大豆皂苷對(duì)D—半乳糖胺和內(nèi)毒素所致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用

1、大豆皂昔對(duì)d半乳糖胺和內(nèi)毒素所致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用摘要目的：研究大豆皂昔對(duì)d-半乳糖胺（galn） 及內(nèi)毒素（lps）聯(lián)合誘發(fā)的急性肝損傷的保護(hù)作用。方法: 將實(shí)驗(yàn)小鼠按體重隨機(jī)分為5組，即正常組、模型組、陽(yáng)性 對(duì)照水飛薊素組（0.10 mmol kg-1）及大豆皂昔高、低劑 量組（0.24, 0. 12 mmolkg-l）o每日給藥1次，連續(xù)7 d0 實(shí)驗(yàn)?zāi)┢?，除正常組外，其余組小鼠腹腔注射galn和lps 建立急性肝損傷模型，蘇木素-伊紅（he）染色法觀察肝組 織病理學(xué)變化，elisa法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-a（tnf-a ）,比色法檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alt）、谷草轉(zhuǎn)氨 酶（ast）

2、以及肝臟過氧化氫酶（cat）、谷胱甘肽過氧化物 酶（gpx）、谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶（gst）活性及還原型谷胱甘 肽（gsh）、丙二醛（mda）和一氧化氮（no）含量和caspase-3, caspase-8活化水平。結(jié)果：大豆皂昔明顯降低galn和lps 聯(lián)合誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠血清alt, ast活性，減輕肝組 織病理?yè)p傷，降低血清tnf-a水平，降低肝n0和mda水平, 升高肝組織cat, gpx, gst活性和gsh水平，降低肝組織 caspase-3和caspase-8活化水平。結(jié)論：大豆皂昔對(duì)galn 和lps聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可 能與其抗氧化活性和抗肝細(xì)胞

3、凋亡作用有關(guān)。關(guān)鍵詞大豆皂昔；肝損傷；抗氧化；凋亡流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)，常食大豆有助于預(yù)防癌癥和心血管 疾病的發(fā)生，而這些均與大豆中的異黃酮和皂昔等活性物質(zhì) 密切相關(guān)。大豆皂昔是存在于大豆中的一類五環(huán)三菇的糖 昔，主要分為a類、b類、e類和ddmp皂昔1。具有抗氧 化、抗癌、防治心血管疾病及免疫增強(qiáng)等多種藥理作用 2-3 o研究還表明，大豆皂昔對(duì)酒精性肝損傷以及半刀豆 球蛋白a所致免疫性肝損傷具有保護(hù)作用4-5 o本實(shí)驗(yàn)通 過建立d-半乳糖胺（galn）及內(nèi)毒素（lps）聯(lián)合誘導(dǎo)的小 鼠急性肝損傷模型，觀察大豆皂昔對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù) 作用，為大豆皂昔的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。1材料1. 1動(dòng)物昆

4、明小鼠，雄性，體重1822 g,由延邊大 學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2藥物和試劑大豆皂昔（純度280%）購(gòu)于華北制藥 股份有限公司；galn及l(fā)ps購(gòu)于sigma公司；水飛薊素購(gòu)于 沈陽(yáng)東陵藥業(yè)股份有限公司；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alt）、谷草轉(zhuǎn)氨 酶（ast）、過氧化氫酶（cat）、谷胱甘肽過氧化物酶（gpx）、 谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶（gst）、還原型谷胱甘肽（gsh）、丙二 醛（mda）、一氧化氮（n0）及蛋白試劑盒購(gòu)于南京建成科技 有限公司；tnf-a elisa試劑盒購(gòu)于武漢博士德公司。1. 3儀器3-30k型離心機(jī)（德國(guó)sigma公司）；s22pc 型分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；rt

5、-2100型酶 標(biāo)儀（深圳雷杜公司）；zmn-7803型組織包埋機(jī)（常州市華 利電子有限責(zé)任公司）；rm2126型切片機(jī)（上海探卡儀器有 限公司）；ba200型生物顯微鏡（中國(guó)麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限 公司）。2方法2. 1動(dòng)物分組及處理將50只小鼠按體重隨機(jī)分為5 組，即正常組、模型組、水飛薊素組（0.10 nnnolkg-l）、 大豆皂昔高、低劑量組（0.24, 0. 12 mmol kg-l）0每日灌 胃給藥1次，連續(xù)7d,正常組及模型組小鼠則以等體積生 理鹽水灌胃。末次給藥1 h后，除正常組腹腔注射無(wú)菌生理 鹽水外，其余各組小鼠腹腔注射給予2. 26 mmol kg-1 galn 和10

6、pgkg-1 lps （用無(wú)菌生理鹽水配制）。造模期間禁 食，不禁水。2.2血清轉(zhuǎn)氨酶及tnf-a水平的檢測(cè) 造模1. 5 h后， 分離血清，檢測(cè)小鼠血清tnf-a。造模8 h后，分離血清， 檢測(cè)小鼠血清alt, ast活性，并按公式計(jì)算藥物對(duì)tnf-a 及轉(zhuǎn)氨酶活性的抑制率。抑制率二（模型組-治療組）/（模型組-正常組）x100%2.3肝組織病理學(xué)檢查造模8 h后處死動(dòng)物，取小鼠 肝左葉，固定于10%福爾馬林溶液中，常規(guī)石蠟包埋、切片、 he染色，在光鏡下觀察肝組織病理學(xué)變化。2.4肝組織氧化應(yīng)激、抗氧化活力及凋亡相關(guān)指標(biāo)的檢 測(cè)4 °c裂解肝細(xì)胞，離心取上清。按照各測(cè)試盒操作方法

7、 測(cè)定 cat, gpx, gst, gsh, mda, no 水平以及肝細(xì)胞 caspase-3 和caspase-8活性的相對(duì)活化程度。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以±s表示，組間均數(shù)比較采用 spss 11.5統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行單因素方差分析和turkey? s多 因素t檢驗(yàn)。3結(jié)果3. 1大豆皂昔對(duì)急性肝損傷小鼠血清alt和ast活性的 影響與正常組比較，模型組小鼠血清alt和ast活性明顯 升高(p 3.3大豆皂昔對(duì)急性肝損傷小鼠血清tnf-a 以及肝no水平的影響與正常組比較，模型組小鼠血清 tnf-a和肝no水平明顯升高(p 7鄧秀蘭，鐘相根, 張曉晶，等.痰熱清注射液對(duì)小鼠免疫

8、性肝損傷的防護(hù)作用 j.中國(guó)中藥雜志，2011,36 (5)： 636.8 郭宏興，劉亮明，張吉翔，等.大鼠內(nèi)毒素性急性肝損傷后肝細(xì)胞凋亡與炎性因子的表達(dá)j.中華傳染病雜 志，2008,26 (7)： 415.9 周燕，翟羽佳，何蓉蓉，等.荊條子乙醇提取物對(duì)小鼠免疫性肝炎及急性炎癥的影響j.中國(guó)中藥雜志， 2011,36 (17)： 2404.10 宋軍，趙軍寧，王曉東，等.芍甘多昔對(duì)四氯化碳亞急性肝損傷大鼠肝細(xì)胞線粒體保護(hù)作用j中國(guó)中藥 雜志，2011,36 (7)： 931.11 liu d, li c, chen y, et al. nuclear import of proinflam

9、matory transcription factors is required for massive liver apoptosis induced by bacterial lipopolysaccharide j. j biol chem, 2004, 279： 48434.12 樸龍，楊振凱，楊陽(yáng)，等.草灰蓉環(huán)烯瞇菇對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)d-半乳糖胺致敏小鼠肝細(xì)胞凋亡的影響j.前沿 科學(xué)，2011,5 (2)： 11.protective effect of soyasaponins on acute liver injury induced byd-galactosamine and lip

10、opolysaccharide in micexu hui-xianl, zhao wen-xi2, quan ji-shu2, yin xue-zhel*(1. affiliated hospital of yanbian university, yanji 133000, china； 2. medical college of yanbian university， yanji 133002, china)abstract objective :to investigate theprotective effect of soyasaponins on acute liver injur

11、y induced by d-galactosamine ( galn ) and lipopolysaccharide (lps) in mice method： the mice were randomly divided into five groups: the normalcontrol, the model group, the silymarin (positive control) group, and soyasaponins high and low-dose groups. they were administered with drugs once every day

12、for 7 days at the end of the experiment, galn and lps were injected intraperitoneally to all of the groups except for the normal group to establish the acute liver injury mode 1. the pathological changes were detected with hematoxylin & eosin (he) staining, tumor necrosis factor- a (tnf- a ) was

13、 detected by elisa method, and the alanine aminotransferase (alt), aspartate aminotransferase (ast), catalase (cat), glutathione peroxidase ( gpx ) ,gluta/thiones-transferase (gst), reduced glutathione (gsh), malondialdehyde (mda), nitric oxide (no), and the activation of caspase3 and caspase-8 were

14、 detected by the colorimetric method result： soyasaponins could reduce the activities of serum alt and ast, the acute hepatic injury induced by galn/lps , serum tnf- a level, hepatic no and mda contents, and the caspase-3 and caspase-8 activations of liver tissues , and increase the hepatic cat, gpx, gst and gsh levels conclusion： soyasaponins shows the protective effect on a