微生物的分離與培養(yǎng)技術(shù)原理及其應(yīng)用PPT課件

1、120162016屆高三生物二輪復(fù)習(xí)屆高三生物二輪復(fù)習(xí) 2 一、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成與類型劃分一、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成與類型劃分 營養(yǎng)構(gòu)成營養(yǎng)構(gòu)成劃分依據(jù)劃分依據(jù)培養(yǎng)基培養(yǎng)基 種類種類制備方法制備方法用途用途物理物理性質(zhì)性質(zhì)加凝固劑如：加凝固劑如： 半固體半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基觀察微生物運(yùn)觀察微生物運(yùn)動(dòng)動(dòng)液體液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基不加凝固劑不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)化學(xué)成分成分天然天然培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分不明確的成分不明確的天然物質(zhì)天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)成分明確已知成分明確已知分離、純化、分離、純化、鑒定、計(jì)數(shù)鑒定、計(jì)數(shù)用途用途功能功能加入某種化學(xué)加入某種化學(xué)物質(zhì)物質(zhì)加入某種指示加入某種指示試劑試劑水、無機(jī)水

2、、無機(jī)鹽、碳源鹽、碳源和氮源和氮源還要滿足還要滿足特特殊營養(yǎng)物質(zhì)殊營養(yǎng)物質(zhì)（生長因（生長因子）、氧氣子）、氧氣以及以及溫度、溫度、ph要求。要求。固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基瓊脂瓊脂分離、純化、分離、純化、鑒定、計(jì)數(shù)鑒定、計(jì)數(shù)合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基分離篩選特定分離篩選特定微生物微生物鑒別不同微生鑒別不同微生物物3需分離需分離微生物微生物選擇培選擇培養(yǎng)基養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)鑒別培養(yǎng)基基 鑒定原理鑒定原理尿素尿素分解菌分解菌纖維素纖維素分解菌分解菌大腸大腸桿菌桿菌一般一般培養(yǎng)培養(yǎng)基基伊紅美伊紅美藍(lán)培養(yǎng)藍(lán)培養(yǎng)基基 大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色,，帶有金屬光澤帶有金屬

3、光澤 尿素作尿素作為唯一為唯一氮源氮源酚紅指酚紅指示劑示劑細(xì)菌合成的細(xì)菌合成的脲酶脲酶將將尿素尿素分分解生成解生成氨氨。使培養(yǎng)基的。使培養(yǎng)基的堿堿性增強(qiáng)，性增強(qiáng)，ph升高，升高，指示劑指示劑變紅變紅纖維素纖維素作為唯作為唯一一碳源碳源剛果紅剛果紅染色法染色法4四種纖維素分解菌四種纖維素分解菌在剛果紅培養(yǎng)基上在剛果紅培養(yǎng)基上形成的透明圈形成的透明圈大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的黑色帶金脂培養(yǎng)基上的黑色帶金屬光澤的菌落屬光澤的菌落 5二、二、 操作技術(shù)操作技術(shù)微生物分離培養(yǎng)成功微生物分離培養(yǎng)成功關(guān)鍵（消毒與滅菌）關(guān)鍵（消毒與滅菌）1、實(shí)驗(yàn)操作者雙手：、實(shí)驗(yàn)操作者雙手： 2、接

4、種環(huán)、接種針或試管口、瓶口：、接種環(huán)、接種針或試管口、瓶口： 3、錐形瓶、培養(yǎng)皿：、錐形瓶、培養(yǎng)皿： 4、培養(yǎng)基：、培養(yǎng)基： ( (不能采用干熱滅菌不能采用干熱滅菌) ) 無菌無菌 70% 70%酒精消毒酒精消毒 灼燒滅菌灼燒滅菌 干熱滅菌和高壓蒸干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）汽滅菌（濕熱滅菌）高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌6【例題【例題1 1】為了獲得為了獲得-胡蘿卜素胡蘿卜素產(chǎn)品產(chǎn)品,某小組開某小組開展了產(chǎn)展了產(chǎn)-胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請回答下列問題：請回答下列問題：（1）實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是）實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是 ；

5、為了防止冷凝水滲入；為了防止冷凝水滲入及減少滅菌后器皿或培養(yǎng)基被污染，滅菌前應(yīng)及減少滅菌后器皿或培養(yǎng)基被污染，滅菌前應(yīng)該該 。(2)為了篩選出酵母菌為了篩選出酵母菌,培養(yǎng)基中添加了青霉素培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是，其目的是 。 干熱滅菌和高壓蒸干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）汽滅菌（濕熱滅菌）牛皮紙或幾層報(bào)紙包扎緊牛皮紙或幾層報(bào)紙包扎緊 抑制細(xì)菌生長抑制細(xì)菌生長7高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋壓力表壓力表 安全閥安全閥放氣閥放氣閥滅菌桶滅菌桶 排氣軟管排氣軟管8【例題【例題1 1】為了獲得為了獲得-胡蘿卜素胡蘿卜素產(chǎn)品產(chǎn)品,某小組開某小組開展了產(chǎn)展了產(chǎn)-胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。胡

6、蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請回答下列問題：請回答下列問題： (3) (3)右圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖右圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙依次是中甲、乙、丙依次是 。(填序號(hào)填序號(hào))安全閥、放氣閥、壓力表安全閥、放氣閥、壓力表 放氣閥、安全閥、壓力表放氣閥、安全閥、壓力表 安全閥、放氣閥、溫度表安全閥、放氣閥、溫度表 放氣閥、安全閥、溫度放氣閥、安全閥、溫度 9【例題【例題1 1】為了獲得為了獲得-胡蘿卜素胡蘿卜素產(chǎn)品產(chǎn)品,某小組開某小組開展了產(chǎn)展了產(chǎn)-胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請回答下列問題：請回答下列問題：（4）為了將分離到菌

7、株純化）為了將分離到菌株純化,挑取菌落挑取菌落在在3塊塊相同平板上劃線相同平板上劃線,結(jié)果其中一塊平板各劃線區(qū)結(jié)果其中一塊平板各劃線區(qū)均未見菌生長，最可能原因是均未見菌生長，最可能原因是 。（5）為增加）為增加-胡蘿卜素提取量，在研磨酵母胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細(xì)胞時(shí)，添加石英砂的目的是細(xì)胞時(shí)，添加石英砂的目的是 ；研；研磨時(shí)磨時(shí) (填填“需要需要”或或“不需要不需要”)添加添加caco3，理由是，理由是 。 接種環(huán)溫度過高，接種環(huán)溫度過高，菌被殺死菌被殺死 研磨充分研磨充分不需要不需要-胡蘿卜素較耐酸胡蘿卜素較耐酸（較穩(wěn)定）（較穩(wěn)定）10計(jì)算計(jì)算 大腸桿菌的分離純化培養(yǎng)大腸桿菌的分離純化培

8、養(yǎng)（一）制備（一）制備牛肉膏蛋白胨固體牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基稱量稱量溶化溶化( (調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)ph)ph)滅菌滅菌倒平板（倒平板（5050）11 倒平板（倒平板（5050）12防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染；防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染；使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)平板倒置平板倒置平板冷凝平板冷凝打開一條縫隙打開一條縫隙 倒平板（倒平板（5050）13 大腸桿菌的分離純化培養(yǎng)大腸桿菌的分離純化培養(yǎng) （二）（二）分離純化分離純化大腸桿菌大腸桿菌 方法一、平板劃線法方法一、平板劃線法14 方法一、平板劃線法方法一、平板劃線法15單菌落單菌落丙丙甲甲乙乙1

9、6（一）系列稀釋（一）系列稀釋操作操作101102103104105106移液管移液管 移液管移液管吸取菌液稀釋時(shí)吸取菌液稀釋時(shí)，輕壓橡皮頭，輕壓橡皮頭，吹吸三次吹吸三次的目的是？的目的是？ 使菌液與水充分混勻使菌液與水充分混勻 方法二、稀釋涂布平板法方法二、稀釋涂布平板法17（二）涂布平板（二）涂布平板操作操作18【例題【例題2】 微生物的分離和培養(yǎng)是現(xiàn)代生物微生物的分離和培養(yǎng)是現(xiàn)代生物工程應(yīng)用中的重要環(huán)節(jié)。據(jù)此回答：工程應(yīng)用中的重要環(huán)節(jié)。據(jù)此回答： （1）甲操作稱為）甲操作稱為 ，指出乙、丙操作的，指出乙、丙操作的錯(cuò)誤：乙錯(cuò)誤：乙 ，丙丙 。（2）判斷：固體培養(yǎng)基上由一個(gè)細(xì)胞繁殖而）判斷：

10、固體培養(yǎng)基上由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體叫做來的肉眼可見的子細(xì)胞群體叫做 ，屬于，屬于生命系統(tǒng)的生命系統(tǒng)的 層次。層次。 倒平板倒平板未在酒精燈火焰附近（旁）劃線未在酒精燈火焰附近（旁）劃線最后一區(qū)域劃線與第一區(qū)域相連最后一區(qū)域劃線與第一區(qū)域相連 菌落菌落 種群種群19（3 3）判斷：）判斷：不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落（的菌落（ ） 打開含菌種的試管需通過火焰滅菌（打開含菌種的試管需通過火焰滅菌（ ） 溶化時(shí)將稱好的牛肉膏從稱量紙上直接倒入溶化時(shí)將稱好的牛肉膏從稱量紙上直接倒入燒杯（燒杯（ ）熔化瓊脂時(shí)，需要用玻璃棒不斷攪拌以

11、防止熔化瓊脂時(shí)，需要用玻璃棒不斷攪拌以防止糊底（糊底（ ）（4 4）分散細(xì)菌得到單菌落）分散細(xì)菌得到單菌落 法法比比 法效果更好。法效果更好。 稀釋度足夠高的稀釋度足夠高的 口口連同稱量紙一同連同稱量紙一同稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法20 平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法21研究者得到一個(gè)經(jīng)培養(yǎng)后菌落分布如圖研究者得到一個(gè)經(jīng)培養(yǎng)后菌落分布如圖所示的平板，推測接種時(shí)可能的操作失所示的平板，推測接種時(shí)可能的操作失誤？誤？ 涂布不均勻涂布不均勻22（5）每次劃線前和劃線后，接種環(huán)都要通過）每次劃線前和劃線后，接種環(huán)都要通過灼燒滅菌，完成右圖丙的劃線操作，灼燒滅菌

12、，完成右圖丙的劃線操作，共需灼燒接種環(huán)共需灼燒接種環(huán)_次。灼燒接種環(huán)之次。灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行劃線操作的原因后，要冷卻后再進(jìn)行劃線操作的原因是是 。 （6）第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從）第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，原因是上一次劃線的末端開始劃線，原因是_，多次劃線的目的，多次劃線的目的是是 。 6 以免接種環(huán)溫度過高，殺死菌種以免接種環(huán)溫度過高，殺死菌種末端細(xì)菌數(shù)目比起始端少末端細(xì)菌數(shù)目比起始端少使細(xì)菌數(shù)目隨劃線次數(shù)增加逐漸減少，使細(xì)菌數(shù)目隨劃線次數(shù)增加逐漸減少，以便分離得到單菌落以便分離得到單菌落23（7 7）右圖是某同學(xué)修正丙操作后的正確的）

13、右圖是某同學(xué)修正丙操作后的正確的“微生物平微生物平板劃線板劃線”示意圖。示意圖。劃線順序?yàn)閯澗€順序?yàn)?234512345。下列有下列有關(guān)敘述中正確的是（關(guān)敘述中正確的是（ ） d24 大腸桿菌的分離純化培養(yǎng)大腸桿菌的分離純化培養(yǎng) （三）分離純化后（三）分離純化后培養(yǎng)培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基未接種培養(yǎng)基 接種培養(yǎng)基接種培養(yǎng)基 無菌落產(chǎn)生無菌落產(chǎn)生有菌落產(chǎn)生有菌落產(chǎn)生251、對照培養(yǎng)方法：將、對照培養(yǎng)方法：將 。2、對照培養(yǎng)結(jié)果：、對照培養(yǎng)結(jié)果：若未接種培養(yǎng)基上若未接種培養(yǎng)基上 ，接種培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)基上 ，則說明符合要求。則說明符合要求。 （三）分離純化后（三）分離純化后培養(yǎng)培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基和已接種培養(yǎng)

14、基都放入適未接種培養(yǎng)基和已接種培養(yǎng)基都放入適宜溫度恒溫箱中培養(yǎng)適宜時(shí)間觀察結(jié)果宜溫度恒溫箱中培養(yǎng)適宜時(shí)間觀察結(jié)果無菌落產(chǎn)生無菌落產(chǎn)生有菌落產(chǎn)生，且菌落顏色、有菌落產(chǎn)生，且菌落顏色、形狀、大小基本一致并符合形狀、大小基本一致并符合大腸桿菌菌落特點(diǎn)大腸桿菌菌落特點(diǎn)26 土壤土壤“纖維素分解菌纖維素分解菌”的分離與篩的分離與篩選選 土壤土壤“尿素分解菌尿素分解菌”的分離與計(jì)數(shù)的分離與計(jì)數(shù) 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法27【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)】【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)】土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)*樣品稀釋樣品稀釋（梯度稀釋）（梯度稀釋）將樣品涂布到將樣品涂布到鑒別纖維鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基素分解菌的培養(yǎng)基上上挑選產(chǎn)生

15、挑選產(chǎn)生透明透明圈圈的菌落的菌落什么樣的環(huán)什么樣的環(huán)境取樣境取樣?選擇培養(yǎng)的目的選擇培養(yǎng)的目的? ?液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基28（2 2）分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中操作有誤）分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中操作有誤的是（的是（ ）a.a.經(jīng)經(jīng)選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 后后將樣品涂布在鑒別纖維素分將樣品涂布在鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上解菌的培養(yǎng)基上 b.b.選培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)的纖維素分解選培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)的纖維素分解菌少菌少c.c.經(jīng)稀釋涂布培養(yǎng)后，用剛果紅染色經(jīng)稀釋涂布培養(yǎng)后，用剛果紅染色d.d.對照組對照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維不含纖維素的培養(yǎng)基上素的培養(yǎng)

16、基上 樣品稀釋（梯度稀釋）樣品稀釋（梯度稀釋） a29【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)】【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)】土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)*樣品稀釋樣品稀釋（梯度稀釋）（梯度稀釋）將樣品涂布在將樣品涂布在選擇尿素選擇尿素分解菌的培養(yǎng)基分解菌的培養(yǎng)基上上統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)計(jì)數(shù)細(xì)菌數(shù)計(jì)數(shù)細(xì)菌數(shù)什么樣的環(huán)什么樣的環(huán)境取樣境取樣?選擇培養(yǎng)的目的選擇培養(yǎng)的目的? ?液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基觀察菌落觀察菌落 30 同種微生物菌落特征：同種微生物菌落特征：顏色、形狀、大小、顏色、形狀、大小、隆起程度（突起）、邊緣隆起程度（突起）、邊緣等方面基本一致，等方面基本一致，這些都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。這些都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。 31 土壤土壤

17、“尿素分解菌尿素分解菌”的分離與計(jì)數(shù)的分離與計(jì)數(shù) 【樣品稀釋】【樣品稀釋】 【平板涂布】【平板涂布】 【統(tǒng)計(jì)菌落】【統(tǒng)計(jì)菌落】 【計(jì)數(shù)菌數(shù)】【計(jì)數(shù)菌數(shù)】 3290ml無菌水無菌水 9ml無菌水無菌水 9ml無菌水無菌水 【樣品稀釋】【樣品稀釋】 33用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為稀釋倍數(shù)為10106的培養(yǎng)基中，幾位同學(xué)分別得的培養(yǎng)基中，幾位同學(xué)分別得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果：到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果： a a同學(xué)：同學(xué)：涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230230b b同學(xué)：同學(xué)：涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)

18、計(jì)的菌落數(shù)是涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215215和和260260 ，取平均值，取平均值238238c c同學(xué)：同學(xué)：涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是2121、 212212和和256256，取平均值，取平均值163163d d同學(xué)：同學(xué)：涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210210、 240240和和480480，取平均值，取平均值310310e同學(xué)：同學(xué)：涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210210、 240240和和250250，取平均值，取平均值2332333490ml無菌水無菌水 9ml無菌水無菌水 9ml無菌水無菌水 0.1ml 0.1ml 0.1ml 至少涂布至少涂布3個(gè)平板；個(gè)平板；菌落數(shù)目在菌落數(shù)目在30-300個(gè)之個(gè)之間的平板最適宜計(jì)數(shù)間的平板最適宜計(jì)數(shù)【平板涂布與菌落統(tǒng)計(jì)】【平板涂布與菌落統(tǒng)計(jì)】 35 設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)判斷選擇培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷選擇培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：未接種培養(yǎng)基（對照組）與接種培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基（對照組）與接種培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，若若