細(xì)胞工程考試復(fù)習(xí)題

1、各類專業(yè)好文檔，值得你下載，教育，管理，論文，制度，方案手冊(cè)，應(yīng)有盡有細(xì)胞工程復(fù)習(xí)題第一章：緒論1. 細(xì)胞工程 是指按照一定的設(shè)計(jì)方案，通過(guò)在細(xì)胞、亞細(xì)胞或組織水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，獲 得重構(gòu)的細(xì)胞、組織、器官以及個(gè)體，創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的綜合性生物工程。廣義的細(xì)胞 工程包括所有的生物組織、器官及細(xì)胞離體操作和培養(yǎng)技術(shù)。狹義的細(xì)胞工程則是指細(xì)胞融合和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。2. 細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）和組織培養(yǎng)（tissue culture）都屬于體外培養(yǎng)（in vitro culture）， 是指生物細(xì)胞和組織在離體條件下的生長(zhǎng)和增殖。是細(xì)胞工程的最基本技術(shù)。3. 動(dòng)物細(xì)胞工程發(fā)展史1細(xì)胞

2、融合現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn) 2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的建立，1907年，Harrison首先培養(yǎng)了蛙胚神經(jīng)管區(qū)細(xì)胞，并觀察到從中長(zhǎng)出的軸突細(xì)胞（神經(jīng)纖維），他的工作被認(rèn)為是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)開(kāi)始的標(biāo)志；3.細(xì)胞融合技術(shù)的建立和雜交瘤技術(shù)的誕生4、動(dòng)物克隆技術(shù)的建立4動(dòng)物細(xì)胞工程的應(yīng)用1、 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)醫(yī)藥產(chǎn)品（單克隆抗體）2、新品種培育3、試管動(dòng)物與嬰兒 4、組織工 程5、珍稀動(dòng)物資源的保存與保護(hù)5. 將目的基因在器官或組織中進(jìn)行特異性高表達(dá)的基因動(dòng)物稱為動(dòng)物生物反應(yīng)器 第二章1 .動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置無(wú)菌操作室（接種室）功能：細(xì)胞篩選、接種、培養(yǎng)基無(wú)菌制備要求：密封、防塵、防霉規(guī)劃：更衣間、緩沖間、操作間

3、培養(yǎng)與觀察室功能：細(xì)胞培養(yǎng)、觀察要求：清潔，防塵規(guī)劃：觀察室，培養(yǎng)室制備室功能：培養(yǎng)基的初制備、提取工藝的操作、細(xì)胞培養(yǎng)的上游和下游技術(shù)操作要求：清潔，防塵清洗滅菌室功能：培養(yǎng)皿的清洗、滅菌和無(wú)菌純水的制備要求：清潔、防塵儲(chǔ)藏室功能：保存細(xì)胞、無(wú)菌培養(yǎng)基、常用液體以及消毒后的器皿等要求：清潔，防塵2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)法 是用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)目，用以測(cè)定細(xì)胞增殖和調(diào)整細(xì)胞 濃度的一種方法。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原則：” S”型計(jì)數(shù)，遵循數(shù)上不數(shù)下數(shù)左不數(shù)右的原則。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是觀察細(xì)胞在一代生存期內(nèi)的增生過(guò)程的重要指標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間（d）為橫坐標(biāo)、細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)所做出的曲線。3. 細(xì)胞貼壁率又稱

4、接種存活率，用于觀察貼壁附著生長(zhǎng)細(xì)胞，主要反映細(xì)胞的生存能力， 和部分底物材料的相容性。4. 細(xì)胞活力測(cè)定方法：MTT比色法、CCK-8法5. 細(xì)胞培養(yǎng)活體染色方法：1）堿性活性染料：噻嗪類（次甲基藍(lán)、甲苯膠藍(lán)）、啞噴類（量 焦油藍(lán)、量焦油紫）、吖嗪類（中性紅、詹納斯綠）、三酚苯甲烷類（甲基紫、維克多利亞藍(lán)）2）酸性活性染料：臺(tái)盼藍(lán)、剛果紅、吡咯藍(lán)）6. 支原體污染的檢測(cè)方法： 相差顯微鏡觀察、熒光染色法觀察 、電鏡檢測(cè)、培養(yǎng)檢測(cè) 各類專業(yè)好文檔，值得你下載，教育，管理，論文，制度，方案手冊(cè)，應(yīng)有盡有各類專業(yè)好文檔，值得你下載，教育，管理，論文，制度，方案手冊(cè)，應(yīng)有盡有7污染后解決方法：使用抗

5、生素、加溫處理、使用支原體特異性血清、其他方法 第四章1. 接觸抑制 定義：細(xì)胞從接種到長(zhǎng)滿底物表面后，由于細(xì)胞繁殖數(shù)量增多相互接觸后，不再 增加。2. 密度抑制：細(xì)胞接觸匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營(yíng)養(yǎng)充分，細(xì)胞仍然能夠進(jìn)行增殖分裂，數(shù)量仍在增多，但當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大時(shí)，培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分的減少，細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制，導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止細(xì)胞永生化也稱不死性，是細(xì)胞獲得持續(xù)生長(zhǎng)增殖能力的特性。而惡性細(xì)胞不僅能長(zhǎng)期增殖生長(zhǎng)并有異體接種致瘤性。3. 細(xì)胞系（cell line ）是指由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的以一種細(xì)胞為主的、能在體外長(zhǎng)期 生存的不均一的細(xì)胞群體。4.

6、 細(xì)胞株（cell strain ）是指細(xì)胞系經(jīng)進(jìn)一步的克隆化，得到的由單一細(xì)胞組成的群體。 細(xì)胞系（cell line）是指由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的以一種細(xì)胞為主的、能在體外長(zhǎng)期 生存的不均一的細(xì)胞群體。5. 細(xì)胞培養(yǎng)的常用液體：水-新鮮制備的純水或三蒸水 平衡鹽溶液-Hank' s、PBS液等維持滲透壓平衡 消化液-胰蛋白酶、EDTA-Na及膠原酶溶液、 消化酶抑制液-含血清培養(yǎng)液、大豆胰酶抑制劑pH 調(diào)整液-NaHC03、HEPES 溶液抗生素液-青霉素、鏈霉素、卡那霉素和慶大霉素等 谷氨酰胺補(bǔ)充液-谷氨酰胺溶液，注意其很不穩(wěn)定6. 傳代細(xì)胞培養(yǎng)方法1）貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞：消化法

7、傳代、直接吹打或用硅膠軟刮2）懸浮細(xì)胞：直接吹打、自然沉降法 細(xì)胞的凍存原則：慢速冷凍、保存溫度低 細(xì)胞的復(fù)蘇原則快速解凍7細(xì)胞同步化培養(yǎng)方法：1） 選擇細(xì)胞同步化：M期細(xì)胞震搖脫落法、離心洗脫法、梯度沉降法2） 誘導(dǎo)細(xì)胞同步化法：血清饑餓法（ G1 ）、異亮氨酸營(yíng)養(yǎng)缺乏法（G1）、DNA合成抑制劑 阻斷法（S）、秋水仙素阻斷法（M ）8. 細(xì)胞的凍存要點(diǎn)： 消化細(xì)胞（同前），將細(xì)胞懸液收集至離心管中。 lOOOrpm離心10分鐘，棄上清液。 沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，調(diào)整至5 x 106/ml左右。 將懸液分至凍存管中，每管1 ml。 將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴(yán)，否

8、則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。 貼上標(biāo)簽，寫(xiě)明細(xì)胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。 按下列順序降溫： 室溫t 4C （ 20分鐘）t冰箱冷凍室（30分鐘）t低溫冰箱（30C 1 小時(shí)氣態(tài)氮（30分鐘）t液氮。9. 細(xì)胞的復(fù)蘇要點(diǎn) 將凍存于液氮中的凍存管取出，迅速放入37-40 C水浴中使其在1min內(nèi)融化。 無(wú)菌操作下打開(kāi)凍存管，將細(xì)胞懸液吸取到培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足生長(zhǎng)液后，置37C培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁（約4h ）后，換培養(yǎng)液一次。 或取出細(xì)胞懸液至離心管中，補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，500-1000r/min低 速離心5min，去上清，用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后裝入培養(yǎng)瓶中，置37 C培養(yǎng)，次日后更換一次培養(yǎng)液

9、。待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后即可傳代。第五章1. 細(xì)胞融合：定義：指用自然或人工方法、使兩個(gè)或更多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過(guò) 程，又稱為體細(xì)胞雜交。2. 細(xì)胞融合的方法：PEG介導(dǎo)的融合、細(xì)胞電融合、病毒介導(dǎo)的融合3,.特異性雜交瘤細(xì)胞的篩選原理：通過(guò)選擇性培養(yǎng)后生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞，僅有部分是分泌預(yù)定特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。可取上清液，根據(jù)抗原的性質(zhì)、抗體類型及所需靈敏度等具體 情況來(lái)加以選擇。4單抗的制備：1）過(guò)程動(dòng)物免疫與親本細(xì)胞的選擇、2）細(xì)胞融合：淋巴細(xì)胞雜交瘤的制備、3）雜交瘤細(xì)胞的篩選：有限稀釋法等4）單克隆抗體的制備和凍存5）單克隆抗體的純化抗體制備有兩種方法增量培養(yǎng)法小鼠腹腔接種法5雜

10、交瘤技術(shù)的原理及流程 ：用抗原免疫小鼠-免疫牌細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng) -骨髓 瘤細(xì)胞在PEG作用下融合成雜交瘤細(xì)胞 選擇培養(yǎng)基（HAT培養(yǎng)基）；未融合的的細(xì)胞死亡，雜交瘤細(xì)胞存活陽(yáng)性克隆的篩選及克隆化克隆擴(kuò)增及大量制備McAb6. 雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的 3個(gè)技術(shù)關(guān)鍵：1） B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的特性2）細(xì)胞融合技術(shù) 3）雜交瘤細(xì)胞的篩選7單抗純化方法 鹽析凝膠過(guò)濾離子交換層析 親和層析法 辛酸沉淀法1. 胚胎工程（embryo engineering ）以生殖細(xì)胞和胚胎細(xì)胞為對(duì)象進(jìn)行的操作，利用人工方法 影響、改變動(dòng)物胚胎品質(zhì)發(fā)育和進(jìn)程的一種生物技術(shù)。主要技術(shù)包括體外受精、胚胎切割、 胚胎移植等

11、。2. 精子獲能：精子離開(kāi)精巢后，無(wú)使卵受精的能力，它必須經(jīng)過(guò)在附睪中成熟及在雌性生殖 道內(nèi)停留一段時(shí)間，才具有使卵受精的能力，這種現(xiàn)象稱精子獲能。3. 頂體反應(yīng)定義：精子在同卵子表面接觸或與卵膜分泌的物質(zhì)相遇后，精子的頂體就會(huì)發(fā)生 一系列的變化。4. 體外受精（IVF ）:就是將哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞從母體取出，在體外進(jìn)行精卵結(jié)合的過(guò)程。5胚胎移植（embryo transfer， ET） 一般是針對(duì)早期胚胎而言，它是指附植前的早期胚胎很 容易由子宮中取出，經(jīng)過(guò)人為處理，可以再送入子宮的過(guò)程，這是胚胎生物工程的基本技術(shù)。6. 同期發(fā)情：胚胎移植時(shí)，供體胚胎必須與受體子宮內(nèi)膜發(fā)育狀態(tài)高度同步化，才能

12、獲得好 效果，這個(gè)過(guò)程稱為同期發(fā)情7. 多精受精的阻止：透明帶反應(yīng)、受精膜的形成8. 胚胎的收集：A 手術(shù)法收集胚胎：1）輸卵管沖胚（順向沖胚、逆向沖胚）；2）子宮角沖胚B 非手術(shù)法收集胚胎：二路法、三路法第七章1. 干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞，干細(xì)胞具有兩種特性：能夠產(chǎn)生表現(xiàn)型與 基因型和自己完全相同的子細(xì)胞；同時(shí)還能分化成為多種特定功能的體細(xì)胞。2. 干細(xì)胞有幾個(gè)主要特征：干細(xì)胞本身不是終末分化細(xì)胞；干細(xì)胞能無(wú)限增殖分裂；干細(xì)胞可連續(xù)分裂幾代，也可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)處于靜止?fàn)顟B(tài)；干細(xì)胞分裂產(chǎn)生的子細(xì)胞只能有兩種命運(yùn)一一保持為干細(xì)胞或分化為特定細(xì)胞。3. 干細(xì)胞的分類：很據(jù)分化潛能大

13、小分：全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、專能干細(xì)胞根據(jù)來(lái)源來(lái)分：胚胎干細(xì)胞ESC 、成體組織來(lái)源的干細(xì)胞ASC4. ES細(xì)胞生物學(xué)特性：細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及核型、細(xì)胞的高度分化潛能、堿性磷酸酶的表達(dá)、胚胎階段特異性細(xì)胞表面抗原的表達(dá)5. 組織工程是指應(yīng)用工程學(xué)和生命科學(xué)的原理和方法來(lái)研究正?；虿±頎顩r下哺乳動(dòng)物組織的結(jié)構(gòu)、功能和生長(zhǎng)的機(jī)制，研究開(kāi)發(fā)能夠修復(fù)、維持或改善損傷組織的人工生物替 代物的一門(mén)學(xué)科。第八章1. 核移植定義：將供體細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使后者不經(jīng)精子穿透等有性過(guò)程即可 被激活、分裂并發(fā)育，使得核供體的基因得到完全復(fù)制。2. 核移植目的：生殖性克隆、治療性克隆3. 治療性克隆技術(shù)途徑包

14、括以下幾個(gè)步驟：首先取病人體細(xì)胞核，移植到去核的成熟受體卵母細(xì)胞；在早期胚胎形成后，從中分離獲得人ES細(xì)胞；對(duì)ES細(xì)胞進(jìn)行基因修飾和定向分化研究；4）將定向分化后的細(xì)胞移植給病人。4. 核移植技術(shù)的一般程序：核受體細(xì)胞的準(zhǔn)備、核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備、核移植、激活、重構(gòu)胚 胎的培養(yǎng)、胚胎移植、體細(xì)胞克隆動(dòng)物的鑒定5. 核移植原理：1）胚胎、胚胎干細(xì)胞、胎兒成纖維細(xì)胞、成體細(xì)胞的每一個(gè)細(xì)胞核具有相 同的遺傳物質(zhì)。2）已經(jīng)發(fā)生分化的胚胎細(xì)胞核移植到成熟的卵母細(xì)胞中，因?yàn)樘厥庖蜃幼饔茫怪踩牒嘶虮磉_(dá)被重新編程或調(diào)整，將“發(fā)育鐘”撥回到受精狀態(tài)，即恢復(fù)“全能性”（totipote nt）。3）已經(jīng)分化的細(xì)胞

15、經(jīng)過(guò)去分化培養(yǎng)后，同樣具有潛在發(fā)育潛能，可以恢復(fù)全能性。6. 核移植技術(shù)存在的問(wèn)題 A成功率低，為1-5% B理論研究滯后技術(shù)研究C體細(xì)胞克隆后代可能出現(xiàn)老化現(xiàn)象D核移植技術(shù)環(huán)節(jié)尚需要不斷完善第十一章1. 植物組織培養(yǎng)：在含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)離體植物組織（器官或 細(xì)胞）并誘導(dǎo)使其長(zhǎng)成完整植株的技術(shù)。2. 植物組織培養(yǎng)的類型：愈傷組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)和單細(xì)胞培養(yǎng)、 原生質(zhì)體培養(yǎng)3. 植物細(xì)胞的全能性：植物細(xì)胞具有該植物體全部遺傳的可能性，在一定條件下如同受精卵 一樣，具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。兩個(gè)含義：1）植物細(xì)胞無(wú)論是體細(xì)胞還是生殖細(xì)胞，均具有

16、該物種全部的遺傳信息2）每個(gè)植物細(xì)胞均具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力4. 細(xì)胞分化：細(xì)胞后代在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過(guò)程稱為細(xì)胞分化。5. 脫分化（dedifferentiation）：細(xì)胞分化是可逆的，分化的細(xì)胞在一定條件下，可以轉(zhuǎn)變?yōu)榕?性狀態(tài)，重新獲得分裂能力，稱為脫分化。6. 愈傷組織：在人工培養(yǎng)基上由外植體上形成的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。7細(xì)胞再分化：即脫分化后的分生細(xì)胞（愈傷組織）在特定的條件（離體培養(yǎng)）下，重新分 化為各種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步發(fā)育成完整植株。8. 再分化通過(guò)兩種不同途徑實(shí)現(xiàn) （1）器官發(fā)生方式：外植體-脫分化-愈傷組織-再分化 一不定芽-轉(zhuǎn)管-不定根 再生

17、植株（2）無(wú)性胚胎方式：外植體-脫分化 愈傷組 織-再分化-胚狀體再生植株9. 植物激素配比模式：高一一有利于根的形成和愈傷組織的形成適，適中有利于根的分化、低一一有利于芽的形成第十二章1. 快速繁殖：利用離體培養(yǎng)技術(shù)，將來(lái)自優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉片、鱗片等器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，在短期內(nèi)獲得大量遺傳形狀一致的個(gè)體的方法。也稱微繁、快速繁殖。2. 微繁技術(shù)具有以下特點(diǎn)：一是繁殖周期短，可加快培育某些難繁殖、繁殖速度低、珍貴或?yàn)l危等類植物；二是繁殖數(shù)量大，集約化培養(yǎng)使每平方米面積，每年可生產(chǎn)數(shù)以萬(wàn)計(jì)的株苗，增殖速度大大提高；三是可以通過(guò)消毒，在無(wú)菌條件下進(jìn)行，特別適合一些易感染病毒的植物

18、，如馬鈴薯等； 四是不受季節(jié)和環(huán)境條件的限制，適于工廠化生產(chǎn)，擴(kuò)大規(guī)模，降低成本。五、雜合植物材料的大量繁殖。六、單獨(dú)繁殖雄株或雌株。3. 快速繁殖程序：外植體t清洗t消毒t接種t愈傷組織t不定芽的形成 t不定根的形成t 馴化移栽。4. 外植體（explant）:由活體（in vivo）植物體上切取下來(lái)的，用于組織培養(yǎng)的各種接種材料。 包括各種器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等。5. 不定芽：除頂芽和腋芽以外，任何其他器官或組織產(chǎn)生的芽稱為不定芽6. 繼代培養(yǎng)：更換新鮮培養(yǎng)基來(lái)繁殖同種類型的材料（愈傷組織、芽）。7. 不定芽的三種途徑：1.腋芽形成途徑。2器官發(fā)生途徑。3胚狀體形成途徑。 三種途徑優(yōu)

19、點(diǎn)、缺點(diǎn)比較：1）腋芽途徑容易成苗，對(duì)培養(yǎng)基要求不高，后代遺傳性較為穩(wěn) 定，但取材受到一定限制，僅限于具有明顯頂端分生組織和次生分生組織的物種。2）器官發(fā)生途徑和胚狀體發(fā)生途徑，對(duì)培養(yǎng)基要求高，器官發(fā)生條件苛刻。繁殖數(shù)量不如 腋芽途徑高，但是來(lái)源豐富。8. 微莖尖培養(yǎng)法脫毒原理：感染病毒植株的體內(nèi)病毒的分布并不均勻，病毒的數(shù)量隨植株部位及年齡而異，越靠近莖頂端區(qū)域的病毒的感染深度越低，生長(zhǎng)點(diǎn)（約0.11.0mm區(qū)域）則幾乎不含或含病毒很少、 這是因?yàn)榉稚鷧^(qū)域內(nèi)無(wú)維管束，病毒只能通過(guò)胞間連絲傳遞，趕不上細(xì)胞不斷分裂和活躍的生長(zhǎng)速度。9. 植物脫毒方法：微莖尖培養(yǎng)法、珠心組織培養(yǎng)法、熱處理法第十三

20、章1. 單倍體：植物減數(shù)分裂后形成的雌雄配子，其染色體數(shù)只有體細(xì)胞的一半，將這具有單套 染色體的細(xì)胞稱為單倍體細(xì)胞2. 單倍體育種：將具有單套染色體的單倍體植物， 經(jīng)人工染色體加倍，使其成為純和二倍體， 從中篩選優(yōu)良個(gè)體，直接繁育成新品種， 或具有單一優(yōu)良性狀的個(gè)體， 作為雜交育種的原始 材料。3. 看護(hù)培養(yǎng)法：取出花粉，制成每 ml含有20個(gè)花粉粒的細(xì)胞懸浮液?？醋o(hù)培養(yǎng)時(shí)，把花藥放在瓊脂培養(yǎng)基表面上， 然后在每個(gè)花藥上覆蓋一小塊圓片濾紙。用移液管吸取1滴已準(zhǔn)備好的花粉粒懸浮液，滴在每個(gè)小圓片濾紙上培養(yǎng)，在25C和一定光照強(qiáng)度下，大約一個(gè)月長(zhǎng)出細(xì)胞群4. 幼胚培養(yǎng)的途徑有 3條：1、正常胚胎發(fā)

21、育途徑 2、脫分化形成愈傷組織3早熟萌發(fā)產(chǎn)生 畸形苗第十五章1. 體細(xì)胞胚（胚狀體）：離體培養(yǎng)下沒(méi)有經(jīng)過(guò)受精過(guò)程，但經(jīng)過(guò)了胚胎發(fā)育過(guò)程所形成的胚 的類似物，統(tǒng)稱為體細(xì)胞胚。2. 體細(xì)胞胚胎有以下幾方面的界定： 體細(xì)胞胚是離體培養(yǎng)的產(chǎn)物，只限于在離體培養(yǎng)范圍使用，以區(qū)別于無(wú)融合生殖胚；體細(xì)胞胚起源于非合子細(xì)胞，以區(qū)別于合子胚； 體細(xì)胞胚經(jīng)過(guò)了胚胎發(fā)育過(guò)程，以區(qū)別于離體培養(yǎng)中器官發(fā)生形成個(gè)體的途徑。3. 體細(xì)胞胚發(fā)育特點(diǎn)：1）與器官發(fā)生的途徑比：體細(xì)胞胚發(fā)育再生植株有兩個(gè)明顯的特點(diǎn)。一是體細(xì)胞胚具有雙極性二是體細(xì)胞胚形成后與母體的維管束系統(tǒng)聯(lián)系較少，即出現(xiàn)所謂的生理隔離現(xiàn)象。2）與合子胚相比： 體

22、細(xì)胞胚一般沒(méi)有真正的胚柄只有類似胚柄的結(jié)構(gòu)，而合子胚在發(fā)育初期具有明顯的胚 柄。 體細(xì)胞胚的子葉常不規(guī)范，有時(shí)具有兩片以上的子葉。而合子胚的子葉是相當(dāng)規(guī)范的，可以作為分類的依據(jù)。 與相同植物比較，體細(xì)胞胚的體積明顯小于合子胚。 體細(xì)胞胚沒(méi)有休眠而是直接形成植株。合子胚在胚胎發(fā)育完全進(jìn)入子葉期以后，經(jīng)過(guò)一系列的物質(zhì)積累和脫水就進(jìn)入休眠。4. 狹義人工種子：是指植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚狀體，包裹在含有養(yǎng)分和具有保護(hù)功能的物質(zhì) 中，并在適宜條件下能夠發(fā)芽出苗的顆粒體。廣義人工種子：是在胚狀體或微芽（頂芽、腋芽）、微型變態(tài)器官（小鱗莖等）之外加上必要 的營(yíng)養(yǎng)成分（人工胚乳）后，用具有一定通透性而無(wú)毒的材

23、料將其包裹起來(lái)，形成的與天然 種子相似的顆粒體。5. 人工種子的分類一）根據(jù)包被情況劃分為三類：1、裸露的或休眠的繁殖體 如微鱗莖，微塊莖等。它們?cè)诓患影坏那闆r下也具有較高的 成株率。2、人工種皮包被的繁殖體 一些體細(xì)胞胚、原球莖等不能過(guò)度干燥，但只需要用 人工種皮包被即可維持良好的發(fā)芽狀態(tài)，如胡蘿卜體細(xì)胞胚。3、水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體大多數(shù)體細(xì)胞胚、不定芽、莖尖等均需要先包埋在半液態(tài)凝膠中，再經(jīng)人工種皮包裹才能避免失水，從而維持良好的發(fā)芽能力。二）根據(jù)繁殖體的類型劃分為兩類 ：1、以體細(xì)胞胚為繁殖體的人工種子2、以微器官為繁殖體的人工種子6. 人工種子的制備：制作流程（以體細(xì)胞胚

24、為例）外植體的選擇和消毒t愈傷組織的誘導(dǎo) t 體細(xì)胞胚的誘導(dǎo) t 體細(xì)胞胚的同步化T體細(xì)胞胚的分選 t 體細(xì)胞胚的包裹（人工胚乳）t 包裹外膜（人工種皮）7. 人工種子的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用1、 與利用試管苗相比，具有更多的優(yōu)點(diǎn)：人工種子可以直接播種、 可以存儲(chǔ)避免移栽困難、 可以長(zhǎng)距離運(yùn)輸。2、與田間制種相比，可以節(jié)省制種用地，且不受季節(jié)限制，可以實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)，同時(shí)還 避免了種子攜帶病原菌的危險(xiǎn)；3、在無(wú)性繁殖植物中，有可能建立一種高效快速的繁殖方法。4、可以對(duì)優(yōu)異雜種種子不通過(guò)有性制種而快速獲得大量種子，特別是對(duì)于那些制種困難的 植物更具有主要的適用意義5、對(duì)于一些不能正常產(chǎn)生種子的特殊植物材料如

25、三倍體、非整倍體、工程植物等，有可能 通過(guò)人工種子在短期內(nèi)加大繁殖應(yīng)用。8. 人工種子的局限性繁殖體的誘導(dǎo)及其可能發(fā)生變異；人工胚乳和人工種皮還存在缺陷發(fā)芽技術(shù)尚待解決；人工種子工廠化生產(chǎn)配套設(shè)施、及種子成本過(guò)高等。第十八早1. 植物原生質(zhì)體的分離方法 ：1、機(jī)械分離法2、酶解分離法2. 影響植物原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素1） 材料選擇：離體培養(yǎng)植株（試管苗）、田間或溫室的植株，其葉片、葉柄、莖段等均可作 為原生質(zhì)體分離材料，但一定要用幼嫩的植株。2） 滲透壓穩(wěn)定劑常用的穩(wěn)定劑有兩類：1）糖溶液系統(tǒng)2）鹽溶液系統(tǒng)3） 細(xì)胞質(zhì)膜穩(wěn)定劑常用質(zhì)膜穩(wěn)定劑有：葡萄糖硫酸鉀、MES、CaCI2 2H2O、K

26、H2PO4等。4）酶的種類和組合原生質(zhì)體分離主要取決于酶的種類、濃度及組合。主要用的酶有：纖維 素酶、半纖維素酶、果膠酶5）pH值、溫度、光照3. 原生質(zhì)體純化方法：過(guò)濾法、離心法、飄浮法4. 原生質(zhì)體培養(yǎng)的意義A為細(xì)胞融合提供培養(yǎng)方法 B為遺傳轉(zhuǎn)化提供受體 C利用培養(yǎng)變異選育新品種D用于細(xì)胞器的分離與轉(zhuǎn)移E用于理論研究第十七章1. 染色體工程是按照預(yù)先的設(shè)計(jì)，添加、消除或替代同種或異種染色體的全部或一部分，從 而達(dá)到定向改變生物遺傳性狀或選育新品種的目的。2. 人工加倍方法1、化學(xué)誘導(dǎo)法：秋水仙素、細(xì)胞松弛素B2生物學(xué)的方法：3. 多倍體倍性鑒 定1、核體積測(cè)量法一一 細(xì)胞核的大小與染色體數(shù)目成比例2、DNA含量測(cè)定3、染色體計(jì)數(shù)法-最直觀、最準(zhǔn)確4. 多倍體的優(yōu)勢(shì)：形態(tài)巨大；營(yíng)養(yǎng)改善；生理上代謝活動(dòng)增強(qiáng)。5. 三倍體西瓜的培育過(guò)程 1）四倍體母本的獲得（2）三倍體獲得（3）無(wú)籽西瓜獲得單體植物：2n-1