實驗二顯微鏡油鏡的使用及細菌的簡單染色法ppt課件

1、實驗二 顯微鏡油鏡的運用及 細菌的簡單染色法 一、實驗?zāi)康模阂?、實驗?zāi)康模?.學習并掌握普通光學顯微鏡油鏡的運用技術(shù)；2.學習微生物制片、染色的根本技術(shù)，掌握細菌的 簡單染色法及無菌操作技術(shù)； 3.察看細菌的根本形狀。 二、實驗原理：二、實驗原理：1、染色原理：用于生物染色的染料主要有堿性染料、染色原理：用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性酸性 染料和中性染料三大類。堿性染料的離子帶正電染料和中性染料三大類。堿性染料的離子帶正電荷，能和荷，能和 帶負電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細菌蛋白質(zhì)等電點較低，帶負電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細菌蛋白質(zhì)等電點較低，當它生當它生 長于中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負電荷，長

2、于中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負電荷，所以通所以通 常采用堿性染料如美藍、結(jié)晶紫、堿性復紅或常采用堿性染料如美藍、結(jié)晶紫、堿性復紅或孔雀綠孔雀綠 等使其著色。酸性染料的離子帶負電荷，能與等使其著色。酸性染料的離子帶負電荷，能與帶正電荷帶正電荷 的物質(zhì)結(jié)合。當細菌分解糖類產(chǎn)酸使培育基的物質(zhì)結(jié)合。當細菌分解糖類產(chǎn)酸使培育基pH下下降時，細降時，細 菌所帶正電荷添加，因此易被伊紅、酸性復紅或菌所帶正電荷添加，因此易被伊紅、酸性復紅或剛果紅等剛果紅等 酸性染料著色。中性染料是前兩者的結(jié)合物又稱酸性染料著色。中性染料是前兩者的結(jié)合物又稱復合染復合染 料，如伊紅美藍、伊紅天青等。料，如伊紅美藍、伊紅天

3、青等。簡單染色法簡單染色法:是只用一種染料使細菌著色以是只用一種染料使細菌著色以 顯示其形狀的染色法，簡單染顯示其形狀的染色法，簡單染 色不能區(qū)分細菌細胞的構(gòu)造。色不能區(qū)分細菌細胞的構(gòu)造。2、顯微鏡油鏡任務(wù)原理：、顯微鏡油鏡任務(wù)原理： 利用油鏡不但能添加照明度，更主要是能添加數(shù)值口 徑，由于顯微鏡的放大效能是由其數(shù)值口徑?jīng)Q議的。所 謂數(shù)值口徑，即光線投射到物鏡上的最大角度稱為鏡 口角的一半正弦，乘上玻片與物鏡間介質(zhì)的折射率所 得的乘積，可用以下公式表示： NA=nsin NA:數(shù)值孔徑 n:介質(zhì)折射率 ：鏡口角的半數(shù) 顯微鏡的分辨率是指顯微鏡可以區(qū)分顯微鏡的分辨率是指顯微鏡可以區(qū)分兩點之間最小

4、間隔的才干。它與接物鏡的兩點之間最小間隔的才干。它與接物鏡的數(shù)值口徑成正比，與光波長度成反比，因數(shù)值口徑成正比，與光波長度成反比，因此接物鏡的數(shù)值口徑愈大，光波波長愈短，此接物鏡的數(shù)值口徑愈大，光波波長愈短，那么顯微鏡的分辨力愈大，被檢物體的細那么顯微鏡的分辨力愈大，被檢物體的細微構(gòu)造也愈能明顯地域別出來。微構(gòu)造也愈能明顯地域別出來。 能區(qū)分兩點之間最小間隔能區(qū)分兩點之間最小間隔= 1/2= 1/2光波長光波長度度數(shù)值口徑數(shù)值口徑 = 1/2 = 1/2NA NA 三三 、實驗器材、實驗器材1、活資料：、活資料： 培育培育18-24h的金黃色葡萄球菌的金黃色葡萄球菌(S.aureus) 和枯草

5、芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌B.subtilis。2、染色液和試劑：、染色液和試劑： 復紅、美蘭、二甲苯、香柏油。復紅、美蘭、二甲苯、香柏油。3、器材：、器材： 載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。四、實驗步驟：四、實驗步驟：1、涂片： 取干凈載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴蒸餾水，按無菌操作法取菌涂片，左邊涂金黃色葡萄球菌，右邊涂芽孢桿菌，做成薄的涂面，留意取菌不要太多。 整個過程中要留意無菌操作。示范無菌操作技術(shù) 2、枯燥：讓涂片自然晾干或者在酒精燈火焰上方文 火烘干。 3、固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上， 經(jīng)過火焰 2-3次固定以不燙手為宜。4、

6、染色：將固定過的涂片加復紅或美蘭染色、染色：將固定過的涂片加復紅或美蘭染色1-2min。5、水洗：用水洗去涂片上的染色液。、水洗：用水洗去涂片上的染色液。6、枯燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。、枯燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。7、鏡檢：先低倍察看，再高倍察看，并找出適當?shù)囊曇啊㈢R檢：先低倍察看，再高倍察看，并找出適當?shù)囊曇?后，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將后，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將 油鏡頭浸入油滴中仔細調(diào)焦察看細菌的形狀。油鏡頭浸入油滴中仔細調(diào)焦察看細菌的形狀。8、繪圖：、繪圖：9、實驗終了后的處置：、實驗終了后的處置：將浸過油的鏡頭按下

7、述方法擦拭干凈：將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈： a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。 b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦23次。次。 c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦23次。留意擦鏡頭時向一個次。留意擦鏡頭時向一個 方向擦拭。方向擦拭?？春蟮娜旧Ｆ脧U紙將香柏油擦干凈，再用洗衣粉清洗?？春蟮娜旧Ｆ脧U紙將香柏油擦干凈，再用洗衣粉清洗。五、結(jié)果與思索題五、結(jié)果與思索題1、油鏡與普通物鏡在運用方法上有何不同？應(yīng) 留意些什么？ 2、按比例繪出他所察看到的細菌的形狀，并顯 示兩菌的陳列方式。六、本卷須知六、本卷須知1、油

8、浸物鏡的任務(wù)間隔指物鏡前透鏡的外表到被檢物體、油浸物鏡的任務(wù)間隔指物鏡前透鏡的外表到被檢物體 之間的間隔很短，普通在之間的間隔很短，普通在0.2mm以內(nèi)，再加上普通以內(nèi)，再加上普通 光學顯微鏡的油浸物鏡沒有光學顯微鏡的油浸物鏡沒有“彈簧安裝，因此運用油浸物彈簧安裝，因此運用油浸物 鏡時要特別細心，防止由于鏡時要特別細心，防止由于“調(diào)焦不慎而壓碎標本片并使調(diào)焦不慎而壓碎標本片并使 物鏡受損。物鏡受損。2、染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上、染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上 的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。實驗報告的撰寫要求實驗報告的撰寫要求 實驗報告必需以實事求是、嚴肅仔細的科學態(tài)度，按照指實驗報告必需以實事求是、嚴肅仔細的科學態(tài)度，按照指導書的要求按時完成。實驗報告應(yīng)該簡明扼要、表達準確、數(shù)導書的要求按時完成。實驗報告應(yīng)該簡明扼要、表達準確、數(shù)據(jù)完好、繪圖明晰且寫實，應(yīng)有討論、有分析，結(jié)論明確。一據(jù)完好、繪圖明晰且寫實，應(yīng)有討論、有分析，結(jié)論明確。一般應(yīng)包括以下一些內(nèi)容：般應(yīng)包括以下一些內(nèi)容： 1 實驗工程稱號；實驗工程稱號； 2 實驗?zāi)康?；實驗?zāi)康模?3 實驗原理；實驗原理；4. 實驗資料；實驗資料； 5 實驗步驟；實驗