好氧反硝化細菌培養(yǎng)基配制

1、好氧反硝化細菌培養(yǎng)基配制以及實驗方法一、好氧反硝化培養(yǎng)基（液體）醋酸鈉/ 0.5 g ; KNO3 / 0.1 g ; K2HPO 4 / 0.01g ;MgCl 2 / 0. 02 g ;CaCl 2 / 0. 01g ; H2O/ 1 000 ml ;p H 77. 5.好氧反硝化培養(yǎng)基（固體）醋酸鈉/ 0.5g ; KNO3/ 0.05g ; Na2 HPO 4 .7H 2 O/ 0. 5 g ;NaNO 2/0.01g;MgSO 4 ·7H 2 O/ 0. 1 g ; 瓊脂 18 g ;p H 77. 5.富集分離：取樣品泥樣置于上述液體培養(yǎng)基中，經(jīng)過每天24 小時曝氣富集

2、10 天。之后，取 1毫升底泥與 10 毫升去離子水混合，之后進行10 7 倍稀釋，在上述固體培養(yǎng)基上進行平板劃線分離。細菌初篩： 將分離得到的細菌接種到上述液體培養(yǎng)基中，然后在30 攝氏度環(huán)境下進行 24 小時的搖瓶培養(yǎng)，用紫外分光光度法檢測硝態(tài)氮含量，重復(fù) 2次，取降低最多的樣品繼續(xù)進行平板劃線，再重復(fù)上述操作，得到單一菌落。（驗證所得菌落是否單一：將所得菌落接種在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，進行無菌培養(yǎng)，檢測菌落是否單一。）細菌復(fù)篩：將初篩得到的單一菌落，進行實際污水測試，測試其實際降解硝態(tài)氮的能力。二、 BTB 初篩培養(yǎng)基 ：瓊脂 20 g 、 KNO3 1 g 、KH2PO41 g 、 F

3、eCl2 ·6H2O 0.5 g 、 CaCl2 ·7H2O 0.2 g 、MgSO4·7H2 O 1 g 、琥珀酸鈉 8.5 g 、溴百里酚藍1 / 3(BTB)(1% 乙醇溶液 )1 mL ，用 1 mol/L 的 NaOH 調(diào)節(jié)pH 至 7.0 7.3 ，121 滅菌 20 minLB 液體培養(yǎng)基 (/L) ：KNO3 1 g 、 KH2 PO41 g 、FeCl2·6H2O 0.05 g 、CaCl2·7H2 O 0.02 g 、MgSO4 ·7H2O 1 g 、琥珀酸鈉 8.5 g ， 121 滅菌 20 minDM 反硝化

4、培養(yǎng)基 (/L) ：KNO 3 0.72 g 、KH 2 PO4 1g 、MgSO 4 ·7H 2 O 1 g 、琥珀酸鈉 2.8 g ，121 滅菌20 min采用梯度稀釋法 將污泥樣品稀釋至適當濃度，取0.1 mL 均勻涂布于 BTB 培養(yǎng)基表面，置入恒溫培養(yǎng)箱，30 下培養(yǎng) 2 3 d 后，用接種環(huán)挑取使周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)藍色暈圈的單菌落，進行分離純化即為初篩菌株。接種初篩菌株至LB 培養(yǎng)基，在 30 、 160 r/min條件下進行液體培養(yǎng) 24 h 后，以 10% 的接種量接種到反硝化培養(yǎng)基 (DM 培養(yǎng)基 )中， 30 、 160 r/min條件下進行搖瓶發(fā)酵，間隔一定時間取

5、樣。測定發(fā)酵液中硝基氮濃度(NO-3-N)和亞硝基氮濃度 (NO-2-N) ，通過分析其 NO3-N和TIN(NO-N+NO-2 -N)去除率，考察所篩菌株的反硝化性能。 NO-3 -N：用紫外分光光度法測定；NO-2 -N：用 N-(1- 萘基 )-乙二胺分光光度法測定 4 。菌體量：光密度法，用721 型分光光度計在 600nm 處測定吸光度值。微量元素溶液 :EDTA(乙二胺四乙酸) 50.0 g ,ZnSO 4 2.2 g , CaCl 2 5.5 g , MnCl2· 4H2O 5.06 g , FeSO42 / 3·7H 2 O 5.0 g , CuSO 4 · 5H2O .157 g , CoCl 2