實(shí)驗(yàn)四___膠體金試紙條檢測(cè)技術(shù)

1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 膠體金試紙條診斷技術(shù)膠體金試紙條診斷技術(shù)一、簡(jiǎn)一、簡(jiǎn) 介介 膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是9090年代初在免疫年代初在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，最先用于人絨毛膜促性腺激疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，最先用于人絨毛膜促性腺激素（素（HCGHCG）的測(cè)定和乙型肝炎病毒表面抗原的測(cè)定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAgHBsAg）等檢測(cè)。等檢測(cè)。p膠體金膠體金（Colloidal goldColloidal gold）是氯金酸是氯金酸（HAuClHAu

2、Cl4 4）的水溶膠，氯金酸在還原劑的作的水溶膠，氯金酸在還原劑的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球形，大小均一，無(wú)棱角。形，大小均一，無(wú)棱角。質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀各異。各異。膠體金的質(zhì)量判定標(biāo)準(zhǔn)膠體金的質(zhì)量判定標(biāo)準(zhǔn)p膠體金標(biāo)記的原理：膠體金標(biāo)記的原理：膠體金在堿性條件下帶膠體金在堿性條件下帶負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)藉靜電負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)

3、分子的正電荷基團(tuán)藉靜電吸引而形成牢固結(jié)合。吸引而形成牢固結(jié)合。p膠體金標(biāo)記技術(shù)膠體金標(biāo)記技術(shù)（Immunogold labeling Immunogold labeling techniquetechnique）是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。二、膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理二、膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理 以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細(xì)血管作用，滴加在膜條一端的液體慢的毛細(xì)血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過(guò)抗原抗體結(jié)合，并利慢向另一端滲

4、移，通過(guò)抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測(cè)抗原用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測(cè)抗原/ /抗體?？贵w。最常用的是雙抗夾心法檢測(cè)抗原最常用的是雙抗夾心法檢測(cè)抗原膠體金試紙條示意圖膠體金試紙條示意圖檢測(cè)線檢測(cè)線質(zhì)檢線質(zhì)檢線吸收墊吸收墊樣品墊樣品墊硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜連接墊連接墊（膠體金墊）（膠體金墊）背襯背襯（底板）（底板）p測(cè)定時(shí)將試紙條下端浸入液體測(cè)定時(shí)將試紙條下端浸入液體標(biāo)本中，下端吸水材料即吸取標(biāo)本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動(dòng)，流經(jīng)液體向上端移動(dòng)，流經(jīng)C C處時(shí)使處時(shí)使干片上的干片上的免疫金復(fù)合物免疫金復(fù)合物復(fù)溶，復(fù)溶，并帶動(dòng)其向膜條滲移。并帶動(dòng)其向膜條滲移。

5、測(cè)測(cè) 定定p若標(biāo)本中有待測(cè)特異抗原，即若標(biāo)本中有待測(cè)特異抗原，即可與免疫金復(fù)合物中的抗體結(jié)可與免疫金復(fù)合物中的抗體結(jié)合，此抗原抗體復(fù)合物流至測(cè)合，此抗原抗體復(fù)合物流至測(cè)試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜上顯出紅色上顯出紅色反應(yīng)線條反應(yīng)線條（T T）。）。測(cè)測(cè) 定定測(cè)測(cè) 定定p過(guò)剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，過(guò)剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相抗小鼠至參照區(qū)與固相抗小鼠IgGIgG結(jié)合結(jié)合（免疫金復(fù)合物中的單克隆抗（免疫金復(fù)合物中的單克隆抗體為小鼠體為小鼠IgGIgG），），而顯出紅色而顯出紅色質(zhì)質(zhì)控線條控線條（R R）。）。測(cè)測(cè) 定定p陰性標(biāo)本則無(wú)反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條

6、陰性標(biāo)本則無(wú)反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。膠體金快速診斷技術(shù)的特點(diǎn)膠體金快速診斷技術(shù)的特點(diǎn) p簡(jiǎn)捷快速：簡(jiǎn)捷快速：操作簡(jiǎn)單，一般只要操作簡(jiǎn)單，一般只要5 5-10min -10min 就就會(huì)出結(jié)果，而其它方法如會(huì)出結(jié)果，而其它方法如ELISAELISA需要需要1 1-2h-2h，PCR PCR 需要時(shí)間更長(zhǎng)。需要時(shí)間更長(zhǎng)。p結(jié)果易于判定：結(jié)果易于判定：陰、陽(yáng)性呈色很明顯，肉眼陰、陽(yáng)性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。很容易判斷。p特異性好：特異性好：因?yàn)樵摷夹g(shù)大多用單克隆抗體標(biāo)因?yàn)樵摷夹g(shù)大多用單克隆抗體標(biāo)記，這決定了它具有很好的特異性。記，這決定了它具有很好的特異性。p病毒性疾?。翰《拘约膊。簜魅拘苑ㄊ夏也?、禽流感、傳染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬細(xì)小病毒、豬瘟等。新城疫、犬細(xì)小病毒、豬瘟等。p寄生蟲(chóng)疾?。杭纳x(chóng)疾?。貉x(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、囊蟲(chóng)血吸蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、囊蟲(chóng)病、恙蟲(chóng)病。病、恙蟲(chóng)病。p細(xì)菌性疾?。杭?xì)菌性疾病