動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體(用)

1、 復(fù)習(xí)鞏固：1.植物體細(xì)胞雜交 2.植物組織培養(yǎng)2010-3-26整理課件3植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞植物細(xì)胞A A植物細(xì)胞植物細(xì)胞B B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B B原生質(zhì)原生質(zhì)體融合體融合雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)雜種植株雜種植株去細(xì)胞壁去細(xì)胞壁纖維素酶、纖維素酶、果膠酶果膠酶化學(xué)法化學(xué)法物理法物理法誘導(dǎo)誘導(dǎo)2010-3-26整理課件41.概念：概念：動(dòng)物細(xì)胞融合（動(dòng)物細(xì)胞融合（cell fusion)cell fusion)，又又稱體細(xì)胞雜交（稱體細(xì)胞雜交（somatic hybridiazationsomatic hybridiazation），），是指兩

2、個(gè)或更多個(gè)相同或不同細(xì)胞結(jié)合形成是指兩個(gè)或更多個(gè)相同或不同細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。一個(gè)細(xì)胞的過程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2010-3-26整理課件52 2、動(dòng)物細(xì)胞融合基本原理：、動(dòng)物細(xì)胞融合基本原理：與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細(xì)胞膜的流動(dòng)性即細(xì)胞膜的流動(dòng)性3、誘導(dǎo)方式、誘導(dǎo)方式物理法：物理法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒 例如：仙臺(tái)病毒例如：仙臺(tái)病毒2010-3-26整理課件6滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病

3、毒顆粒穿通細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）2010-3-26整理課件7病毒促使細(xì)胞融合的主要步驟如下：病毒促使細(xì)胞融合的主要步驟如下： 兩個(gè)原生質(zhì)體或細(xì)胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近；兩個(gè)原生質(zhì)體或細(xì)胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近； 通過病毒與原生質(zhì)體或細(xì)胞膜的作用使兩個(gè)細(xì)胞膜間互相滲透，通過病毒與原生質(zhì)體或細(xì)胞膜的作用使兩個(gè)細(xì)胞膜間互相滲透， 胞質(zhì)互相滲透；胞質(zhì)互相滲透； 兩個(gè)原生質(zhì)體的細(xì)胞核互相融合，兩

4、個(gè)細(xì)胞融為一體；兩個(gè)原生質(zhì)體的細(xì)胞核互相融合，兩個(gè)細(xì)胞融為一體； 進(jìn)入正常的細(xì)胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細(xì)胞。進(jìn)入正常的細(xì)胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細(xì)胞。2010-3-26整理課件84、過程：動(dòng)物細(xì)胞A 動(dòng)物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合2個(gè)完整的雜交細(xì)胞AB有絲分裂（膜融合、誘導(dǎo)方法質(zhì)融合、 核融合）單核細(xì)胞2010-3-26整理課件95、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史告訴我、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史告訴我們：們：科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，實(shí)。那么，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞融合有什么現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義意義呢？呢？打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜

5、交成為可能；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；重要用途：重要用途：2010-3-26整理課件106、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途制備單克隆抗體制備單克隆抗體獲得獲得雜種植株雜種植株細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合細(xì)胞融合物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺

6、激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒2010-3-26整理課件11二、單克隆抗體二、單克隆抗體回顧回顧抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。主要分布在血清中。“克隆克隆”從英文從英文“clone”clone”音譯而來，是指從一個(gè)共音譯而來，是指從一個(gè)共同祖先，通過同祖先，通過無性繁殖無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳遺傳特性相同特性相同的的DNADNA分子，細(xì)胞或個(gè)體

7、。在細(xì)胞水平指分子，細(xì)胞或個(gè)體。在細(xì)胞水平指動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng). .2010-3-26整理課件12 由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克隆）形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。 1 1、單克隆抗體概念、單克隆抗體概念: :2010-3-26整理課件13自主閱讀自主閱讀P52P52：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？及缺陷是什么？2010-3-26整理課件14B B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：. .每一個(gè)每一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。.B.B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗

8、體。. .動(dòng)物體內(nèi)的動(dòng)物體內(nèi)的B B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。疫作用。2010-3-26整理課件15怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能 力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？2010-3-2

9、6整理課件162 2、單克隆抗體的制備過程、單克隆抗體的制備過程2010-3-26整理課件17B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合融合（只考慮兩兩融合）（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？融合細(xì)胞種類型？融合細(xì)胞幾種幾種類型類型？骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞- B- B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種多種雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性克隆上述雜交細(xì)胞克隆上述雜交細(xì)

10、胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 該細(xì)胞繼承該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能產(chǎn)生專產(chǎn)生專一抗體一抗體又能又能無限增殖無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高特異性強(qiáng)，靈敏度高2010-3-26整理課件18比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目 第一次篩選第一次篩選第二次篩選第二次篩選原理原理在選擇性培養(yǎng)基中添在選擇性培養(yǎng)基中添加某種藥物，未融合加某種藥物，未融合的親本細(xì)胞和融合的的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只

11、有融合的會(huì)死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)抗原抗原抗體的抗體的特異性結(jié)合特異性結(jié)合目標(biāo)目標(biāo)雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交性抗體的雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞2010-3-26整理課件193. 3.單克隆抗體的應(yīng)用：?jiǎn)慰寺】贵w的應(yīng)用：作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與 一定抗原特異性結(jié)合。一定抗原特異性結(jié)合。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速用于用于運(yùn)載藥物：制成運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療2010-3-26整理

12、課件202010-3-26整理課件21兩個(gè)過程兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)一個(gè)優(yōu)勢(shì)課堂小結(jié)課堂小結(jié)滅活的病毒滅活的病毒雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體特異性單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)2010-3-26整理課件22形成雜種細(xì)胞形成雜種細(xì)胞獲得雜種植株獲得雜種植株結(jié)果結(jié)果物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電刺激）蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法細(xì)

13、胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性原原 理理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目1 1、植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較、植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較課堂小結(jié)課堂小結(jié)融合前處理融合前處理用纖維素酶、用纖維素酶、果膠酶去壁果膠酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶使細(xì)胞分散使細(xì)胞分散2010-3-26整理課件232 2、單克隆抗體制備過程、單克隆抗體制備過程B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)誘導(dǎo)融合融合B-BB-B細(xì)胞細(xì)胞B-B-瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞瘤瘤- -瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞（ B-B-瘤細(xì)胞）瘤細(xì)胞

14、）克隆化培養(yǎng)克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)抗體檢測(cè)產(chǎn)生所需產(chǎn)生所需抗體的雜抗體的雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體單克隆抗體2010-3-26整理課件24B B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 1.1.右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案的實(shí)驗(yàn)方案制備單克隆抗體制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的獲得產(chǎn)生單一抗體的B B淋

15、巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞。(1).(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：該實(shí)驗(yàn)方案的目的是： _(2).(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？嗎？為什么？2010-3-26整理課件25B B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C (3)A(3)A是從小鼠的脾臟中取是從小鼠的脾臟中取得得_ _ 該細(xì)胞能該細(xì)胞能夠產(chǎn)生夠產(chǎn)生_ _ 。(4)(4)圖中圖中B B為為_過程，過程，常用常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，的遺傳特性，既能既能_ ,_ ,又能又能_。B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞抗體抗