專血脂及血漿脂蛋白檢驗新PPT課件

1、n教學目標和要求教學目標和要求1 1、掌握掌握脂蛋白的分類及其主要功能；高脂血癥的分型及血液脂蛋白的分類及其主要功能；高脂血癥的分型及血液生化特點；血脂、脂蛋白和載脂蛋白測定的原理和方法。生化特點；血脂、脂蛋白和載脂蛋白測定的原理和方法。2 2、熟悉熟悉各種脂蛋白的組成與結構要點；異常脂蛋白血癥的原各種脂蛋白的組成與結構要點；異常脂蛋白血癥的原因；血脂檢查前應注意的問題。因；血脂檢查前應注意的問題。3 3、了解了解載脂蛋白的種類與生理功能；各個檢驗項目的臨床意載脂蛋白的種類與生理功能；各個檢驗項目的臨床意義和應用。義和應用。第1頁/共60頁動脈粥樣硬化動脈粥樣硬化(atherosclerosi

2、s, AS) (atherosclerosis, AS) 冠心病急性事件冠心病急性事件（不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗死和冠脈猝死）（不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗死和冠脈猝死） n血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白檢驗的重要性血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白檢驗的重要性 第2頁/共60頁一、血脂及血漿脂蛋白一、血脂及血漿脂蛋白 血脂：是血漿中的中性脂肪（血脂：是血漿中的中性脂肪（甘油三酯和膽甘油三酯和膽固醇固醇）和類脂（磷脂、糖脂、固醇、類固醇）的）和類脂（磷脂、糖脂、固醇、類固醇）的總稱總稱 n定義：定義： 脂蛋白：脂類難溶于水，正常血漿脂類物質脂蛋白：脂類難溶于水，正常血漿脂類物質與蛋白質結合成脂蛋白的形式存

3、在。與蛋白質結合成脂蛋白的形式存在。 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述第3頁/共60頁（一）血漿脂蛋白的分類（一）血漿脂蛋白的分類超速離心法：超速離心法：根據(jù)脂蛋白在一定密度的介質中漂浮速率不根據(jù)脂蛋白在一定密度的介質中漂浮速率不同而進行分離的方法。同而進行分離的方法。 電泳法：電泳法：根據(jù)不同密度的脂蛋白所含蛋白質的表面電荷不同，根據(jù)不同密度的脂蛋白所含蛋白質的表面電荷不同，利用電泳將其分離，并與血漿蛋白質的遷移率比較以判斷其部位利用電泳將其分離，并與血漿蛋白質的遷移率比較以判斷其部位。 分離方法分離方法第4頁/共60頁u超速離心法：超速離心法：乳糜微粒乳糜微粒（chylomicron,CMchylo

4、micron,CM）極低密度脂蛋白極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDLvery low density lipoprotein,VLDL）中間密度脂蛋白（中間密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein,IDLintermediate density lipoprotein,IDL）低密度脂蛋白低密度脂蛋白（low density lipoproteinlow density lipoprotein，LDLLDL）高密度脂蛋白高密度脂蛋白（high density lipoproteinhigh density li

5、poprotein，HDLHDL脂蛋白（脂蛋白（a a）lipoprotein (a),Lp(a) lipoprotein (a),Lp(a) 乳糜微粒、前乳糜微粒、前- - 、 和和 四條脂蛋白區(qū)帶四條脂蛋白區(qū)帶 u電泳法電泳法 第5頁/共60頁第6頁/共60頁（二）血漿脂蛋白的組成與結構（二）血漿脂蛋白的組成與結構u組成：組成： 蛋白質、甘油三酯、磷脂（蛋白質、甘油三酯、磷脂（phospholipidphospholipid，PLPL）、游離膽固醇（）、游離膽固醇（free free cholesterol cholesterol ，F(xiàn)CFC）及膽固醇酯（）及膽固醇酯（cholestero

6、l estercholesterol ester，CECE）等成分組成。）等成分組成。第7頁/共60頁u結構：結構： 大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的內核和親水性的大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的內核和親水性的外殼（圖外殼（圖10-1）。內核由不同量的）。內核由不同量的CE與與TG組成，表層由載脂蛋白、組成，表層由載脂蛋白、PL及及FC組成，組成，F(xiàn)C及及PL的極性基團向外露在血漿中，載脂蛋白是兼性的極性基團向外露在血漿中，載脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面。粒的表面

7、。 第8頁/共60頁（三）載脂蛋白（三）載脂蛋白脂蛋白的蛋白部分稱為載脂蛋白脂蛋白的蛋白部分稱為載脂蛋白(apolipoprotein(apolipoprotein，Apo) Apo) u定義：定義：u種類：種類： 按按19721972年年AlaupovicAlaupovic建議的命名方法，用英文字母建議的命名方法，用英文字母順序編碼，分為順序編碼，分為ApoAApoA、B B、C C、D D、E E、F F、G G、H H、J J等。由等。由于氨基酸組成的差異，每一型又可分若干亞型。于氨基酸組成的差異，每一型又可分若干亞型。 第9頁/共60頁u功能：功能： 與脂質的親和作用而使脂質溶于水性介

8、質中。與脂質的親和作用而使脂質溶于水性介質中。運轉膽固醇和甘油三酯。運轉膽固醇和甘油三酯。作為脂蛋白外殼的結構成分，與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。作為脂蛋白外殼的結構成分，與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。以配體的形式作為脂蛋白與特異受體的連接物。以配體的形式作為脂蛋白與特異受體的連接物。激活某些與血漿脂蛋白代謝有關的酶類激活某些與血漿脂蛋白代謝有關的酶類 u分布及特點：自學了解分布及特點：自學了解 第10頁/共60頁（四）脂蛋白受體（四）脂蛋白受體u定義：定義： 脂蛋白受體是一類位于細胞膜上的糖蛋白。它能以高脂蛋白受體是一類位于細胞膜上的糖蛋白。它能以高度的親和方式與相應的脂蛋白配體作用，從而介導細胞對

9、度的親和方式與相應的脂蛋白配體作用，從而介導細胞對脂蛋白的攝取與代謝，進一步調節(jié)細胞外脂蛋白的水平。脂蛋白的攝取與代謝，進一步調節(jié)細胞外脂蛋白的水平。 第11頁/共60頁u脂蛋白與脂蛋白受體的作用：脂蛋白與脂蛋白受體的作用： 不僅是運送脂蛋白至細胞所必需，也是從血和外周組織中有不僅是運送脂蛋白至細胞所必需，也是從血和外周組織中有效清除具有潛在致動脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。效清除具有潛在致動脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。 u種類：種類： 已有很多種，主要有已有很多種，主要有LDLLDL受體、殘粒受體（受體、殘粒受體（remnant receptorremnant receptor）及）及清道夫受

10、體清道夫受體（scavenger receptorscavenger receptor）。）。第12頁/共60頁LDLLDL受體：受體： 不僅能識別不僅能識別ApoB100ApoB100，也可識別，也可識別ApoEApoE，在細胞結合、攝取和，在細胞結合、攝取和降解降解LDLLDL及其它含及其它含ApoB100ApoB100的脂蛋白過程中起中介作用，對維持的脂蛋白過程中起中介作用，對維持細胞和全身膽固醇平衡起重要作用。細胞和全身膽固醇平衡起重要作用。 u各種脂蛋白受體功能各種脂蛋白受體功能殘粒受體：殘粒受體： 能識別能識別ApoEApoE，是清除血液循環(huán)中，是清除血液循環(huán)中CMCM殘粒和殘粒和

11、-VLDL-VLDL殘粒的主殘粒的主要受體，它也能結合含要受體，它也能結合含ApoEApoE的的HDLHDL。 清道夫受體：清道夫受體： 主要存在于巨噬細胞表面主要存在于巨噬細胞表面, ,介導修飾介導修飾LDL(LDL(包括氧化包括氧化LDLLDL和和 - -VLDL)VLDL)從血液循環(huán)中清除。從血液循環(huán)中清除。 第13頁/共60頁（五）脂質轉運蛋白（五）脂質轉運蛋白u定義：定義： 血漿中脂蛋白部分含有一種特殊的轉運蛋白，能促進血漿各脂蛋白血漿中脂蛋白部分含有一種特殊的轉運蛋白，能促進血漿各脂蛋白間膽固醇酯、甘油三酯和磷脂的單向或雙向轉運和交換，這類特殊轉運間膽固醇酯、甘油三酯和磷脂的單向或

12、雙向轉運和交換，這類特殊轉運蛋白稱脂質轉運蛋白（蛋白稱脂質轉運蛋白（lipid transfer protein,LTPlipid transfer protein,LTP）。）。 u組成：組成：膽固醇酯轉運蛋白（膽固醇酯轉運蛋白（cholesterol ester transfer protein,CETPcholesterol ester transfer protein,CETP）磷脂轉運蛋白（磷脂轉運蛋白（phospholipid transfer protein,PTPphospholipid transfer protein,PTP）甘油三酯轉運蛋白（甘油三酯轉運蛋白（trigly

13、ceride transfer protein,TTPtriglyceride transfer protein,TTP）第14頁/共60頁( (六六) )血漿脂蛋白代謝血漿脂蛋白代謝u分類：分類：1. 外源性代謝途徑：外源性代謝途徑：指食物中攝入的膽固醇和甘油三酯在指食物中攝入的膽固醇和甘油三酯在小腸中合成小腸中合成CMCM及及CMCM代謝的過程代謝的過程 。2. 內源性代謝途徑：內源性代謝途徑：指指肝臟合成肝臟合成VLDLVLDL，然后轉變?yōu)椋缓筠D變?yōu)镮DLIDL和和LDLLDL，并被肝臟或其它器官代謝的過程，并被肝臟或其它器官代謝的過程 3. 膽固醇的逆向轉運：膽固醇的逆向轉運：HDL

14、HDL參與將膽固醇從外周組織運輸?shù)礁闻K的過程。參與將膽固醇從外周組織運輸?shù)礁闻K的過程。 第15頁/共60頁第16頁/共60頁第17頁/共60頁第18頁/共60頁二、脂蛋白代謝紊亂及其與動脈粥樣硬化的關系二、脂蛋白代謝紊亂及其與動脈粥樣硬化的關系（一）高脂蛋白血癥（一）高脂蛋白血癥u定義：定義： 高脂血癥（高脂血癥（hyperlipidemiahyperlipidemia）是指血漿中膽固醇或）是指血漿中膽固醇或/ / 和甘油三和甘油三酯水平升高。血漿脂類以血漿脂蛋白形式存在，因此，高脂血癥一酯水平升高。血漿脂類以血漿脂蛋白形式存在，因此，高脂血癥一定是高脂蛋白血癥（定是高脂蛋白血癥（hyperl

15、ipoproteinemiahyperlipoproteinemia）。）。 近年來，已逐漸認識到血漿中近年來，已逐漸認識到血漿中HDLHDL降低也是一種脂代謝紊亂。降低也是一種脂代謝紊亂。 第19頁/共60頁第20頁/共60頁第21頁/共60頁u分類：分類： 1 1按臨床表型分類按臨床表型分類 主要是基于各種血漿脂蛋白升高的程度不同而進行分型。主要是基于各種血漿脂蛋白升高的程度不同而進行分型。該分類法不包括病因學，故稱表型分類。該分類法不包括病因學，故稱表型分類。 （1 1）型高脂蛋白血癥：又稱家族性高乳糜微粒血癥型高脂蛋白血癥：又稱家族性高乳糜微粒血癥 （2 2）aa型高脂白血癥型高脂白血

16、癥 （3 3）bb型高脂蛋白血癥：型高脂蛋白血癥： （4 4）型高脂蛋白血癥型高脂蛋白血癥 （5 5）型高脂蛋白血癥型高脂蛋白血癥 （6 6）型高脂蛋白血癥型高脂蛋白血癥 第22頁/共60頁第23頁/共60頁2 2按是否繼發(fā)于全身性疾病分類按是否繼發(fā)于全身性疾病分類 繼發(fā)性高脂血癥：繼發(fā)性高脂血癥： 原發(fā)性：原發(fā)性： 繼發(fā)性者由一些全身性疾病引起血脂異常，如繼發(fā)性者由一些全身性疾病引起血脂異常，如糖尿病、甲狀腺功能糖尿病、甲狀腺功能減退癥、腎病綜合征、腎功能衰竭、減退癥、腎病綜合征、腎功能衰竭、肝膽疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肥胖肝膽疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肥胖癥、飲酒等。此外，癥、飲酒等。此外，某些

17、藥物某些藥物如如-受體阻斷劑、降壓藥等也可引起血受體阻斷劑、降壓藥等也可引起血脂異常。脂異常。 在排除繼發(fā)性高脂血癥后，可診斷為原發(fā)性。已知部分原發(fā)性高在排除繼發(fā)性高脂血癥后，可診斷為原發(fā)性。已知部分原發(fā)性高脂血癥由先天性基因缺陷所致脂血癥由先天性基因缺陷所致 第24頁/共60頁3 3高脂血癥的基因分型法高脂血癥的基因分型法 表表10-5 10-5 家族性高脂血癥的臨床特征家族性高脂血癥的臨床特征常常 用用 名名基因缺陷基因缺陷臨床特征臨床特征表型分類表型分類家族性高膽固醇血癥家族性高膽固醇血癥L LDLL LDL受體缺陷受體缺陷以膽固醇升高為主，可伴輕度甘油三酯升以膽固醇升高為主，可伴輕度甘

18、油三酯升高，高，LDLLDL明顯增加，可有肌腱黃色瘤，多有明顯增加，可有肌腱黃色瘤，多有冠心病和高脂血癥家族史。冠心病和高脂血癥家族史。aabb家族性家族性Apo BApo B100100缺陷癥缺陷癥 ApoB ApoB100100缺陷缺陷同上同上同上同上家族性混合型高脂血癥家族性混合型高脂血癥不清楚不清楚膽固醇和甘油三酯均升高，膽固醇和甘油三酯均升高，VLDLVLDL和和LDLLDL都都增加，無黃色瘤，家族成員中有不同型高增加，無黃色瘤，家族成員中有不同型高脂蛋白血癥，有冠心病家族史。脂蛋白血癥，有冠心病家族史。bb家族性異常家族性異常脂蛋白血脂蛋白血癥癥ApoEApoE異常異常膽固醇和甘油

19、三酯均升高，乳糜微粒和膽固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDLVLDL殘粒以及殘粒以及IDLIDL明顯增加，可有掌皺黃明顯增加，可有掌皺黃色瘤，多為色瘤，多為Apo E2Apo E2（2/22/2）表型。）表型。家族性高甘油三酯血癥家族性高甘油三酯血癥不清楚不清楚以甘油三酯升高為主，可有輕度膽固醇升以甘油三酯升高為主，可有輕度膽固醇升高，高，VLDLVLDL明顯增加。明顯增加。第25頁/共60頁 (二二)低脂蛋白血癥（自學）低脂蛋白血癥（自學）1 1家族性低家族性低-脂蛋白血癥脂蛋白血癥, ,常染色體顯性遺傳體常染色體顯性遺傳體2 2-脂蛋白缺乏血癥脂蛋白缺乏血癥, ,常染色體隱性遺傳體常染

20、色體隱性遺傳體3 3家族性低家族性低-脂蛋白血癥脂蛋白血癥, ,常染色體顯性遺傳體常染色體顯性遺傳體4 4TangierTangier病病, ,常染色體隱性遺傳體常染色體隱性遺傳體(三三)脂蛋白代謝紊亂與動脈粥樣硬化（自學）脂蛋白代謝紊亂與動脈粥樣硬化（自學）1.1.致致ASAS的脂蛋白譜：脂質三聯(lián)征的脂蛋白譜：脂質三聯(lián)征2.2.代謝綜合癥：致病四重奏代謝綜合癥：致病四重奏3.HDL-C3.HDL-C負相關負相關第26頁/共60頁第二節(jié)第二節(jié) 血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定 目前臨床上開展的血脂測定項目包括目前臨床上開展的血脂測定項目包括TCTC、TGTG、HDLHDL及

21、其及其亞類膽固醇、亞類膽固醇、LDL-CLDL-C、LpLp（a a）以及部分載脂蛋白如）以及部分載脂蛋白如ApoAIApoAI、ApoBApoB等。其中等。其中TCTC、TGTG、HDL-CHDL-C、LDL-CLDL-C測定是血脂測定的四個測定是血脂測定的四個基本指標。血漿基本指標。血漿44冰箱中過夜觀察其分層現(xiàn)象及清澈度可冰箱中過夜觀察其分層現(xiàn)象及清澈度可初步估計各種脂蛋白的變化狀況。血漿脂蛋白電泳結合初步估計各種脂蛋白的變化狀況。血漿脂蛋白電泳結合TCTC、TGTG水平有助于高脂血癥分型。水平有助于高脂血癥分型。n概況：概況：第27頁/共60頁一、血脂標本的采集與檢驗質量控制一、血脂標

22、本的采集與檢驗質量控制血脂分析前變異來源于：血脂分析前變異來源于：生物因素，如年齡、性別、種族等因素的個體差異。生物因素，如年齡、性別、種族等因素的個體差異。生活方式，包括飲食習慣、吸煙、運動及應激等。生活方式，包括飲食習慣、吸煙、運動及應激等。臨床方面包括疾病或藥物引起的脂代謝改變。臨床方面包括疾病或藥物引起的脂代謝改變。血標本采集與處理方面血標本采集與處理方面 準確測定應從分析前的準備開始，包括受試者的準備，標本準確測定應從分析前的準備開始，包括受試者的準備，標本采集，合格的試劑、校準物的選用，檢測方法選擇。采集，合格的試劑、校準物的選用，檢測方法選擇。 方法學上應該采用美國疾病控制中心（

23、方法學上應該采用美國疾病控制中心（CDCCDC）或中華醫(yī)學會）或中華醫(yī)學會檢驗分會推薦的操作方法。檢驗分會推薦的操作方法。 第28頁/共60頁二、血清（漿）靜置試驗二、血清（漿）靜置試驗 將患者空腹將患者空腹12h12h后采集靜脈血分離出血清置后采集靜脈血分離出血清置44冰箱中冰箱中過夜，然后觀察其分層現(xiàn)象及清澈度。過夜，然后觀察其分層現(xiàn)象及清澈度。 空腹血清混濁，表示空腹血清混濁，表示TGTG升高升高，可放在，可放在44冰箱過夜后進一步觀察，如果冰箱過夜后進一步觀察，如果上層出現(xiàn)奶油樣且下層清澈，表明上層出現(xiàn)奶油樣且下層清澈，表明CMCM升高，升高，VLDLVLDL正常，可能為正常，可能為I

24、 I型高脂血型高脂血癥。如果上層出現(xiàn)奶油樣且下層混濁，表明癥。如果上層出現(xiàn)奶油樣且下層混濁，表明CMCM及及VLDLVLDL均升高，可能是均升高，可能是V V型。型?？崭寡寤鞚?，空腹血清混濁，44冰箱中過夜后仍為均勻混濁，表明冰箱中過夜后仍為均勻混濁，表明VLDLVLDL升高，此時應升高，此時應進一步測定進一步測定TCTC， TCTC升高者可能是升高者可能是IIIIII或或IIbIIb型而型而TCTC正常者則可能為正常者則可能為型。型。IIaIIa型高脂血癥血清也清澈透明，型高脂血癥血清也清澈透明，TCTC升高升高 。 正?？崭寡鍛宄和该鳌Ｕ？崭寡鍛宄和该?。第29頁/共60頁 三、

25、血清（漿）總膽固醇測定三、血清（漿）總膽固醇測定化學法化學法酶法酶法第30頁/共60頁（一）化學測定法（一）化學測定法 化學測定法通常需化學測定法通常需抽提純化抽提純化。顯色劑主要有兩類：。顯色劑主要有兩類：醋酸醋酸- -醋酐醋酐- -硫酸硫酸高鐵硫酸。高鐵硫酸。 這些顯色反應須用強酸試劑，干擾因素多，準確這些顯色反應須用強酸試劑，干擾因素多，準確測定有賴于從標本中抽提、皂化、純化過程，因而操測定有賴于從標本中抽提、皂化、純化過程，因而操作較繁，不適于分析大批量標本，且不適于自動分析。作較繁，不適于分析大批量標本，且不適于自動分析。 n特點：特點：第31頁/共60頁 1 1Liberman-B

26、urchardLiberman-Burchard反應反應 18851885年年LibermanLiberman發(fā)現(xiàn)膽固醇在硫酸、醋酐溶液中顯色，發(fā)現(xiàn)膽固醇在硫酸、醋酐溶液中顯色，18901890年年BurchardBurchard用此反應測定膽固醇稱為用此反應測定膽固醇稱為L-BL-B反應。反應。 1953 1953年年ZakZak提出用硫酸、醋酸和提出用硫酸、醋酸和FeFe3+3+等與膽固醇作用生等與膽固醇作用生成紫紅色化合物來測定膽固醇，稱為成紫紅色化合物來測定膽固醇，稱為ZakZak反應。反應。 2 2ZakZak反應反應第32頁/共60頁( (二二) )酶測定法酶測定法n特點：特點：

27、常規(guī)測定中現(xiàn)已廣泛應用酶法，酶法具有特異性好，精密常規(guī)測定中現(xiàn)已廣泛應用酶法，酶法具有特異性好，精密度和靈敏度都能很好地滿足臨床實驗室的要求，既可以手工操度和靈敏度都能很好地滿足臨床實驗室的要求，既可以手工操作，也適合自動分析，但酶法測定中出現(xiàn)了不同程度的作，也適合自動分析，但酶法測定中出現(xiàn)了不同程度的基質效基質效應。應。 采用酶反應原理的干化學法頗為實用，其缺點是價格高，采用酶反應原理的干化學法頗為實用，其缺點是價格高，精密度差。膽固醇的酶測定法始于精密度差。膽固醇的酶測定法始于7070年代。由于操作簡便，試年代。由于操作簡便，試劑無腐蝕性，特別適用于自動生化分析，劑無腐蝕性，特別適用于自動

28、生化分析，目前已成為測定膽固目前已成為測定膽固醇的主要方法。醇的主要方法。 第33頁/共60頁CEH-COD-PAPCEH-COD-PAP法法 n原理：原理： CECEH H2 2O FCO FCFFAFFA FC FCO O2 2 4-4-膽甾烯酮膽甾烯酮H H2 2O O2 2 H H2 2O O2 24-AAP4-AAP酚酚 醌亞胺醌亞胺H H2 2O O CEH COD POD 膽固醇酶測定法的試劑中，除了上述三種酶、酚和膽固醇酶測定法的試劑中，除了上述三種酶、酚和4-4-氨基安替比氨基安替比林外，還有維持林外，還有維持pHpH恒定的緩沖液、膽酸鈉、表面活性劑以及穩(wěn)定劑等。恒定的緩沖液

29、、膽酸鈉、表面活性劑以及穩(wěn)定劑等。膽酸鈉是為了提高膽固醇酯酶的活性，表面活性劑的作用是促進膽固膽酸鈉是為了提高膽固醇酯酶的活性，表面活性劑的作用是促進膽固醇從脂蛋白中釋放出來醇從脂蛋白中釋放出來 第34頁/共60頁n評價：評價：主要缺點是：主要缺點是：優(yōu)點優(yōu)點：本法靈敏度高、準確度高、精密度好，線性范圍寬。：本法靈敏度高、準確度高、精密度好，線性范圍寬。某些膽固醇酯酶對膽固醇酯的水解不完全，不能用純膽固醇結晶以有機某些膽固醇酯酶對膽固醇酯的水解不完全，不能用純膽固醇結晶以有機溶劑配制的溶液作為溶劑配制的溶液作為TCTC分析的校準液，而應以準確定值的血清作為標準，分析的校準液，而應以準確定值的血

30、清作為標準，此校準液（品）相當于三級標準。此校準液（品）相當于三級標準。 表面活性劑，如吐溫表面活性劑，如吐溫-40-40可以干擾膽固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇可以干擾膽固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇60006000可使結果提高可使結果提高1 12 2； 本法具有氧化酶反應途徑的共同缺陷，易受到一些還原性物質如尿酸、本法具有氧化酶反應途徑的共同缺陷，易受到一些還原性物質如尿酸、膽紅素、維生素膽紅素、維生素C C和谷胱甘肽等的干擾。和谷胱甘肽等的干擾。 第35頁/共60頁【參考值參考值】 血清總膽固醇合適范圍：血清總膽固醇合適范圍：5.20mmol/L (200mg/dl)5.20mmol/L (20

31、0mg/dl)，邊緣升高：邊緣升高：5.235.235.69mmol/L(2015.69mmol/L(201219mg/dl)219mg/dl)，升高：升高：5.72mmol/L (220mg/dl)5.72mmol/L (220mg/dl)。第36頁/共60頁u影響影響TC水平的因素水平的因素 年齡與性別；年齡與性別；長期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使長期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使TCTC增高；增高；遺傳因素；遺傳因素； 其它：如缺少運動、腦力勞動、精神緊張等可能使其它：如缺少運動、腦力勞動、精神緊張等可能使TCTC升高。升高。 TC TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指

32、標之外，不能作為其它任何疾病的診除了作為高膽固醇血癥的診斷指標之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標，對于動脈粥樣硬化和冠心病而言，斷指標，對于動脈粥樣硬化和冠心病而言，TCTC是一個明確的危險因子，與冠是一個明確的危險因子，與冠心病的發(fā)病率呈正相關。心病的發(fā)病率呈正相關?！九R床意義臨床意義】u高高TCTC血癥：血癥：原發(fā)和繼發(fā) u低低TCTC血癥：血癥：原發(fā)和繼發(fā) 第37頁/共60頁三、血清（漿）甘油三酯測定三、血清（漿）甘油三酯測定化學法化學法酶法酶法第38頁/共60頁n基本操作：基本操作：（一）化學測定法（一）化學測定法1 1、抽提抽提：關鍵是選用合適的抽提劑，既要使甘油三酯提取完全，又要

33、消除磷關鍵是選用合適的抽提劑，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游離甘油和葡萄糖等干擾物質的影響。脂、游離甘油和葡萄糖等干擾物質的影響。 2 2、皂化皂化：甘油三酯水解生成甘油，這一步大都采用甘油三酯水解生成甘油，這一步大都采用KOHKOH作皂化劑作皂化劑 3 3、氧化氧化：過碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸過碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸 4 4、顯色顯色：甲醛的定量主要有兩種方法：甲醛的定量主要有兩種方法：甲醛與變色酸(4，5-二羥-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物 甲醛與乙酰丙酮在銨離子(NH4+)存在下生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶 第39頁/共60頁

34、( (二二) )酶測定法酶測定法1 1、磷酸甘油氧化酶法（、磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAPGPO-PAP法）法）n 原理 TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP G-3-P + O2 GPO 磷酸二羥丙酮 + H2O2 2 H2O2 + Phenol + 4-Aminoantipyrine POD Chromogen + 4H2On 計算 TG（mmol/L）=A500nm測定/A500nm校準 校準血清TG濃度（mmol/L）第40頁/共60頁n去除去除FGFG干擾可用下列方法：干擾可用下列方法：

35、1 1、外空白法：同時用不含、外空白法：同時用不含LPLLPL的酶試劑測定的酶試劑測定游離游離甘油（甘油（FGFG）作空白。作空白。2 2、內空白法：又稱兩步法或雙試劑法、內空白法：又稱兩步法或雙試劑法將將LPLLPL和和4-AAP4-AAP組成試劑組成試劑2 2，其余部分為試劑，其余部分為試劑1 1。此法目。此法目前為中華醫(yī)學會檢驗分會推薦方法。前為中華醫(yī)學會檢驗分會推薦方法。第41頁/共60頁 2 2乳酸脫氫酶法乳酸脫氫酶法 n 原理： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸烯醇

36、式丙酮酸 丙酮酸激酶 丙酮酸 + ATP 丙酮酸+NADH LDH NAD+ + 乳酸 由于反應消耗由于反應消耗NADHNADH，故可利用，故可利用NADHNADH在在340nm340nm吸光度降低來吸光度降低來測定甘油三脂的濃度測定甘油三脂的濃度。第42頁/共60頁n評價： 本法結果準確，但靈敏度較低，試劑本法結果準確，但靈敏度較低，試劑也不太穩(wěn)定。由于血清本身存在游離甘油也不太穩(wěn)定。由于血清本身存在游離甘油和丙酮酸等干擾物質，所以測定時除了要和丙酮酸等干擾物質，所以測定時除了要做試劑空白外，還要做標本空白做試劑空白外，還要做標本空白 第43頁/共60頁3 3甘油氧化酶法甘油氧化酶法 第一步

37、：第一步： FG + OFG + O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2 H H2 2O O2 2 + EMAE + EMAE PODPOD 無色物質無色物質消除游離甘油的影響，消除游離甘油的影響，3-5min3-5min后進行第二步反應：后進行第二步反應：TG + 3HTG + 3H2 2O O LPLLPL Glycerol Glycerol + 3RCOOH+ 3RCOOHFG FG + O+ O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ + H H2 2O O2 2H H2 2O O2 2 +4-AAP+ EMAE +4-AAP+ EMAE POD

38、POD 有色化合物有色化合物注：注：EMAEEMAE作用與酚相似，是還原劑，但靈敏度比酚高。作用與酚相似，是還原劑，但靈敏度比酚高。n原理原理：該法分兩步完成。該法分兩步完成。第44頁/共60頁 血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高，體重超過標準者往血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高，體重超過標準者往往偏高。往偏高。 合適范圍：合適范圍：1.70mmol/L(150mg/dl)1.70mmol/L(150mg/dl)， 升高：升高：1.70mmol/L (150mg/dl)1.70mmol/L (150mg/dl)。 【參考值參考值】第45頁/共60頁【臨床意義臨床意義】 原發(fā)性高原發(fā)性高TGTG血

39、癥多有遺傳因素，包括家族性高血癥多有遺傳因素，包括家族性高TGTG血癥血癥與家族性型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性高與家族性型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性高TGTG血癥見于糖血癥見于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺機能減退、腎病綜合征、妊娠、尿病、糖原累積病、甲狀腺機能減退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。大量前瞻性的研究證實，富含口服避孕藥、酗酒等。大量前瞻性的研究證實，富含TGTG的的脂蛋白是脂蛋白是CHDCHD的獨立的危險因子，的獨立的危險因子，TGTG增加表明患者存在代增加表明患者存在代謝綜合癥，需進行治療。甘油三酯降低比較少見，甲狀腺謝綜合癥，需進行治療。甘油三酯降低比較少見，甲狀腺功能亢

40、進、腎上腺皮質功能減退和肝功能嚴重損傷時可以功能亢進、腎上腺皮質功能減退和肝功能嚴重損傷時可以見到甘油三酯降低見到甘油三酯降低 第46頁/共60頁五、血清（漿）脂蛋白測定五、血清（漿）脂蛋白測定( (一一) )血清脂蛋白電泳血清脂蛋白電泳 脂蛋白電泳分析可分為預染法和電泳后染色法兩大類。脂蛋白電泳分析可分為預染法和電泳后染色法兩大類。 預染法預染法的操作比較簡單，分離效果直觀。其操作過程是先的操作比較簡單，分離效果直觀。其操作過程是先將待測血清和蘇丹黑染料按一定比例（將待測血清和蘇丹黑染料按一定比例（9:19:1）混合進行預染處理，）混合進行預染處理，離心后取上清液進行電泳分析。離心后取上清液

41、進行電泳分析。 電泳后染色法電泳后染色法為用電泳方法先將血漿脂蛋白各成份分開，為用電泳方法先將血漿脂蛋白各成份分開，再用蘇丹黑或油紅再用蘇丹黑或油紅O O進行染色。進行染色。臨床上比較常用的是預染法電泳。臨床上比較常用的是預染法電泳。 第47頁/共60頁血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳：血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳：-脂蛋白：脂蛋白：0.30-0.400.30-0.40，前前-脂蛋白：脂蛋白：0.13-0.250.13-0.25，-脂蛋白：脂蛋白：0.50-0.600.50-0.60，乳糜微粒：陰性。乳糜微粒：陰性。【參考值參考值】第48頁/共60頁（二）高密度脂蛋白測定（二）高密度脂蛋白測定 常以測定常

42、以測定HDL-CHDL-C含量代表含量代表HDLHDL水平。水平。 n參考方法參考方法: : 超速離心分離超速離心分離HDLHDL，然后用化學法（，然后用化學法（ALKBALKB法）或法）或酶法測定其膽固醇含量，此法需特殊設備，而且不易酶法測定其膽固醇含量，此法需特殊設備，而且不易常握。常握。 第49頁/共60頁n常規(guī)方法常規(guī)方法: : 1磷鎢酸-鎂法 2HDL直接測定法 HDLHDL直接測定法大致分三類直接測定法大致分三類，分別是，分別是: :聚乙二醇聚乙二醇/ /抗體包裹法抗體包裹法酶修飾法酶修飾法選擇性抑制法，又稱掩蔽法，選擇性抑制法，又稱掩蔽法， 第50頁/共60頁HDL-C合適范圍：

43、1.04mmol/L (40mg/dl), 0.91mmol/L (35mg/dl)為減低?！緟⒖贾祬⒖贾怠俊九R床意義臨床意義】 流行病學與臨床研究證明，流行病學與臨床研究證明，HDL-CHDL-C與冠心病發(fā)病呈負相關，與冠心病發(fā)病呈負相關，HDL-CHDL-C低于低于0.9 mmol/L 0.9 mmol/L 是冠心病危險因素。是冠心病危險因素。HDL-CHDL-C大于大于1.55mmol/L1.55mmol/L被認為是冠心病的被認為是冠心病的“負負”危險因素。危險因素。 HDL-CHDL-C下降還下降還多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高

44、TGTG血癥往往血癥往往伴以低伴以低HDL-CHDL-C，肥胖者的，肥胖者的HDL-CHDL-C也多偏低。吸煙可使也多偏低。吸煙可使HDL-CHDL-C下降，下降，適量飲酒、長期體力勞動和運動會使適量飲酒、長期體力勞動和運動會使HDL-CHDL-C升高。升高。第51頁/共60頁（三）低密度脂蛋白膽固醇測定（三）低密度脂蛋白膽固醇測定1 1FriedewaldFriedewald公式法公式法 LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/5TG/5（以（以mg/dlmg/dl為單位時），或為單位時），或LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/2.2TG/2.2（以（以mmo

45、l/Lmmol/L為單為單位時）。位時）。 2 2聚乙烯硫酸鹽沉淀法聚乙烯硫酸鹽沉淀法 本法并非對本法并非對LDL-CLDL-C作直接測定，而作直接測定，而是用聚乙烯硫酸（是用聚乙烯硫酸（PVSPVS）選擇性沉淀血清中）選擇性沉淀血清中LDLLDL，再以血清，再以血清TCTC減去上清液（含減去上清液（含HDLHDL與與VLDLVLDL）膽固醇即得）膽固醇即得LDL-CLDL-C值。值。 3 3直接測定法直接測定法: :兩類兩類目前各類方法測定的目前各類方法測定的LDL-CLDL-C值都包括值都包括IDLIDL和和LP(a)LP(a)的的cholchol在內在內 第52頁/共60頁 LDL-C

46、LDL-C合適范圍：合適范圍：3.12mmol/L (120mg/dl)3.12mmol/L (120mg/dl)， 邊緣升高：邊緣升高：3.153.153.61mmol/L(1213.61mmol/L(121139mg/dl)139mg/dl) 升高：升高：3.64mmol/L (140mg/dl)3.64mmol/L (140mg/dl)。 【參考值參考值】【臨床意義臨床意義】 LDL-C LDL-C增高是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因增高是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因素。由于素。由于TCTC水平同時也受水平同時也受HDL-CHDL-C水平的影響，所以最好以水平的影響，所以最

47、好以LDL-CLDL-C代替代替TCTC作為冠心病危險因素指標。美國國家膽固醇教作為冠心病危險因素指標。美國國家膽固醇教育計劃成人治療專業(yè)組規(guī)定以育計劃成人治療專業(yè)組規(guī)定以LDL-CLDL-C水平作高脂蛋白血癥的水平作高脂蛋白血癥的治療決策及其需要達到的治療目標。治療決策及其需要達到的治療目標。 第53頁/共60頁（四）脂蛋白（四）脂蛋白(a)(a)測定測定 nLp(a)Lp(a)測定有兩類方法測定有兩類方法 一是以免疫化學原理測定其所含一是以免疫化學原理測定其所含Apo(a)Apo(a)，結果以，結果以Lp(a)Lp(a)質量質量表示，也有以表示，也有以Lp(a)Lp(a)顆粒數(shù)顆粒數(shù)mmol/Lmmol/L表示的。表