染色體核型分析技術(shù)

1、v從染色體玻片標(biāo)本和染色體照片的對(duì)比分析，進(jìn)行染色體分組，并對(duì)組內(nèi)各染色體的長(zhǎng)度、著絲點(diǎn)位置、臂比和隨體有無(wú)等形態(tài)特征進(jìn)行觀測(cè)和描述，從而闡明生物的染色體組成，確定其染色體組型，這種過(guò)程稱(chēng)為染色體組型分析。v因其實(shí)用性，已成為染色體異常的常規(guī)篩選技術(shù)。相關(guān)概念人類(lèi)染色體核型分析標(biāo)準(zhǔn)是丹佛（人類(lèi)染色體核型分析標(biāo)準(zhǔn)是丹佛（denver）體制）體制（人類(lèi)有絲分裂染色體命名體制）。該體制規(guī)定：（人類(lèi)有絲分裂染色體命名體制）。該體制規(guī)定：1.每一條染色體可通過(guò)相對(duì)長(zhǎng)度、臂率和著絲粒指數(shù)每一條染色體可通過(guò)相對(duì)長(zhǎng)度、臂率和著絲粒指數(shù)等三個(gè)參數(shù)予以識(shí)別；等三個(gè)參數(shù)予以識(shí)別； 每條染色體長(zhǎng)度每條染色體長(zhǎng)度相對(duì)長(zhǎng)

2、度相對(duì)長(zhǎng)度=100% 22條常染色體條常染色體+x的總長(zhǎng)度的總長(zhǎng)度 短臂指數(shù)著絲粒指數(shù)=100% 該染色體長(zhǎng)度 長(zhǎng)臂長(zhǎng)度 臂率=100% 短臂長(zhǎng)度 2.常染色體按長(zhǎng)度遞減的次序以122編號(hào)，性染色體則稱(chēng)x和yv人類(lèi)的46條染色體根據(jù)長(zhǎng)度遞減順序和著絲粒位置劃分為7個(gè)易區(qū)分的組，即以字母ag表示7組染色體，并決定將副縊痕和隨體作為識(shí)別染色體的輔助指標(biāo)。v核型的表示方法： 正常男性核型：46，xy 正常女性核型：46，xx 非顯帶的染色體： 染色體標(biāo)本制作好后，不經(jīng)處理直接染色，整條染色體均勻著色（相對(duì)于后面的顯帶染色體而言）。非顯帶染色體非顯帶染色體顯帶染色體顯帶染色體染色體編號(hào)(人x染色體)記

3、述一特定帶時(shí)，需要寫(xiě)明4個(gè)內(nèi)容：染色體號(hào)，長(zhǎng)短臂，區(qū)的號(hào)序和帶的號(hào)序。這些內(nèi)容按順序?qū)?，不用間隔或加標(biāo)點(diǎn)。如果某一帶被再細(xì)分，在原帶號(hào)數(shù)后加一小數(shù)點(diǎn)，編號(hào)原則仍按從著絲粒往臂端序貫編號(hào)。如1p31.2代表一號(hào)染色體短臂3區(qū)1帶第2亞帶核型描述v首先列出染色體總數(shù)，然后是性染色體組成，接著列出異常的染色體數(shù)目或形態(tài)。下列統(tǒng)一的命名符號(hào)：a-g 染色體組的名稱(chēng)1-22 染色體編號(hào)x,y 性染色體del 缺失der 結(jié)構(gòu)重排的染色體dup 重復(fù)inv 倒位t 易位+/- 在染色體符號(hào)前表示染色體增加或減少，在染色體符號(hào)后表示染色體多出或缺少一部分grq帶技術(shù)v人類(lèi)染色體用giemsa染料染色呈均質(zhì)狀

4、，但是如果染色體經(jīng)過(guò)變性和(或)酶消化等不同處理后，染色可呈現(xiàn)一系列深淺交替的帶紋，這些帶紋圖稱(chēng)為染色體帶型。v顯帶技術(shù)就是通過(guò)特殊的染色方法使染色體的不同區(qū)域著色，使染色體在光鏡下呈現(xiàn)出明暗相間的帶紋。v這種帶對(duì)每一條染色體來(lái)說(shuō)都是獨(dú)特的，可以區(qū)分和確認(rèn)每一條染色體。顯帶方法顯帶方法：vg-顯帶：是最常用的方法。標(biāo)本經(jīng)胰蛋白酶處理后，應(yīng)用giemsa染色，鏡檢、分析,顯示深染和淺染相間的帶紋。優(yōu)點(diǎn)：g帶在各條染色體上顯出的帶型和q帶型基本相同 ，普通顯微鏡下可以觀察中期染色體不經(jīng)鹽酸水解或不經(jīng)胰酶處理的情況下，經(jīng)吉姆薩染色后所呈現(xiàn)的區(qū)帶。v除除g顯帶、顯帶、r-顯帶外還有：顯帶外還有：vq-

5、顯帶：熒光顯帶，同顯帶：熒光顯帶，同g顯帶帶紋。顯帶帶紋。vt-顯帶：末端顯帶。顯帶：末端顯帶。vc-顯帶：著絲粒顯帶。顯帶：著絲粒顯帶。v新技術(shù)的應(yīng)用使人們能夠觀察到前中期染色新技術(shù)的應(yīng)用使人們能夠觀察到前中期染色體，比中期染色體更伸展，這樣觀察的分辨體，比中期染色體更伸展，這樣觀察的分辨率更高，可顯示率更高，可顯示550850條帶，即高分辨染條帶，即高分辨染色體。色體。熒光原位雜交技術(shù)v熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization fish)是在20世紀(jì)80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)

6、記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導(dǎo)分子結(jié)合，雜交后再通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料。fish的基本原理是dna(或rna)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或dna纖維切片上，再用與熒光素分子耦聯(lián)的單克隆抗體與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合，來(lái)檢測(cè)dna序列在染色體或dna纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析流程 vfish樣本的制備探針的制備探針標(biāo)記雜交染色體顯帶熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果分析。 特點(diǎn)vfish技術(shù)作為非放射性檢測(cè)體系，具有以下優(yōu)點(diǎn):1、熒光試劑和探針經(jīng)濟(jì)、安全；2、探針?lè)€(wěn)定，一次標(biāo)記后可在兩年內(nèi)使用；3、實(shí)驗(yàn)周期短、能迅速得到結(jié)果、特異性好、定位準(zhǔn)確；4

7、、fish可定位長(zhǎng)度在1kb的dna序列，其靈敏度與放射性探針相當(dāng)；5、多色fish通過(guò)在同一個(gè)核中顯示不同的顏色可同時(shí)檢測(cè)多種序列；6、既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化，也可以在懸液中顯示間期染色體dna的結(jié)構(gòu)。 v缺點(diǎn)：不能達(dá)到100%雜交，特別是在應(yīng)用較短的cdna探針時(shí)效率明顯下降。 應(yīng)用1 1、基因定位2、檢測(cè)染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常3、遺傳病的診斷和產(chǎn)前診斷fish fish 技術(shù)的發(fā)展技術(shù)的發(fā)展1 1、單色、單色fishfish 2 2、多色、多色fishfish（2424種染色）種染色） 3 3、dnadna纖維纖維fishfish 4 4、比較基因組雜交、比較基因組

8、雜交光譜核型分析技術(shù)vsky(spectral karyotying)光譜染色體自動(dòng)核型分析是一項(xiàng)顯微圖像處理技術(shù)，sky通過(guò)光譜干涉儀，由高品質(zhì)ccd獲取每一個(gè)像素的干涉圖像，形成一個(gè)三維的數(shù)據(jù)庫(kù)并得到每個(gè)像素的光程差與強(qiáng)度間的對(duì)應(yīng)曲線，該曲線經(jīng)傅立葉變換之后得到該像素的光譜，再經(jīng)由軟件分析之后用分類(lèi)色來(lái)顯示圖像或?qū)⒐庾V數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的紅綠藍(lán)信號(hào)后以常規(guī)方式顯示。v24種全染色體涂染探針先用5種不同的熒光素組合進(jìn)行不同的標(biāo)記，然后將探針混合物與中期染色體進(jìn)行原位雜交，通過(guò)熒光顯微鏡獲得熒光圖像進(jìn)行光譜成像。其結(jié)果分為顯色成像和分色成像兩部分。前者可于圖像獲取后即刻評(píng)估所有探針的雜交質(zhì)量，后者用特定的sky軟件參照每一條染色體特有的光譜信息特征進(jìn)行分析。特點(diǎn)vsky能發(fā)現(xiàn)經(jīng)典遺傳技術(shù)及單獨(dú)使用