綜合實驗二,骨髓細胞染色體畸變試驗

1、實驗九實驗九.骨髓細胞染色體畸變試驗骨髓細胞染色體畸變試驗一實驗?zāi)康囊粚嶒災(zāi)康?. 掌握骨髓細胞染色體制片及染色技術(shù)：2. 觀察骨髓細胞染色體.二。原理：原理：染色體是細胞核中具有特殊結(jié)構(gòu)和遺傳功能的小體，當(dāng)化學(xué)物質(zhì)作用于細胞周期G1期和S期時，誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。給試驗的大、小白鼠腹腔注入秋水仙素，抑制細胞分裂時紡錘體的形成，以便增加中期分裂相細胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。 三三. .實驗材料：實驗材料： 大白鼠（2N=42)或小白鼠（2N=40)四，儀器，藥品，用具四，儀器，藥品，用具 顯微鏡，離心機，恒

2、溫箱，5mL針管，天平 1. 0.1%秋水仙素：置于棕色瓶中，冰箱保存。2. 2.2%檸檬酸鈉。3. pH7.4磷酸緩沖液 4. 0.075mol/L氯化鉀溶液。 5. 甲醇(分析純)：冰乙酸(分析純)以3 1混合，臨用現(xiàn)配。 6. Giemsa應(yīng)用液：取1mL儲備液加入10mL pH7.4磷酸緩沖液。 五五.實驗內(nèi)容和方法：實驗內(nèi)容和方法：1.處死動物前24h，按4mg/kg體重腹腔注入秋水仙素。 2. 取骨髓細胞，大鼠斷頭處死、小鼠頸椎脫臼，立即剪取后肢，取除肌肉，剝出后肢股骨，用75%酒精擦去肌肉殘渣，剪去兩端骨骺 用帶針頭的5ml注射器吸取4mL2.2%檸檬酸鈉溶液，將骨髓洗入10mL

3、離心管中，反復(fù)沖洗數(shù)次直至股骨斷面由紅色變粉色，然后以1500r/min離心10min，棄去上清液。 3 . 低滲處理低滲處理離心后的沉淀物加入4mL0.075mol/L氯化鉀溶液，混勻后在37水浴或恒溫箱中放置30min，再以1500r/min離心10min，棄去上清液。 4固定固定將新配制甲醇冰乙酸固定液4mL沿管壁加入樣品中，10min后，用吸管將細胞團塊打碎繼續(xù)固定10min，以1500r/min離心10min棄去上清液，再加固定液4mL靜置20min后1500r/min離心10min，棄去上清液，用吸管混勻制成0.51.0mL細胞懸液。5制片 自冰水中取出載玻片，傾斜30放置，立即

4、吸取 細胞懸液在玻片的1/3處滴3滴，輕吹細胞懸液擴散平鋪于玻片上。將載玻片掠過酒精燈幾次，每個樣品制23張玻片，空氣中自然干燥。 6染片臨用時取Giemsa儲備液1mL加磷酸緩沖液10mL，置染色缸中，將涂片浸于染液中染色15min左右，取出玻片用水沖洗，空氣中自然干燥。7 7鏡檢鏡檢7.1在低倍鏡下檢查制片質(zhì)量，制片應(yīng)為全部染色體較集中，而各個染色體分散、互不重疊、長短收縮適中、兩條單體分開、清楚地顯示出著絲點位置、染色體呈紅紫色 8.觀察項目和結(jié)果判定觀察項目和結(jié)果判定 8.1每只動物分析100個中期相細胞，觀察項目為染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)改變。 8.2染色體數(shù)目的改變?nèi)旧w數(shù)目的改變 8.2.1非整倍體：亞二倍體或超二倍體。 8.2.2多倍體：染色體成倍增加。.8.3染色體結(jié)構(gòu)的改變。8.3.1斷裂：損傷長度大于染色體的寬度。 8.3.2微小體；較斷片小而呈圓形。8.3.3有著絲點環(huán)：兩端形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，帶有著絲點部分，并伴有一雙無著