最新主管檢驗(yàn)技師考試臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液學(xué)檢驗(yàn)講義第4章血細(xì)胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用

1、血細(xì)胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用要點(diǎn) 1：過(guò)氧化酶染色（POX）（ 1）原理血細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化酶分解 H2O2，釋出初生態(tài)氧， 使無(wú)色聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)色聯(lián)苯胺， 后者進(jìn)一步變成棕黑色化合物，沉著于胞質(zhì)內(nèi)。（ 2）結(jié)果判斷陽(yáng)性結(jié)果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒。（），無(wú)顆粒。（±），顆粒細(xì)小、彌散分布。（），顆粒較粗、局灶分布。（），顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質(zhì)的1/2 2/3 。（），顆粒粗大、成團(tuán)塊，幾乎布滿(mǎn)胞質(zhì)。（），顆粒成團(tuán)塊狀，充滿(mǎn)胞質(zhì)，并覆蓋胞核。（ 3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：原始粒細(xì)胞大多呈陰性反應(yīng)，有的可出現(xiàn)少量藍(lán)黑色顆粒。 自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均呈陽(yáng)性反應(yīng)，隨細(xì)

2、胞的成熟，陽(yáng)性反應(yīng)的程度逐漸增強(qiáng)。 中性分葉核粒細(xì)胞為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)性反應(yīng)的程度最強(qiáng)，其陽(yáng)性顆粒比中性粒細(xì)胞粗大，有折光性，嗜堿性粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。2）單核細(xì)胞系統(tǒng)：原始單核細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性顆粒少而細(xì)小，彌散分布，有的也可呈陰性反應(yīng)。3）其他細(xì)胞： 淋巴細(xì)胞 、巨核細(xì)胞、血小板、幼紅細(xì)胞、漿細(xì)胞和組織細(xì)胞均呈陰性反應(yīng) 。有的吞噬細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)。過(guò)氧化酶染色（POX）模式圖（ 4）臨床意義1）幫助鑒別急性白血病的類(lèi)型：急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始粒細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性顆粒一般較多，較粗大，常呈局限性分布； 急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)，原始淋巴細(xì)

3、胞和幼淋巴細(xì)胞均呈陰性反應(yīng) ；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始單核細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，有時(shí)雖少數(shù)可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，但陽(yáng)性顆粒少而細(xì)小，常彌散分布。小型原始粒細(xì)胞和原始淋巴細(xì)胞不易區(qū)別，如果小型原始細(xì)胞呈過(guò)氧化物酶陽(yáng)性反應(yīng)，可確定為小型原始粒細(xì)胞。急性早幼粒細(xì)胞白血病有時(shí)須與急性單核細(xì)胞白血病鑒別，如果白血病細(xì)胞呈過(guò)氧化物酶強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)確定為急性早幼粒細(xì)胞白血病。急性單核細(xì)胞白血病有時(shí)須與組織細(xì)胞白血病或惡性組織細(xì)胞病鑒別，異常組織細(xì)胞的過(guò)氧化物酶呈陰性反應(yīng)，而白血病性幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。2）成熟中性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶活性的變化：活性增高：可見(jiàn)于再生障礙性貧血、感染（特別是化膿菌感染）

4、、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病。活性減低：可見(jiàn)于急性粒細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、骨髓增生異常綜合征、放射病及退化性中性粒細(xì)胞。過(guò)碘酸 - 雪夫反應(yīng)（糖原染色、PAS）（ 1）原理過(guò)碘酸是氧化劑，使含乙二醇的多糖類(lèi)物質(zhì)氧化，形成雙醛基。醛基與雪夫試劑中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，附著在含有多糖類(lèi)的胞質(zhì)中。紅色的深淺與細(xì)胞內(nèi)能反應(yīng)的乙二醇基的量成正比。（ 2）結(jié)果判斷陽(yáng)性結(jié)果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色顆粒、塊狀或呈彌漫狀紅色。（），胞質(zhì)無(wú)色，無(wú)顆粒。（），胞質(zhì)淡紅色或有少量紅色顆粒，通常 10 個(gè)顆粒。 （） ，胞質(zhì)紅色或有 10 個(gè)以上紅色顆粒。 （），胞質(zhì)呈暗紅色

5、或有粗大紅色顆粒，可出現(xiàn)紅色塊狀。（），胞質(zhì)呈紫紅色或有粗大紅色塊狀。過(guò)碘酸 - 雪夫反應(yīng)（糖原染色、PAS）模式圖（ 3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1）粒細(xì)胞系統(tǒng)： 原始粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)；自早幼粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽(yáng)性反應(yīng)，并隨細(xì)胞的成熟，陽(yáng)性反應(yīng)的程度逐漸增強(qiáng) ；嗜酸性粒細(xì)胞的顆粒本身不著色，而顆粒之間的胞漿呈紅色；嗜堿性粒細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為大小不一的紫紅色顆粒。2）紅細(xì)胞系統(tǒng)：幼紅細(xì)胞和紅細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。3）單核細(xì)胞系統(tǒng)： 原始單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞為 （）陽(yáng)性反應(yīng)， 單核細(xì)胞為 （）（）陽(yáng)性反應(yīng)。有時(shí)在胞質(zhì)的邊緣處陽(yáng)性反應(yīng)顆粒較粗大。4）淋巴細(xì)胞：大多數(shù)淋巴細(xì)胞

6、為陰性反應(yīng)，少數(shù)淋巴細(xì)胞可呈（）陽(yáng)性反應(yīng)。5）巨核細(xì)胞和血小板：巨核細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色顆粒狀，有時(shí)為紅色塊狀。血小板為陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為細(xì)顆粒狀，有時(shí)為紅色小塊狀。6）其他細(xì)胞：漿細(xì)胞一般為陰性反應(yīng)，少數(shù)可呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)胞顆粒狀。巨噬細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)顆粒狀。（ 4）臨床意義1）紅細(xì)胞系統(tǒng)：紅血病或紅白血病時(shí)幼紅細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，有時(shí)陽(yáng)性反應(yīng)幼紅細(xì)胞的百分比增高，陽(yáng)性反應(yīng)的程度也很強(qiáng)，有時(shí)紅細(xì)胞也呈陽(yáng)性反應(yīng)。缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血（又稱(chēng)地中海貧血）以及骨髓增生異常綜合征時(shí)幼紅細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，有時(shí)陽(yáng)性反應(yīng)幼紅細(xì)胞的百分比也較

7、高。有時(shí)紅細(xì)胞也可呈陽(yáng)性反應(yīng)。巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和白血病等疾病時(shí)，幼紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)，有時(shí)僅個(gè)別幼紅細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)。2）白細(xì)胞系統(tǒng)：急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)白血病性原始淋巴細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色粗顆粒狀或紅色塊狀，底色不紅；急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始粒細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈均勻分布的紅色細(xì)顆粒狀或呈均勻紅色；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始單核細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈紅色細(xì)顆粒狀，彌散分布，有時(shí)在胞漿的邊緣處顆粒較粗大。3）其他細(xì)胞：幫助鑒別不典型巨核細(xì)胞和霍奇金細(xì)胞或Reed-Sternberg細(xì)胞，前者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，后者呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。幫助鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-

8、匹克細(xì)胞， 前者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，后者是弱陽(yáng)性反應(yīng)，且空泡中心為陰性反應(yīng)。幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺癌骨髓轉(zhuǎn)移的腺癌細(xì)胞，后者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)顆粒狀或粗顆粒狀，有時(shí)呈紅色塊狀。要點(diǎn) 2：堿性磷酸酶染色（NAP）（ 1）原理（偶氮偶聯(lián)法）血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶在pH9.4 9.6 的條件下將基質(zhì)液中的 - 磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生 - 萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之處。（ 2）結(jié)果判斷陽(yáng)性結(jié)果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)灰褐色至深黑色顆粒狀或片狀沉淀（），灰褐色沉淀，為0 分。（），胞質(zhì)出現(xiàn)灰褐色沉淀，為1 分。（），胞質(zhì)深褐色沉淀，為2 分。（），胞質(zhì)中已基本充滿(mǎn)棕黑色顆粒狀沉淀

9、，但密度較低，為3 分。（），胞質(zhì)全被深黑色團(tuán)塊沉淀所充滿(mǎn)，密度高，甚至遮蓋胞核，為4 分。堿性磷酸酶染色（NAP）模式圖（ 3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1）堿性磷酸酶主要存在于成熟中性粒細(xì)胞，除巨噬細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)外，其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。2）成熟中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）積分值的計(jì)算：在油鏡下，計(jì)數(shù)100 個(gè)成熟中性粒細(xì)胞（包括中性分葉核粒細(xì)胞和中性桿狀核粒細(xì)胞）。分別記錄其分級(jí)情況，全部陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞之和即為陽(yáng)性率，將所有陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞均以“”級(jí)表示后，計(jì)算其總積分值。例：某患者計(jì)數(shù)100 個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，其結(jié)果如下表：反應(yīng)程度個(gè)數(shù)（個(gè)）積分（分）1002020408020601040

10、100200陽(yáng)性率為90%，積分值為 200（ 4）參考值： 成熟中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶 （ NAP）的積分值為 30 130。由于各實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)條件不同，正常值也有差異，應(yīng)建立本實(shí)驗(yàn)室的正常值。這里的正常值僅供參考。（ 5）臨床意義1）生理變化：年齡變化：新生兒NAP活性增高，以后下降。兒童期各年齡大致相似，成年期較兒童期活性減低，老年期更低。應(yīng)激狀態(tài)下的變化：緊張、恐懼、激烈運(yùn)動(dòng)等NAP活性可增高。月經(jīng)周期中的變化：經(jīng)前期增高，行經(jīng)后降低，經(jīng)后期恢復(fù)。妊娠期的變化：妊娠2 3 個(gè)月的 NAP積分值輕度增高，以后逐月增高，分娩時(shí)達(dá)高峰，產(chǎn)后則恢復(fù)正常。2）病理性變化：感染： 細(xì)菌性感染時(shí)NAP

11、積分值增高。在細(xì)菌性感染中球菌性感染較桿菌性感染為高；在球菌性感染中，急性較慢性為高。病毒性感染時(shí)，NAP積分值一般無(wú)明顯變化。因此本染色法有時(shí)可幫助鑒別細(xì)菌性感染和病毒性感染。血液?。?慢性粒細(xì)胞白血病的NAP積分值明顯減低，常為“0”，緩解時(shí) NAP積分值上升到正常。類(lèi)白血病反應(yīng)時(shí)的NAP積分值明顯增高，中性桿狀核粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性增強(qiáng)，甚至中性晚幼粒細(xì)胞也呈陽(yáng)性反應(yīng)。 因此本法常用來(lái)鑒別慢粒和類(lèi)白血病反應(yīng)及觀(guān)察慢粒療效的指標(biāo)之一。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)NAP積分值減低，急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)NAP積分值一般增高，因此本法可作為鑒別急粒和急淋的方法之一；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)NAP積分值一般減

12、低，有時(shí)可正常；粒細(xì)胞白血病合并細(xì)菌性感染時(shí)NAP積分值可增高，但不如單純細(xì)菌性感染增高的明顯；再生障礙性貧血的NAP積分值增高，當(dāng)病情好轉(zhuǎn)時(shí)，NAP積分值可下降，完全緩解時(shí)NAP活性可恢復(fù)到正常，因此本法對(duì)再障的診斷、療效觀(guān)察和估計(jì)病情均有一定意義。陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的NAP積分值減低，因此本法可作為鑒別陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿和再生障礙性貧血的方法之一；紅細(xì)胞增多癥的NAP積分值升高，而繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥的NAP積分值無(wú)明顯變化。因此本法可用來(lái)鑒別真性紅細(xì)胞增多癥和繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥；骨髓增生異常綜合征的NAP積分值減低。其他：紅白血病的NAP積分值減低，慢性淋巴細(xì)胞白血病、骨髓纖維化、

13、原發(fā)性血小板增多癥和紅血病等疾病的NAP積分值可增高；NAP積分值減低，也可見(jiàn)于鐮形細(xì)胞性貧血、嚴(yán)重嗜酸粒細(xì)胞增多癥、家族性低磷酸酶血癥。3）其他：應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素、雌激素和ACTH后 NAP積分值增高。要點(diǎn)3：酯酶染色酯酶存在于不同的白細(xì)胞中，根據(jù)不同的底物顯示酶的活性，可將酯酶分成三種，包括萘酚-AS-D氯乙酸酯酶、 - 乙酸萘酚酯酶和 - 丁酸萘酚酯酶。萘酚 -AS-D氯乙酸酯酶為粒系細(xì)胞所特有，又稱(chēng)特異性酯酶染色。 - 乙酸萘酚酯酶可存在于多種細(xì)胞，故又稱(chēng)非特異性酯酶染色。- 丁酸萘酚酯酶主要存在于單核系細(xì)胞中，又稱(chēng)單核細(xì)胞酯酶。三種酯酶染色對(duì)不同細(xì)胞的識(shí)別和急性白血病的診斷與鑒別有

14、一定意義。氯乙酸 AS-D 萘酚酯酶染色（AS-D-NCE）（ 1）原理血細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸AS-D 萘酚酯酶將基質(zhì)液中的氯乙酸AS-D 萘酚水解，產(chǎn)生萘酚AS-D，進(jìn)而與基質(zhì)液中的堅(jiān)牢藍(lán)GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。屬于特異性酯酶染色。（ 2）結(jié)果判斷陽(yáng)性結(jié)果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色沉淀：（）胞質(zhì)無(wú)色。（）胞質(zhì)呈淡紅色。（）鮮紅色沉淀布滿(mǎn)胞質(zhì)。（）深紅色沉淀充滿(mǎn)胞質(zhì)。（ 3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：原粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)或陽(yáng)性反應(yīng)，自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均為陽(yáng)性反應(yīng)，酶活性并不隨細(xì)胞的成熟而增強(qiáng)。嗜酸性粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)或弱陽(yáng)性反應(yīng)，嗜堿性粒細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)。2）其他血細(xì)胞單核

15、細(xì)胞為陰性反應(yīng)，個(gè)別可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞和血小板均呈陰性反應(yīng)。（ 4）臨床意義鑒別急性白血病的類(lèi)型。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始粒細(xì)胞可出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng) ；急性單核細(xì)胞白血病及急性淋巴細(xì)胞白血病 時(shí)，白血病細(xì)胞均 呈陰性反應(yīng) ；急性粒 - 單核細(xì)胞白血病時(shí)，部分白血病細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)（原粒和早幼粒）。有些白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)（原始單核和幼單核細(xì)胞）。 - 醋酸萘酚酯酶染色（ -NAE）（ 1）原理血細(xì)胞內(nèi)的 - 醋酸萘酚酯酶（ -NAE）將基質(zhì)液中的 - 醋酸萘酚水解，產(chǎn)生 - 萘酚，萘酚再與堅(jiān)牢藍(lán) B 偶聯(lián)，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。屬于非特異性醋酸染色。（ 2）結(jié)果判斷染色陽(yáng)性結(jié)果為胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黑色顆粒沉淀 。 - 醋酸萘酚酯酶染色（ -NAE）模式圖（ 3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)1）單核細(xì)胞系統(tǒng)：原始單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)或弱陽(yáng)性反應(yīng)；幼單核細(xì)胞和單核