血紅蛋白的提取和分離習題帶答案

1、課題3 血紅蛋白的提取和分離【學習目標】1、簡述蛋白質(zhì)提取和分離的基本原理2、理解蛋白質(zhì)提取與分離的實驗操作過程【重點與難點】重點：蛋白質(zhì)提取和分離的基本原理難點：蛋白質(zhì)提取與分離的實驗操作（凝膠色譜操作）過程【知識鏈接】1. 血紅蛋白存在于何種細胞？其特性和作用分別是什么？2. 為何不選用雞血做實驗材料？3. 分離不同種類蛋白質(zhì)的依據(jù)是什么？【自主學習內(nèi)容一】基礎(chǔ)知識（記憶）1凝膠色譜法： 凝膠色譜法也稱做 ，是根據(jù) 分離蛋白質(zhì)的有效方法。凝膠實際上是一些由 構(gòu)成的多孔球體，在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子通過凝膠時的速度不同，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)由于能夠 路程

2、較 ，移動速度 ；而相對分子質(zhì)量較大的的蛋白質(zhì) ，只能在 移動，路程 ，移動速度 。2緩沖液 緩沖液通常是由12種緩沖劑（如NaHCO3、（NH4）2SO4）溶解于水中配制而成；其作用是 。3電泳： 電泳是指 電泳利用了待分離樣品中各分子 以及 ，使帶電分子產(chǎn)生不同的 ，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。兩種常用的電泳方法是 和 。在測定蛋白質(zhì)分子量時通常使用 ，其中SDS的作用是 ， 。蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率取決于它 以及 等因素?！咀灾鲗W習內(nèi)容二】實驗操作（凝膠色譜法）1.蛋白質(zhì)的提取和分離 一般分四步： 、 、 和 。2.樣品處理（1）紅細胞的洗滌：洗滌紅細胞的目的是 采集的血

3、樣要及時通過采用 的方法使紅液分層，用膠頭吸管吸出上層透明的黃色 ，將下層 紅細胞倒入燒杯，再加入 ，緩慢攪拌 推薦精選低速離心，如此重復(fù)三次，直到 ，表明紅細胞憶洗滌干凈。注意：離心轉(zhuǎn)速及離心時間不能過長，否則 ，達不到分離效果。（2）血紅蛋白的釋放：原理是當外界溶液濃度低于細胞內(nèi)液濃度時，細胞 ，紅細胞由于沒有 的保護，而 ，釋放出血紅蛋白；使用的試劑是 。（3）分離血紅蛋白溶液：將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的 ，第2層為白色薄層固體，是 ，第3層是紅色透明的液體，這是 ，第4層是紅細胞破碎物沉淀物（其他雜質(zhì)，呈 色）。將試管中的液體用濾紙過濾，除去 ，

4、于分液漏斗中靜置片刻后，分出 層的紅色透明液體。（4）透析：取2mL的血紅蛋白溶液裝入 中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)量濃度為 中（pH為 ），透析12h。透析可以去除樣品中 的雜質(zhì)，或用于 。3凝膠色譜操作首先要 ；第二步是 ，因為 ，因此裝柱前需要根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計算所需的凝膠量。在裝填凝膠柱時，不得有 ，避免影響分離效果；第三步是 ?！竞献魈骄俊?凝膠色譜分離蛋白質(zhì)的原理是怎樣的？2. 根據(jù)凝膠色譜分離的原理分析，在裝填凝膠時要緊密、均勻的原因。推薦精選課題3 血紅蛋白的提取和分離當堂檢測2利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)，最先洗脫的蛋白質(zhì)特點是（ ） A相對分子質(zhì)量大的 B溶解度高的

5、C相對分子質(zhì)量小的 D所帶電荷多的3. 凝膠色譜法中所用的凝膠化學本質(zhì)大多是（ ） A糖類化合物 B. 脂質(zhì) C. 蛋白質(zhì) D. 核酸4相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進行過程可表示為圖中哪一個 ( ) 5用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì) ( ) A路程較長，移動速度較慢 B路程較長，移動速度較快 C路程較短，移動速度較慢 D路程較短，移動速度較快6能進入凝膠內(nèi)部通道的蛋白質(zhì)是指 ( )A相對分子質(zhì)量大的 B吸附性高的 C相對分子質(zhì)量小的 D溶解度低的7在對蛋白質(zhì)進行洗脫時，使用的試劑是 A蒸餾水 B生理鹽水 C緩沖液 D飽和磷酸鹽溶液8緩沖液的作用是在一定范圍內(nèi)，抵制外界的影響來

6、維持下列哪一項狀態(tài)基本不變的A溫度 BpH C滲透壓 D氧氣濃度9初步分離血紅蛋白的實驗中用到的緩沖溶液為 ( )AH2 CO3一NaHCO3緩沖液 BNH4OHNH4Cl緩沖液CCH3 COOHCH3 COONa緩沖液 DH3PO4緩沖液10蛋白質(zhì)提取和分離分為哪幾步 ( )A樣品處理、凝膠色譜操作、SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳B樣品處理、凝膠色譜操作、純化C樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定 D樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定11. 血紅蛋白因含有什么物質(zhì)而呈紅色 ( ) AO2 BCO CMg2+ D血紅素12. 將攪拌好的混合液離心來分離血紅蛋白溶液時，第二層是（ ） A. 甲苯 B. 血

7、紅蛋白水溶液 C. 脂溶性物質(zhì)的沉淀層 D. 其他雜質(zhì)的沉淀13下列說法不正確的是（ ） A. 血紅蛋白在釋放時，加蒸餾水到原血液的體積，再加40體積的甲苯，充分攪拌 B. 血紅蛋白溶液離心后分為4層，第1層為白色薄層固體 C. 血紅蛋白溶液離心后分為4層，第4層為暗紅色沉淀物 D. 血紅蛋白溶液離心后分為4層，第3層為紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液14. 下列操作正確的是（ ）推薦精選 A. 分離紅細胞時采用低速長時間離心 B. 紅細胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可C. 分離血紅蛋白溶液是低速短時間離心 D. 透析時要用20mmol/l的磷酸緩沖液，透析12h15使用十二烷基硫酸鈉一

8、聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的遷移速度完全取決于 A電荷的多少 B分子的大小 C肽鏈的多少 D分子形狀的差異16洗滌紅細胞的目的是 ( ) A去除血清 B去除雜蛋白 C除去血小板 D除去水17洗滌紅細胞時，分離所用的方法為 ( )A低速長時間離心 B低速短時間離心 C高速長時間離心 D高速短時間離心18SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳法中加入SDS的作用是( ) A增大蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量 B改變蛋白質(zhì)的形狀 C掩蓋不同種蛋白質(zhì)問的電荷差別 D減少蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量19下列有關(guān)凝膠色譜法中樣品的加入和洗脫的敘述中，正確的是 ( ) A先加入1 mL透析后的樣品 B加樣前要使緩沖液緩慢下降，全部

9、流出C如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動，說明色譜柱制作成功 D洗脫時可以用緩沖液也可以用清水20在下列哪一種條件下生物大分子具有的可解離的基團會帶上正電或負電 ( ) A一定溫度 B一定pH C一定壓強 D一定容器21電泳時帶電粒子在電場的作用下，移動所向的電極的方向與其所帶電荷是 ( ) A相同 B相反 C相對 D相向22樣品的加入和洗脫的操作不正確的是（ ） A. 加樣前，打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到凝膠面的下面 B. 加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi) C. 等樣品完全進入凝膠層后，關(guān)閉下端出口 D. 用吸管小心的將1ml透析后的樣品加到色譜柱的頂端，不要破壞

10、凝膠面23人體正常的血紅蛋白中應(yīng)含有Fe2+，若誤食亞硝酸鹽，則導(dǎo)致血紅蛋白中的Fe2+。轉(zhuǎn)化為Fe3+，產(chǎn)生高價鐵血紅蛋白而中毒。服用維生素C可解除亞硝酸鹽中毒。在維生素C參與的反應(yīng)中 ( )A亞硝酸鹽是還原劑 B維生素C是氧化劑 C亞硝酸鹽被氧化 D維生素C將Fe3+還原為Fe2+24加有少量檸檬酸鈉(防止血液凝固)的豬血分裝于標號、的試管中，隨后依次加入質(zhì)量分數(shù)為03、09和15的氯化鈉溶液稀釋，30 min后離心。下列敘述中，正確的是 ( ) A和試管的上清液中有血紅蛋白，沉淀中都有紅細胞 B和試管的上清液呈淡黃色，沉淀中均有皺縮的紅細胞 C和試管的沉淀中分別有紅細胞的碎片和皺縮的紅細

11、胞 D和試管的上清液是血清（血清與血漿的主要區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原）25在血紅蛋白的整個提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理的目的是 ( )A磷酸緩沖液會加速血紅蛋白的提取過程 B血紅蛋白是一種兩性物質(zhì)，需要酸中和C防止血紅蛋白被02氧化 D讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和功能推薦精選26下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的程度敘述錯誤的是（ ） A. 樣品的處理就是通過一系列操作收集到血紅蛋白溶液 B. 通過透析可以去除樣品中分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)，此為樣品的粗提取 C. 可通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化 D. 可通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血紅蛋白的純度27

12、選用紅細胞作分離蛋白質(zhì)的實驗材料，下列是其優(yōu)點的是 ( ) A血紅蛋白是有色蛋白 B紅細胞無細胞核 C紅細胞蛋白質(zhì)含量高 D紅細胞DNA含量高28下面關(guān)于對血紅蛋白提取和分離的樣品的處理措施中，不正確的是 ( ) A采集血樣后要高速短時問離心獲得血細胞 B洗滌三次后如上清液仍有黃色，可增加洗滌次數(shù)，否則血漿蛋白無法除凈。 C在蒸餾水和甲苯的作用下，細胞破裂，釋放出血紅蛋白 D釋放血紅蛋白后再經(jīng)過離心，就可以使血紅蛋白和其他雜質(zhì)分離開來29下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的過程的敘述中，不正確的是 ( ) A樣品的處理就是通過一系列操作收集到血紅蛋白溶液 B通過透析可以去除樣品中相對分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)

13、，此為樣品的粗提取 C可通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化 D可通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定 血紅蛋白的純度30雄性激素是小分子脂溶性物質(zhì)，很容易穿過細胞膜。睪丸每天分泌的雄性激素約7 mg，其中約2呈游離狀態(tài)，其余在血中與血漿蛋白呈可逆性結(jié)合。下列有關(guān)雄性激素與血漿蛋白結(jié)合后的作用的敘述中，不正確的是( ) A使其不容易通過腎臟排出 B使其不容易進入細胞 C使其有效濃度處于特定水平 D抑制雄性激素發(fā)揮作用31. 紅細胞含有大量的血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶氧氣或二氧化碳，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關(guān)問題： （1）血紅蛋白提取和分離的程度可分為四步：_、_、_和_。（2）實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。加入檸檬酸鈉的目的是_。以上所述的過程即是樣品處理，它包括_、_、收集血紅蛋白溶液。（3）收集的血紅蛋白溶液在透