核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)及工作流

1、編輯ppt核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)及工作流程及工作流程李金明 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心編輯ppt核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)l依據(jù)：衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號(hào)）編輯ppt血液標(biāo)本的接收血液標(biāo)本的接收 l通常的工作流程：標(biāo)本采集 血清分離 編號(hào) 保存或檢測(cè)l應(yīng)在四個(gè)測(cè)定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接收 l接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中l(wèi)在核酸提取時(shí)帶入至標(biāo)本制備區(qū)編輯ppt標(biāo)本的接收區(qū)的儀器設(shè)備要求標(biāo)本的接收區(qū)的儀器設(shè)備要求l如果在標(biāo)本接收區(qū)分離血清（漿）標(biāo)本，有1臺(tái)分離血清（漿）用離心機(jī)、1臺(tái)生物安全柜、1臺(tái)冰箱、加樣器及相應(yīng)

2、一次性經(jīng)高壓處理的消耗品如帶濾芯吸頭、標(biāo)本接收編號(hào)記錄本以及記號(hào)筆等即可。l如果不在標(biāo)本接收區(qū)分離血清（漿）標(biāo)本，只是簡(jiǎn)單的接收，則就不需要分離血清（漿）用離心機(jī)、生物安全柜、加樣器及其消耗品。編輯ppt理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)A產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間專(zhuān)用走廊專(zhuān)用走廊工作流向工作流向擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)編輯ppt產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間專(zhuān)用走廊專(zhuān)用

3、走廊工作流向工作流向擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)B編輯ppt核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則l各區(qū)獨(dú)立l注意風(fēng)向l因地制宜l方便工作“十六字口訣十六字口訣”編輯ppt門(mén)門(mén)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)外走廊外走廊門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò) 增 及 產(chǎn) 物擴(kuò) 增 及 產(chǎn) 物分析區(qū)分析區(qū)外走廊外走廊門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)AB編輯ppt試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)

4、門(mén)門(mén)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向編輯ppt走廊走廊走廊走廊試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室編輯ppt門(mén)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)門(mén)門(mén)門(mén)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向+空氣流向空氣流向+走廊走廊試 劑 準(zhǔn) 備試 劑 準(zhǔn) 備區(qū)區(qū)標(biāo) 本 制 備標(biāo) 本 制 備區(qū)區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)空氣

5、流向空氣流向+空氣流向+其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室空氣流向編輯ppt產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間專(zhuān)用走廊專(zhuān)用走廊工作流向工作流向擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)傳遞窗傳遞窗傳遞窗編輯ppt關(guān)于關(guān)于“區(qū)域區(qū)域”合并合并l如使用擴(kuò)增和產(chǎn)物分析同時(shí)完成的實(shí)時(shí)熒光PCR儀進(jìn)行核酸擴(kuò)增檢測(cè)，擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可以合并。l如使用核酸提取、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析等均在一臺(tái)儀器上完成的全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析儀，標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可合并。編輯ppt無(wú)無(wú)“基因

6、基因”或或“核酸核酸”概念的重要性概念的重要性編輯ppt符合基本要求的核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的條件符合基本要求的核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的條件l（1）試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)和擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等三個(gè)或四個(gè)區(qū)域在物理空間上，必須是完全相互獨(dú)立的，各區(qū)域無(wú)論是在空間還是在使用中，應(yīng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。l（2）各區(qū)的可移動(dòng)的儀器設(shè)備及各種物品包括實(shí)驗(yàn)記錄本、記號(hào)筆、試管架及清潔用具等必須專(zhuān)用。l（3）應(yīng)在標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等相對(duì)有可能出現(xiàn)“污染物”的區(qū)域安裝排風(fēng)扇或其它排風(fēng)和有效的裝置，以使空氣按試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動(dòng)。編輯ppt核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的工作

7、流程核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的工作流程試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)擴(kuò)增區(qū)及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)編輯ppt試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)l核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室中最為“潔凈”的區(qū)域，不應(yīng)有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標(biāo)準(zhǔn)品和陽(yáng)性對(duì)照。l所有實(shí)驗(yàn)用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放和準(zhǔn)備處。l商品試劑盒： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）處理水、有機(jī)溶劑等可能需要自配l自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測(cè)時(shí)，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。l儀器設(shè)備主要有加樣器、天平、離心機(jī)和冰箱等，最好配備超凈工作臺(tái)。編輯ppt標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)l儀器設(shè)備主要有混樣設(shè)備、核酸提

8、取儀、生物安全柜、加樣器、高速臺(tái)式（冷凍）離心機(jī)、加熱模塊或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室門(mén)口等易受人員走動(dòng)影響的地方，也不應(yīng)直對(duì)分體式空調(diào)。l主要是用于血液樣本的混樣、核酸樣本的提取。l加樣器吸頭必須帶濾芯。l使用加熱模塊時(shí)，如在模塊孔中填入二氧化硅細(xì)砂，然后將標(biāo)本管置于細(xì)砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。編輯ppt擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)l擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和提取核酸的加入，可在標(biāo)本制備區(qū)也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行，關(guān)鍵是要防止產(chǎn)物的污染。如果空間允許的話，也可在一個(gè)獨(dú)立的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。l加樣時(shí)，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個(gè)即蓋好蓋子，然后加陽(yáng)性質(zhì)控核酸模板，再就是標(biāo)本制備陰性質(zhì)控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應(yīng)混合液的擴(kuò)增陰性質(zhì)控，這樣做的