)定可用中性濾光片來檢測(cè)光度準(zhǔn)確度, 其標(biāo)準(zhǔn)片的透射比值分別為10%、20%、40%左右; 同時(shí)還規(guī)定在紫外可見整個(gè)區(qū)間, 都可用中性濾光片來檢測(cè)光度準(zhǔn)確度, 其標(biāo)準(zhǔn)片的透射比值也分別為10%、20%、40%左右。 安徽省計(jì)量測(cè)試研究所和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心共同研制的紫外光區(qū)透射比標(biāo)準(zhǔn)濾光片, TA 優(yōu)于0. 2% , 穩(wěn)定性優(yōu)于0. 1% , 其測(cè)試波長(zhǎng)分別為270nm、

23、293 nm 和350 nm, 相應(yīng)的透射比標(biāo)準(zhǔn)值各為11. 4%、3. 9%、52. 9%左右。用來測(cè)試日本島津公司的UV-260 紫外可見分光光度計(jì)和無錫高速分析儀器廠生產(chǎn)的WFZ-753 型紫外可見分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確度, 具體操作時(shí),以空氣作參照, 對(duì)規(guī)定的波長(zhǎng)處各測(cè)7 次, 取其平均值, 與標(biāo)準(zhǔn)值相減, 則得到各規(guī)定的波長(zhǎng)處的TA 。而后, 取三個(gè)規(guī)定波長(zhǎng)中最差者作為被測(cè)紫外可見分光光度計(jì)儀器的透射比準(zhǔn)確度。再根據(jù)式( 4-2 ) , 求得被測(cè)儀器在各規(guī)定的波長(zhǎng)處的透射比準(zhǔn)確度, 然后以三個(gè)規(guī)定波長(zhǎng)中的最差者作為被測(cè)儀器的透射比準(zhǔn)確度。 影響紫外分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的因素很多, 主要

24、因素有雜散光、噪聲、基線平直度、光譜帶寬等, 將在本章的三至六節(jié)進(jìn)行詳細(xì)討論。五、與光度準(zhǔn)確度有關(guān)的幾個(gè)重要問題( 一) 光度準(zhǔn)確度的測(cè)試材料 美國(guó)NBS 規(guī)定測(cè)試材料可以是固體標(biāo)準(zhǔn)濾光片, 如930、203 標(biāo)準(zhǔn)片等,也可以是化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液, 如鉻酸鉀、重鉻酸鉀溶液等, 用戶可以任意選擇。我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)也與NBS 相類似。各個(gè)國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)中, 都各自講明了固體和液體兩者的優(yōu)缺點(diǎn)。作者認(rèn)為固體標(biāo)準(zhǔn)濾光片比標(biāo)準(zhǔn)溶液好, 理由如下: 固體標(biāo)準(zhǔn)濾光片操作簡(jiǎn)單, 攜帶方便。 固體標(biāo)準(zhǔn)濾光片可以用空氣作參照, 避免了尋找理想?yún)⒄掌穆闊?固體標(biāo)準(zhǔn)濾光片可以得到多個(gè)所需要的、較理想的峰或谷。如安徽省計(jì)量

25、測(cè)試研究所研制的BW2018 標(biāo)準(zhǔn)片, 可以有兩個(gè)峰一個(gè)谷, 且分布均勻(270 nm、293nm、350 nm)。 固體標(biāo)準(zhǔn)濾光片的標(biāo)準(zhǔn)片基本身可以吸收一部分雜散光, 在吸收( 或透射) 峰的強(qiáng)度很小( 或很大) 時(shí), 可以提高光度準(zhǔn)確度的測(cè)量準(zhǔn)確度。( 二) 光度準(zhǔn)確度與光譜帶寬的關(guān)系 光譜帶寬是紫外分光光度計(jì)分析誤差的主要來源之一。一般來講, 目前國(guó)內(nèi)外的紫外分光光度計(jì)的儀器研究者或制造者, 在給出AA 或TA 時(shí), 都不講明在什么光譜帶寬( SBW) 條件下測(cè)量, 這是不對(duì)的。 A. Owen 在1988 年指出: “吸光度測(cè)量的準(zhǔn)確度, 取決于儀器的SBW 與試樣的自然帶寬( NBW

26、) 的比率?！?( 自然帶寬被定義為最大吸收值的1/ 2 處的吸收譜帶寬度)。Knowles 和A. Owen 在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上指出: SBW/NBW0. 1 時(shí), 吸光度準(zhǔn)確度可高達(dá)99. 5% ; 如果SBW/ NBW 增大, 則吸光度測(cè)量誤差會(huì)增加。A. Owen 還指出, NBW20 時(shí), 2nm 的SBW 對(duì)于吸光度的準(zhǔn)確測(cè)定是足夠的, 可滿足大約99% 的日常分析。這也是我國(guó)藥典規(guī)定用于藥檢的紫外可見分光光度計(jì)的SBW 一定要求2nm 的主要原因。測(cè)量光度準(zhǔn)確度時(shí), 必須注意SBW 的選擇。具體理由是: SBW 小, 則對(duì)應(yīng)的狹縫寬度小, 此時(shí)的雜散光也小, 可提高吸光度測(cè)量的準(zhǔn)確度。 SBW 小, 對(duì)同一自然帶寬( NBW) 來講, 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度會(huì)高。因?yàn)椴煌牟ㄩL(zhǎng)有不同的摩爾吸光系數(shù), 所以, 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度高時(shí), Beer 定律的偏離也會(huì)小, 即光度準(zhǔn)確度測(cè)試誤差小。 SBW 小, 則對(duì)應(yīng)的狹縫窄, 但單色光的單色性也好, 更能接近單色光, 也可減少Beer 定律的偏離, 提高測(cè)量精度。但必須注意, SBW 不能太小, 否則信號(hào)弱, 儀器的信噪比小, 靈敏度差