水牛角清涼茶中水牛角水解工藝優(yōu)化研究

1、    水牛角清涼茶中水牛角水解工藝優(yōu)化研究    劉臣摘要 目的選優(yōu)水牛角清涼茶中水牛角的水解工藝。方法以提取物中總氮含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)，以酸水濃度、酸水用量及水解時(shí)間為因素，優(yōu)選最佳水解條件，同時(shí)對(duì)酸堿水解的優(yōu)選、醇沉濃度及水洗倍數(shù)等參數(shù)進(jìn)行了篩選。結(jié)果最佳工藝確定為8倍量4 mol/l濃度的硫酸水解10 h，濃縮至相對(duì)密度為1.101.15（50 ）的浸膏，60%乙醇醇沉，4倍量水水洗，最后配制成均一穩(wěn)定的水牛角清涼茶。結(jié)論優(yōu)選的水解工藝提取的氨基酸含量較高，工藝穩(wěn)定可行。關(guān)鍵詞 水牛角；正交試驗(yàn)；水解工藝；優(yōu)化；總氮含量r284.1 a

2、 1007-5739（2015）01-0290-02水牛角清涼茶由水牛角、金銀花等組成，主要用于緩解熱病神昏、咽喉腫痛、煩躁易怒等不適癥狀。主藥水牛角為?？苿?dòng)物水牛的雙角，富含膽甾醇及丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、亮氨酸、酪氨酸、絲氨酸、纈氨酸等人體必須的氨基酸營(yíng)養(yǎng)成分1，具有清熱2、涼血、解毒、鎮(zhèn)靜3的功效，主治熱病頭痛、壯熱神昏、斑疹、吐衄、小兒驚風(fēng)、喉痹咽腫等疾病4，本品咸寒，專入血分，善清心肝胃三經(jīng)之火而有涼血解毒之功，為治血熱毒盛之要藥。其清熱涼血解毒之功與犀角相似而藥力較緩，可作犀角的代用品。水牛角中氨基酸總量通常以凱式定氮法測(cè)定總氮含量計(jì)。本研究采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以總氮得率

3、為指標(biāo)，優(yōu)化水牛角的水解工藝條件，并對(duì)酸堿水解的優(yōu)選、醇沉濃度以及水洗倍數(shù)等參數(shù)進(jìn)行了篩選，從而確定了水牛角的最佳水解工藝。1 材料與方法1.1 藥品與儀器試驗(yàn)用水牛角飲片購(gòu)于哈爾濱市藥材公司中藥飲片廠。試驗(yàn)儀器：凱式定氮儀b-324k型（北京閱微堂科技發(fā)展有限公司）；al型梅特勒電子分析天平（瑞士）；yzg型真空干燥箱（天津隆業(yè)輕工機(jī)械有限公司）。試驗(yàn)用硫酸、氫氧化鋇等均為分析純。1.2 試驗(yàn)方法1.2.1 水牛角酸堿水解條件的對(duì)比試驗(yàn)。一般動(dòng)物藥的蛋白質(zhì)水解多采用酶解法5-6或酸堿水解工藝。本試驗(yàn)采用酸堿法，為了比較2種水解方法對(duì)水牛角中總氮提取率的影響，將水牛角分別以氫氧化鋇堿水解和硫酸

4、酸水解進(jìn)行比較試驗(yàn)。取1/2處方量的水牛角共6份，每3份為1個(gè)平行樣，按2種工藝進(jìn)行提取，用10倍體積量6 mol/l硫酸和10倍體積量6 mol/l氫氧化鋇，分別水解8 h。按中國(guó)藥典（2010年版附錄）用凱氏定氮法以總氮含量為指標(biāo)進(jìn)行比較。1.2.2 水牛角水解條件的優(yōu)化試驗(yàn)。選定了酸濃度、水解時(shí)間、加酸量3個(gè)因素進(jìn)行了正交方法考察。每個(gè)因素設(shè)定3個(gè)水平，水牛角各取處方量的1/2，以水解后總氮含量為考察指標(biāo)，進(jìn)行了l9（34）正交試驗(yàn)，其因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。1.2.3 水牛角水解液濃縮密度對(duì)比試驗(yàn)。水牛角按優(yōu)選工藝條件水解、濾過(guò)，濾液用10%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至4，濾過(guò)。取2倍處方量

5、的水牛角水解液平均分為8份，每2份為1個(gè)平行樣，分別濃縮至相對(duì)密度為1.05、1.10、1.15、1.20（50 ）的清膏，冷卻，各加乙醇至60%，靜置24 h，過(guò)濾，濃縮，分別在醇沉前后測(cè)定其總氮的含量。1.2.4 水牛角水解膏醇沉條件對(duì)比試驗(yàn)。水牛角按優(yōu)選工藝條件水解，取2倍處方量的水牛角水解液濃縮至相對(duì)密度為1.101.15（50 ）的清膏，冷卻，平均分為8份，每2份為1個(gè)平行樣，分別加乙醇至50%、60%、70%、80%，靜置24 h，過(guò)濾，回收乙醇至相對(duì)密度為1.101.15（50 ）的清膏。分別在醇沉前后測(cè)其總氮含量。1.2.5 水洗條件對(duì)水牛角水解膏中有效成分的影響試驗(yàn)。水牛角按

6、優(yōu)選工藝水解、濃縮、醇沉、回收乙醇，分別取2個(gè)處方量的水解濃縮膏平均分為8份，每2份為1個(gè)平行樣，混勻，攪拌下分別緩緩加入3、4、5、6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置24 h，濾取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.101.15（50 ）的清膏。分別測(cè)定固形物及總氮的含量7-9。2 結(jié)果與分析2.1 水牛角酸堿水解條件對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果水牛角酸堿水解條件對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，酸水解工藝所得總氮含量明顯比堿水解工藝高，證明用硫酸水解水牛角比用堿水解更合理。2.2 水牛角水解條件優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果l9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可以看出，影響因素最大的是a因素和b因素，c因素影響較少，在a因素中a3a2>

7、;a1，在b因素中b3>b2>b1，在c因素中c3c2>c1。綜合考慮，并結(jié)合能源消耗情況，優(yōu)選水解工藝確定為a2b3c2，即酸濃度為4 mol/l，加8倍量酸，水解10 h。方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。以此優(yōu)選工藝進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果平均含氮量為15 032 mg，rsd=1.5%，證明該工藝可行。2.3 水牛角水解液濃縮密度對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果水牛角水解液濃縮密度對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。從表5可以看出，相對(duì)密度太小時(shí)，醇沉效果不好，可能由于所消耗的乙醇量過(guò)大；相對(duì)密度太大時(shí)，醇沉后總氮含量有所下降，可能是由于濃度太高，所形成的沉淀對(duì)有效成分包裹所致。故相對(duì)密度定為1.101.15（50 ）較為合適

8、。2.4 不同水牛角水解膏醇沉條件對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果不同水牛角水解膏醇沉條件對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。從表6可以看出，若醇沉濃度過(guò)低，則效果不好，雜質(zhì)較多，總氮含量隨著醇沉濃度的增加下降較快，故醇沉濃度定為60%較合適。2.5 水洗條件對(duì)水牛角水解膏中有效成分的影響水洗條件對(duì)水牛角水解膏中有效成分的影響結(jié)果見(jiàn)表7。從表7可以看出，4倍量水洗比3倍量水洗固形物有明顯的減少，且4、5、6倍量水洗倍數(shù)對(duì)固形物的影響差別不大，水洗的倍數(shù)均對(duì)有效成分影響不大，故選定水洗倍數(shù)為4倍。3 結(jié)論與討論以水牛角的有效成分總氨基酸為指標(biāo)，對(duì)水牛角清涼茶中水牛角的提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，其中包括酸堿水解條件的比較、酸水解的最佳條

9、件、醇沉濃度及水洗倍數(shù)等，最終確定最佳工藝為用8倍量4 mol/l濃度的硫酸水解10 h，濃縮至相對(duì)密度為1.101.15（50 ）的浸膏，60%乙醇醇沉，4倍量水水洗，最后配制成均一穩(wěn)定的水牛角清涼茶。經(jīng)工藝驗(yàn)證，成品含量均在28.5 mg/ml以上，經(jīng)6個(gè)月穩(wěn)定性試驗(yàn)考察結(jié)果證明，確定該工藝是可行的。4 參考文獻(xiàn)1 鄧愍民，李進(jìn)進(jìn)，武卉.微波輔助提取水牛角的工藝研究j.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2007，10（5）：80-81.2 劉睿，段金廒，李友濱，等.水牛角主要藥效學(xué)評(píng)價(jià)及解熱活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究j.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23（5）：297-301.3 陳赤.水牛角的研究與作用j.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，7（4）：72-73.4 郭云協(xié).水牛角臨床應(yīng)用舉隅j.新中醫(yī)，2008，40（6）：93.5 劉天舒.水牛角水提工藝的研究j.湖南中醫(yī)雜志，2005，21（2）：77-78.6 李寶國(guó)，杜雪，張孝衛(wèi).正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選水牛角酶解的提取工藝研究j.中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2009，16（14）：24-25.7 尚強(qiáng)，劉巖，吳建雄，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選水牛角水解工藝j.中國(guó)中藥