動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)

1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，為了獲得有關(guān)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等方面的 新知識(shí)或解決具體問(wèn)題而使用動(dòng)物進(jìn)行的科學(xué)研究。以下小編為你 整理了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，希望對(duì)你有所 參考幫助。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)就是擬定實(shí)驗(yàn)方案，在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí)，對(duì)研究方案 作合理的安排，以減少隨機(jī)誤差的影響。采用適當(dāng)?shù)难芯繉?shí)驗(yàn)次數(shù)， 減少實(shí)驗(yàn)的成本并能對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行有效的分析，提高實(shí)驗(yàn)研究的可靠 性，從而實(shí)現(xiàn)研究的目的。研究設(shè)計(jì)包括專業(yè)設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)兩個(gè)部分。統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)主要是 依據(jù)研究目的，從研究的現(xiàn)況條件出發(fā)，規(guī)定研究因素、選擇效應(yīng) 指標(biāo)、確定研究對(duì)象的引入方式方法和規(guī)模，擬實(shí)施的方法、方案， 及數(shù)據(jù)收集、整理分析的模式，直至結(jié)果的解

2、釋，進(jìn)行系統(tǒng)的安排， 使其消耗最少的人力物力和時(shí)間，而獲得可靠的信息與結(jié)論。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本要素為：實(shí)驗(yàn)單位、處理因素和實(shí)驗(yàn)效 應(yīng)。(1) 大多數(shù)情況下，實(shí)驗(yàn)單位等同于實(shí)驗(yàn)對(duì)象、受試對(duì)象，在 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物即為實(shí)驗(yàn)單位。(2) 處理要素：是研究者根據(jù)研究目的施加于實(shí)驗(yàn)單位，在實(shí) 驗(yàn)中需要觀察并闡明其效應(yīng)的因素，是實(shí)驗(yàn)單位分組的標(biāo)志。而非 處理因素則是指實(shí)驗(yàn)中非人為施加的、與處理因素同時(shí)存在，同樣 可以使受試對(duì)象產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)效應(yīng)的因素，如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的雌雄、體重等 因素。突出研究因素的主導(dǎo)作用，排除混雜因素的干擾作用，可以 通過(guò)相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，盡量使非處理因素在各處理組中的分布 達(dá)到一致或均衡，以便

3、分離出處理因素的效應(yīng)。另外，處理因素的 施加方法、強(qiáng)度、頻率和持續(xù)時(shí)間等，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)始終保持不 變，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)的可靠性和穩(wěn)定性；處理因素作用于受試對(duì) 象的反應(yīng)，是研究結(jié)果的最終體現(xiàn)，其基本要求客觀性、特異性、 靈敏性和精確性。(3) 實(shí)驗(yàn)效應(yīng)：處理因素作用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，出現(xiàn)實(shí)驗(yàn) 效應(yīng)， 一般是用各種指標(biāo)來(lái)反映的。指標(biāo)按其性質(zhì)可分為計(jì)數(shù)(含等級(jí))指 標(biāo)和計(jì)量指標(biāo)，計(jì)數(shù)指標(biāo)如“是”“否”“有”“無(wú)”，“陽(yáng)性”“陰性”，“痊愈” “顯效”"好轉(zhuǎn)” “無(wú)效”，“存活” “死 亡”等。計(jì)量指標(biāo)指可測(cè)量(含間接測(cè)量)的指標(biāo)，如很多檢查和檢驗(yàn)指標(biāo)。在對(duì)指標(biāo)進(jìn)行觀察時(shí)應(yīng)注意： 實(shí)驗(yàn)效應(yīng)的

4、觀察應(yīng)避免偏性。研究者的心理往往偏于陽(yáng)性結(jié)果，為了消除或減少測(cè)量偏差，設(shè)計(jì)時(shí)常釆用盲法。 應(yīng)注意處理和效應(yīng)的關(guān)系：處理與效應(yīng)之間存在一定的關(guān)系，如劑量反應(yīng)曲線。做實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇一個(gè)合適的實(shí)驗(yàn)劑 量。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的三大原則即為重復(fù)(replication)、隨機(jī)化 (randomization)和對(duì)照(COntrOl),這是藥理實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本要 求。其目的是排除非處理因素的作用，控制隨機(jī)誤差，避免系統(tǒng)誤 差，提高實(shí)驗(yàn)效率。(1) 重復(fù)原則(重復(fù)穩(wěn)定性)：能夠充分重現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)，才能稱 為可靠的實(shí)驗(yàn)。另外，實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)有一定數(shù)量的重復(fù)觀測(cè)結(jié)果，即 實(shí)驗(yàn)單位要達(dá)到一定數(shù)量。避免將個(gè)別情況誤認(rèn) 為普遍情況，將偶 然

5、誤認(rèn)為必然，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤推廣，同一實(shí)驗(yàn)條件下、同一觀測(cè) 指標(biāo)的多次測(cè)量會(huì)有變異，多次測(cè)量才能描述變異，估計(jì)隨機(jī)誤差。 實(shí)驗(yàn)單位足夠多時(shí)，才能獲得隨機(jī)誤差比較小的統(tǒng)計(jì)量。重復(fù)的目 的是估計(jì)和控制實(shí)驗(yàn)中的隨機(jī)誤差，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。樣本 中包含的實(shí)驗(yàn)單位數(shù)稱為樣本含量(樣本量)。重復(fù)原則的應(yīng)用就 是樣本含量的估計(jì)。首先要考慮實(shí)驗(yàn)要有足夠的例數(shù)，能準(zhǔn)確重復(fù)再現(xiàn)，同時(shí)盡可 能排除對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，它包括：動(dòng)物方面，如品種、品系、體 重、年齡、性別、飼料及飼養(yǎng)環(huán)境等；儀器方面：準(zhǔn)確性、穩(wěn)定 性、電壓穩(wěn)定性及操作熟練程度等；藥物方面：性能、批號(hào)、純 度、劑量和注射速度等。此外還有室溫、氣壓、季節(jié)等物理因

6、素， 甚至實(shí)驗(yàn)是在上午還是下午，動(dòng)物群養(yǎng)或單養(yǎng)等，均應(yīng)預(yù)先考慮清 楚，做好設(shè)計(jì)。(2) 隨機(jī)化原則：其目的是一切干擾因素分配到各組時(shí)只受純 機(jī)遇的抽樣誤差的影響，避免受實(shí)驗(yàn)者主觀因素的干擾，減小或避 免偏性誤差，是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的重要原則之一。隨機(jī)化手段可釆取隨 機(jī)數(shù)字表或小計(jì)算機(jī)上的隨機(jī)數(shù)字鍵。在實(shí)驗(yàn)分組時(shí)，每個(gè)受試對(duì)象均有相同的概率或機(jī)會(huì)被 分配到 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。隨機(jī)化是一種實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的分組程序，而非“隨便”、 “隨意”和“非選擇性”。隨機(jī)化的意義是保證各種非處理因素在各個(gè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組達(dá)到均衡，從而顯現(xiàn)處理因素的作用，避免各 種主、客觀因素可能導(dǎo)致 的偏性，減少系統(tǒng)誤差，提高研究結(jié)果的 效度

7、。隨機(jī)化分組 是從假設(shè)檢驗(yàn)結(jié)果推論因果關(guān)系的基礎(chǔ)，確定處 理因素與實(shí)驗(yàn)結(jié)果之間因果關(guān)系的前提是隨機(jī)分組后、施加干預(yù)前, 所 有觀察對(duì)象都屬于同一個(gè)總體。(3) 對(duì)照原則：確定實(shí)驗(yàn)組時(shí)，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組，即不施加處理因素的實(shí)驗(yàn)組，只暴露于非處理因素。對(duì)照組除沒(méi)有處理因素外， 其他對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能有影響的因素(已知、可控的非處理因素)都 應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)組盡量相同。常用的對(duì)照形式，分為空白對(duì)照(blank COntrOl) 實(shí)驗(yàn)對(duì)照(experimental CorItrol)、 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照(Standard COrItrol)、 相互對(duì)照(InUtUaI COntrOI)、潛在對(duì)照(POtential CO

8、ntrOI)。 空白對(duì)照即對(duì)對(duì)照組不施加干預(yù)，對(duì)照組的處理 因素為“空白”； 實(shí)驗(yàn)對(duì)照即對(duì)照組不施加干預(yù)，但施加某 種與處理因素有關(guān)的實(shí)驗(yàn) 因素，用于處理因素的施加需伴隨其他因素，而這些因素又可能影 響實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)；標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組的干預(yù)采用現(xiàn)有“標(biāo)準(zhǔn)”方法或常規(guī)方 法，主要用于臨床試驗(yàn)，當(dāng)倫理上不允許對(duì)對(duì)照組患者采用空白對(duì) 照或假干預(yù)，如新藥研究采用目前療效確定的藥物作為對(duì)照藥；相 互對(duì)照則不專門設(shè)立對(duì)照組，各實(shí)驗(yàn)組間互為對(duì)照，如比較幾種同類 藥物的療效差別：潛在對(duì)照也不用專門設(shè)立對(duì)照組，以過(guò)去的研究 結(jié)果為對(duì)照(歷史對(duì)照)。另外，當(dāng)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組例數(shù)相等時(shí)， 統(tǒng)計(jì)學(xué)證明其統(tǒng)計(jì)效率最高，輕視對(duì)照或?qū)?/p>

9、照 較少是錯(cuò)誤的和不妥當(dāng)?shù)?。抽樣和分組必須嚴(yán)格遵守隨機(jī)原則，主要因素要均衡一致，但 抽取哪一只動(dòng)物。分配到哪一組則按隨機(jī)數(shù)字表或鍵而定。如果隨 意拿取動(dòng)物，先取到的為第一組，依次遞推，則反應(yīng)活潑敏捷不易 抓到的動(dòng)物勢(shì)必集中到最后幾組，各組的條件就有了偏性誤差。為 此，下面介紹幾種主要的分組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。完全隨機(jī)設(shè)計(jì)(ComPletely random design)亦稱單因素設(shè)計(jì)， 即將受試對(duì)象隨機(jī)分到各處理組中進(jìn)行試驗(yàn)觀察，或分別從不同總 體中隨機(jī)抽樣進(jìn)行對(duì)比觀察。它適用于兩個(gè)或兩個(gè)以上樣本的比較， 各組間樣本量可相等，也可不相等，但是樣本相等時(shí)統(tǒng)計(jì)分析效率 較高。例1.將12只動(dòng)物隨機(jī)分配

10、到A、B兩組。Cl)先將12只動(dòng)物編號(hào)為1、212號(hào)，然后在隨機(jī)數(shù)字表內(nèi)任意確定一個(gè)起始點(diǎn)和方向連續(xù)取12個(gè)隨機(jī)數(shù)字，并依次抄錄于動(dòng)物編號(hào)下。(2)本例從隨機(jī)數(shù)字表第6行第19、20列起向下讀取12個(gè)隨機(jī)數(shù)字，取兩位隨機(jī)數(shù)字(表4-1) o(3)將隨機(jī)數(shù)字從小到大順序排列后得序號(hào)R并規(guī)定R=I-6者為A組，R: 7-12者為B組。例2.將15只動(dòng)物隨機(jī)分成三組。(1) 將動(dòng)物編號(hào)如1、215號(hào)，然后在隨機(jī)數(shù)字表內(nèi)從某行 某列起向某方向讀取15個(gè)隨機(jī)數(shù)字，取兩位隨機(jī)數(shù)字，依次抄錄 于動(dòng)物編號(hào)下。(2) 將隨機(jī)數(shù)字從小到大順序排列后得序號(hào)RO(3) 規(guī)定R=I5者為A組，R=610者為E組，R=I

11、I- 15者為 C組。(4) 本例從隨機(jī)數(shù)字表第5行第17、18列起向下讀取15個(gè) 隨機(jī)數(shù)字(表4-2) o表4-215只動(dòng)物完全隨機(jī)分三組結(jié)果注:隨機(jī)數(shù)字06之后隨機(jī)數(shù)字為02,但前面已經(jīng)出現(xiàn)過(guò)，故 舍去。隨機(jī)分組應(yīng)注意：(1) 隨機(jī)數(shù)的位數(shù)不應(yīng)小于N的位數(shù)：(2) 隨機(jī)數(shù)如果有重號(hào)數(shù)字應(yīng)舍棄：(3) 若科研上需要各組例數(shù)不等可利用序號(hào)(R)調(diào)整各組例數(shù)。 如在例2中要求A組6例，B組5例，C組4例，可規(guī)定R=I6者 為A組，R=711者為B組，R= 12-15者為C組。統(tǒng)計(jì)假設(shè)檢驗(yàn)方法：(1) 計(jì)量資料：t檢驗(yàn)、方差分析或秩和檢驗(yàn)等；(2) 計(jì)數(shù)資料：卡方檢驗(yàn)等。完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的優(yōu)缺點(diǎn)：設(shè)計(jì)

12、及統(tǒng)計(jì)分析簡(jiǎn)單。但是，實(shí)驗(yàn)效 率不高，只能分析單因素。將受試對(duì)象按某些特征或條件配成對(duì)子，然后分別把每對(duì)中的 兩個(gè)受試對(duì)象隨機(jī)分配到實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，再給予每對(duì)中的個(gè)體以 不同處理，連續(xù)實(shí)驗(yàn)若干對(duì)，觀察對(duì)子間的差 別有無(wú)意義。配對(duì)設(shè)計(jì)的特征或條件：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常以種屬、品系、性別相同， 年齡、體重相近的兩只動(dòng)物配成對(duì)子；臨床療效觀察常將病種、病 型、族別、性別相同，年齡相差不超過(guò)23歲，生活習(xí)慣、工 作環(huán)境等相似的患者配成對(duì)子；進(jìn)行配對(duì)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)注意不要“配對(duì) 過(guò)頭”。例如，研究高血壓與鈉鹽攝入量的關(guān)系，如果將高 血壓患 者與非高血壓患者按飲食習(xí)慣配對(duì)后比較鈉鹽攝入 量，由于飲食習(xí) 慣與鈉鹽攝入量關(guān)系

13、密切，可能會(huì)掩蓋病例與對(duì)照在鈉鹽攝入量上 的差異；實(shí)驗(yàn)者必須在整個(gè)研究過(guò)程中，始終能辨認(rèn)屬于同一對(duì)子 的是哪兩只動(dòng)物，因此動(dòng)物編號(hào)是非常重要的；記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)保 持每對(duì)的一一對(duì)應(yīng)關(guān)系，不能錯(cuò)亂或缺失。計(jì)算每對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的差 值時(shí)，順序應(yīng)當(dāng)一致。例：取20只小鼠，按性別、體重、窩別配成10對(duì)，試 將其 分配到實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中去。先按配對(duì)條件配對(duì)，并將對(duì)子編號(hào)，"口、， 然后再在隨機(jī)數(shù)字表上任意指定行列及查找方向，將隨機(jī)數(shù)字依次 抄寫在“對(duì)子號(hào)”下。事先規(guī)定，遇單數(shù)定為AB順序，遇雙數(shù)定為BA順序。本例：從隨機(jī)數(shù)字表中第46行31、32列向右查找隨機(jī)數(shù)字（表43）表4-320只動(dòng)物完全隨機(jī)

14、分三組結(jié)果常用統(tǒng)計(jì)假設(shè)檢驗(yàn)方法計(jì)量資料：配對(duì)t檢驗(yàn)、配對(duì)符號(hào)檢驗(yàn)、WilCOXOn符號(hào)秩檢 驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料：卡方檢驗(yàn)、一致性檢驗(yàn)等。配對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)： 配對(duì)設(shè)計(jì)可做到嚴(yán)格控制非處理因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，同時(shí)使受 試對(duì)象間的均衡性增大，因而可提高實(shí)驗(yàn)效率。它與成組的完全隨 機(jī)設(shè)計(jì)相比較，可 克服受試對(duì)象間由于遺傳因素的差異所引起的偏 差，同時(shí)還 可以減少樣本含量。是在自身配對(duì)設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上發(fā)展的雙因素設(shè)計(jì)，可在同一對(duì)象身上觀察兩種處理的效應(yīng)，并能減少誤差，提咼檢驗(yàn)效 率。例如：研究A藥治療高血壓的療效，以傳統(tǒng)的抗高血壓B藥物作對(duì)照。經(jīng)隨機(jī)化將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為兩組，一組先給A藥后再給B藥， 另一組先給E藥

15、后再給A藥。第一、二階段均為一個(gè)月，一、二階 段之間的間歇期為一周。結(jié)果見表4-4 ：表4-4兩種藥物治療高血壓的交叉實(shí)驗(yàn)析因設(shè)計(jì)是一種多因素多水平交叉分組進(jìn)行全面實(shí)驗(yàn) 的設(shè)計(jì)方法，將兩個(gè)或多個(gè)實(shí)驗(yàn)因素 的各水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。例如：2個(gè)因素同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每個(gè)因素取2個(gè)水平，實(shí)驗(yàn) 的總組合數(shù)有22=4個(gè)(表4-5)；如果每個(gè)因素取3個(gè)水平，則 總組合數(shù)有32二9個(gè)，即這9種組合都要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，故一般采用簡(jiǎn) 單的析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)。析因設(shè)計(jì)可以提供三方面的重要信息：各因素不同水平的效應(yīng) 大小；各因素間的表4-5 2 X 2析因設(shè)計(jì)交互作用；通過(guò)比較各種組合，找出最佳組合。如果在一次實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)一個(gè)因素的水平間的

16、效應(yīng)隨其他因素的水平不同而變化時(shí)，因素間存在交互作用，它是各因素效應(yīng)間不獨(dú)立的表現(xiàn)。正交設(shè)計(jì)適用于多因素分析，可算出各因素不同水平對(duì) 實(shí)驗(yàn)的 影響，找出最佳組合。現(xiàn)以L4(23)及L9(34)正交設(shè) 計(jì)結(jié)合例子 簡(jiǎn)單介紹(L表示正交設(shè)計(jì)，4或9表示分4組或9組，23表 示3個(gè)因素2個(gè)水平，34表示4個(gè)因素3個(gè)水平)。例1營(yíng)養(yǎng)液中有三個(gè)因素(Ca2+, K+, Mg2+),各有2個(gè)水平(高 濃度、低濃度)，要分析它們對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，找出最佳組合，可設(shè) 計(jì)如下表4-6 :表4-6 L4(23)正交設(shè)計(jì)表中Ca2+的1水平之和為+=, K+的1水平之和為+=,o可以看出，Ca2+的差值絕對(duì)值最大，說(shuō)明

17、Ca2+對(duì)實(shí)驗(yàn)影響最大，且低濃度 好。K+的影響次之，高濃度好。Mg2+的影響最小，高濃度好。結(jié)論是以低 Ca2+,高K+,高M(jìn)g2+為最佳組 合。但是，這一組合在實(shí)驗(yàn)中并未出現(xiàn)，但正交設(shè)計(jì)提示這 是最佳 組合，可安排復(fù)試加以驗(yàn)證。例2四種藥物各有三個(gè)水平，用L9 (34)正交設(shè)計(jì)，見表4-7 :由表中可以看出甲藥影響最大，應(yīng)列為主藥，大劑量較好。乙、 丙、丁三藥影響較小，可列為輔藥，最佳組合為甲藥大劑量，乙藥 大劑量，丙藥小劑量，不用丁藥。按理四種 藥物各三個(gè)水平，應(yīng)做 34=81組實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)在只做9組就找出了實(shí)驗(yàn)中并未出現(xiàn)的最佳組合。在正式實(shí)驗(yàn)前應(yīng)充分重視預(yù)試驗(yàn)的重要性，小規(guī)模的預(yù)試驗(yàn)是 使

18、用少量的動(dòng)物得到預(yù)示性的數(shù)據(jù)或通過(guò)預(yù)試驗(yàn)將操作和技術(shù)固定 并完善，即通過(guò)預(yù)試驗(yàn)可了解各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，找出最適實(shí)驗(yàn) 對(duì)象、用藥劑量和實(shí)驗(yàn)條件及檢測(cè)指標(biāo)，如溫度、刺激強(qiáng)度、營(yíng)養(yǎng) 液組方等，為正式實(shí)驗(yàn)做必要的準(zhǔn)備，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)穩(wěn)定性和靈 敏度。為此，預(yù)試驗(yàn)中應(yīng)注意以下問(wèn)題：表4-7 L9(34)正交設(shè)計(jì)(1) 實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性：變異系數(shù)越小，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)波動(dòng)越小，實(shí)驗(yàn)的 重復(fù)穩(wěn)定性越好。變異系數(shù)CV=O(2) 實(shí)驗(yàn)靈敏度：預(yù)試驗(yàn)時(shí)測(cè)定兩個(gè)有效量(Dl. D2), 測(cè)定其反應(yīng)強(qiáng)度(El、E2)o計(jì)算因變系數(shù)，因變系數(shù)越小，實(shí)驗(yàn)靈敏度越好。因變系數(shù) Cl=(E2-E1) / (lgD2-lgDl)。篩選是在

19、預(yù)試驗(yàn)或既往經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用少量動(dòng)物對(duì)多種藥物 或造模手段進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。一般以P (1)保護(hù)性實(shí)驗(yàn)(以急性毒性實(shí)驗(yàn) 為例)：篩選解毒藥時(shí)，常將各解毒藥與毒劑的半數(shù)致死量(LD50) 合用，連用4只非純品系動(dòng)物，如無(wú)死亡，表明該藥篩選合格(P (2)概率判別實(shí)驗(yàn)：本法應(yīng)用范圍更 廣，對(duì)幾只動(dòng)物用藥檢測(cè)其陽(yáng)性反應(yīng)數(shù)，就可根據(jù) 概率論推算出該 藥陽(yáng)性率的大致情況，參見表4-8 o表4-8概率判別實(shí)驗(yàn)(1) 動(dòng)物：多用非純品系動(dòng)物(能反應(yīng)個(gè)體差異)，如小鼠, 健康雌雄各半，20±2g為宜，日齡達(dá)到性成熟。(2) 實(shí)驗(yàn)條件：在有控制的室溫、光照、飼養(yǎng)和衛(wèi)生條件下進(jìn) 行。(3) 藥物及給藥途徑：以靜

20、脈注射、腹腔注射和灌胃為 主，最 好和臨床上給藥途徑相同。小鼠的用藥量標(biāo)準(zhǔn)為：灌胃給藥應(yīng)小于 ImI ；靜脈注射應(yīng)小于；腹腔注射應(yīng)小于ImI另外，藥液PH值及 滲透壓應(yīng)在生理范圍內(nèi)。 觀察項(xiàng)目和時(shí)間：記錄毒性反應(yīng)的癥狀、原因以及 致死時(shí) 間、致死藥量、致死動(dòng)物數(shù)量等，當(dāng)發(fā)現(xiàn)組織病變時(shí)，應(yīng)取材做 病理切片，必要時(shí)做組織學(xué)檢查，整個(gè)實(shí)驗(yàn)觀察7d(5) 實(shí)驗(yàn)報(bào)告：必須說(shuō)明實(shí)驗(yàn)條件，制定LD50值為全面 表達(dá) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)求出95%可信區(qū)間和LDIO來(lái)表示誤差限度和量效關(guān)系，通過(guò)LD50 和LDIO算出LD5、LD95以及回歸系數(shù)。(6) LD50測(cè)定法：方法很多，有加權(quán)機(jī)率單位法(BIiSS法)、目

21、測(cè)機(jī)率單位法、目測(cè)圖解法、寇氏法 (KOrlbOr)等， 對(duì)短期內(nèi)致死藥物還可釆用序貫法。(7) 對(duì)于中毒表現(xiàn)和致死原因的分析應(yīng)給予充分重視。(1) 預(yù)試驗(yàn)：根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或文獻(xiàn)找出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物0和100%死 亡的 劑量，即上下限劑量(Dn、DmO對(duì)于無(wú)毒性參考資料的藥物，一般先 配制最大濃度藥劑，然后倍比稀釋成多個(gè)劑量，方法是每組取4只 小鼠，按估計(jì)劑量梯度依次給藥。如某組 死亡數(shù)為4/4 ,其前一 組為2 / 4或3/4則以該組劑量定為Dm如前一組是0/4或7/4, 則以該組劑量的倍定為DnI同法找出Dn,這樣找出的DmDn比較可靠， 為正式實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。(2) 分組：以49組為宜，各組給藥劑量按等

22、比關(guān)系排列。(3) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算LD50：LD50 的 95 %平均可信限 LD50±X (LD84 一 LD16)/ 其中N，為5%95%致死率間動(dòng)物數(shù)。至少釆用兩種不同種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,即嚙齒類動(dòng)物（大鼠、小鼠 等）和哺乳類動(dòng)物（犬、猴等）。一般常采用大鼠和犬兩種,雌 雄各半,且動(dòng)物數(shù)量不宜太少,要滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)處 理的要求。動(dòng)物的進(jìn) 化程度越高,對(duì)藥物的敏感性越強(qiáng),慢性毒性實(shí)驗(yàn)的周期較長(zhǎng),所以要 盡量選用年齡較小的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,而且選用未成年的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在迅速生 長(zhǎng)時(shí)期,可以發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)生長(zhǎng)及各組織器官成熟的影響慢性毒性實(shí)驗(yàn)開始選擇的小鼠年齡最好是23周，體重8Iog ,而大鼠不超過(guò)3周

23、，體重50-6OgO但是避孕藥 物的毒 性實(shí)驗(yàn)則要求必須使用性成熟動(dòng)物，如小鼠應(yīng)60日齡以上，大鼠 應(yīng)在120日齡以上。常用三個(gè)劑量組，大動(dòng)物可用兩個(gè)劑量組，并嚴(yán)格按要求設(shè)動(dòng) 物對(duì)照組。高劑量組（LD50的1 /10-1/4劑量）應(yīng)有 輕微可 見的毒性反應(yīng)（或者某些化驗(yàn)指標(biāo)有明確而輕微的變化）。中劑 量組按LD50的1/30-1/10定量，最低劑量組應(yīng)是閾劑量組或是無(wú) 作用劑量組，具體劑量依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?。最好選擇臨床試用的給藥途徑。最好是臨床試用的用藥時(shí)間（連續(xù)給藥）的34倍，臨床 用藥30d以上者，動(dòng)物給藥至少半年。包括體征、常規(guī)血、尿檢查、臟器解剖及肉眼觀察、生 化指標(biāo) 檢查等（如新藥則

24、按其國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)核查應(yīng)有項(xiàng)目）。做病理切 片進(jìn)行組織學(xué)檢查（二十幾個(gè)臟器），必要時(shí)行骨髓檢查、酸堿 平衡、水和電解質(zhì)代謝等。由于在慢性毒性實(shí)驗(yàn)中，受試藥物的給藥劑量較低，往往一些 觀察指標(biāo)變化程度較小，因此需注意：在給藥前要觀察并記錄預(yù)計(jì) 的觀察指標(biāo)，以利于給藥后的比較；在給藥期間進(jìn)行定期指標(biāo)觀察 時(shí)，對(duì)照組需同步觀察；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后， 主張將最高劑量組與對(duì)照組各留部分動(dòng)物繼續(xù)飼養(yǎng)12個(gè)月，以便對(duì)已出現(xiàn)變化的指標(biāo)進(jìn)行追蹤觀察，有助于探討受試藥物 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有無(wú)后續(xù)作用，以及損傷可否恢復(fù)。按觀察記錄的結(jié)果定論，但不應(yīng)忽視綜合因素及其他因素對(duì)結(jié) 果的影響。其選擇動(dòng)物最重要的依據(jù)是對(duì)誘發(fā)腫瘤的易感性，所以應(yīng)考慮 物種、品系、年齡和性別。物種的選擇對(duì)受試物有特定的靶器官時(shí) 尤為重要。同時(shí)還應(yīng)考慮選擇腫瘤自發(fā)率低、抗病力強(qiáng)且易管理的 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一般多選用大、小鼠，雌雄 各半，IOO只以上做一組, 動(dòng)物多為近交系的第一代雜交動(dòng)物。此點(diǎn)較難，但非常重要，一般使用三個(gè)劑量，其中最高劑量應(yīng) 為最大耐受量，理想的最大耐受量不應(yīng)致死，也不引起可能縮短壽 命的毒性表現(xiàn)和病理改變，并且與對(duì)照組相比的體重下降不大于 10%,中劑量為高劑量的1/41/3,低劑量最好相當(dāng)于或低于人類實(shí)際可能接觸的劑量，同時(shí)應(yīng)設(shè)計(jì)好 陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。體征，一般癥狀，定期稱體重，最主要是密切觀察有無(wú)腫瘤發(fā) 生