課題3.分解纖維素的微生物的分離ppt課件

1、酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸教學(xué)目的教學(xué)目的:1、知道纖維素酶的種類及作用、知道纖維素酶的種類及作用2、初步掌握從土壤中分別出分解纖維、初步掌握從土壤中分別出分解纖維 素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸閱讀課本閱讀課本27頁(yè)根底知識(shí)部分第一、二段，回答以下問(wèn)題：頁(yè)根底知識(shí)部分第一、二段，回答以下問(wèn)題：1、纖維素的化學(xué)組成及在生物圈的分布情況？、纖維素的化學(xué)組成及在生物圈的分布情況？2、纖維素酶的組成及作用？、纖維素酶的組成及作用？纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。植物纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。

2、植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。纖維素酶是一種復(fù)合酶，普通以為它至少包括三纖維素酶是一種復(fù)合酶，普通以為它至少包括三種組分，即種組分，即CX酶、酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。糖分解成葡萄糖。一、纖維素和纖維素酶一、纖維素和纖維素酶酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸二、纖維素分解菌的挑選二、纖維素分解菌的挑選閱讀課本課本閱讀課本課本28頁(yè)

3、相關(guān)部分，回答以下問(wèn)題：頁(yè)相關(guān)部分，回答以下問(wèn)題：1、纖維素分解菌的挑選方法、纖維素分解菌的挑選方法2、纖維素分解菌的挑選方法的原理、纖維素分解菌的挑選方法的原理剛果紅染色法：這種方法可以經(jīng)過(guò)顏色反響直接剛果紅染色法：這種方法可以經(jīng)過(guò)顏色反響直接 對(duì)微生物進(jìn)展挑選對(duì)微生物進(jìn)展挑選 剛果紅是一種染料，它可以與纖維素構(gòu)成紅色剛果紅是一種染料，它可以與纖維素構(gòu)成紅色復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反響。復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反響。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅纖維素的復(fù)合纖維素的復(fù)合物就無(wú)法構(gòu)成，培育基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解為中物就無(wú)法構(gòu)成，培育

4、基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解為中心的心的 。這樣我們可以經(jīng)過(guò)能否產(chǎn)生透明圈。這樣我們可以經(jīng)過(guò)能否產(chǎn)生透明圈來(lái)挑選纖維素分解菌來(lái)挑選纖維素分解菌透明圈透明圈 酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸練一練：練一練：1、以下關(guān)于纖維素酶的說(shuō)法，錯(cuò)誤的選項(xiàng)是、以下關(guān)于纖維素酶的說(shuō)法，錯(cuò)誤的選項(xiàng)是A、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種B、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁D、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖2、利用剛果紅法可以挑選出纖維素分解菌，、利

5、用剛果紅法可以挑選出纖維素分解菌，以下說(shuō)法錯(cuò)誤的選項(xiàng)是以下說(shuō)法錯(cuò)誤的選項(xiàng)是A、剛果紅能與纖維素構(gòu)成紅色復(fù)合物、剛果紅能與纖維素構(gòu)成紅色復(fù)合物 B、剛果紅能與纖維二糖構(gòu)成紅色復(fù)合物、剛果紅能與纖維二糖構(gòu)成紅色復(fù)合物 C、剛果紅不能與葡萄糖構(gòu)成紅色復(fù)合物、剛果紅不能與葡萄糖構(gòu)成紅色復(fù)合物D、假設(shè)培育基上產(chǎn)生了透明圈，那么闡明已挑、假設(shè)培育基上產(chǎn)生了透明圈，那么闡明已挑選出了纖維素分解菌選出了纖維素分解菌酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸問(wèn)題：?jiǎn)栴}：1.草食性動(dòng)物是怎樣消化食物草食性動(dòng)物是怎樣消化食物中纖維素的？中纖維素的？腸胃中的共生微生物可合成纖維素酶。腸胃中的共生微生物可合成纖維素酶。2.寫(xiě)

6、出纖維素水解反響式寫(xiě)出纖維素水解反響式酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作土壤取樣土壤取樣選擇培育選擇培育梯度稀釋梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上素分解菌的培育基上挑選產(chǎn)生透明挑選產(chǎn)生透明圈的菌落圈的菌落酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸旁欄思索旁欄思索1本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分解菌的分別實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？解菌的分別實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？尿素分解菌的分別實(shí)驗(yàn)流程是將土樣制成的尿素分解菌的分別實(shí)驗(yàn)流程是將土樣制成的菌懸液直接涂布在選擇培育基上；菌懸液直接涂布在選擇培育基上；本課題經(jīng)過(guò)選擇培育使細(xì)菌增殖后，再涂布本課題經(jīng)過(guò)選擇

7、培育使細(xì)菌增殖后，再涂布在鑒別培育基上。其它操作根本根本一樣。在鑒別培育基上。其它操作根本根本一樣。酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸土壤取樣土壤取樣 選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹(shù)林中多選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹(shù)林中多年落葉構(gòu)成的腐殖土，多年積累的枯枝敗年落葉構(gòu)成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。葉等等。 生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土壤中獲得量相對(duì)提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境旁欄思索旁欄思索2 取樣的環(huán)境是怎樣的，作出

8、這取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這種選擇的理由是什么？種選擇的理由是什么？酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸 人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維素分解菌相對(duì)聚集。素分解菌相對(duì)聚集。 將紙埋于深約將紙埋于深約10cm的腐殖土的腐殖土壤中。壤中。旁欄思索旁欄思索3將濾紙埋在土壤中有什么作用？將濾紙埋在土壤中有什么作用？他以為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？他以為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸選擇培育選擇培育1、選擇培育的目的：、選擇培育的目的：添加纖維素分解菌的濃度，以確?？梢詮臉悠分蟹謩e到添加纖維素分解菌的濃度，以確?？梢詮臉悠分蟹謩e到所需求的微生物所需求的微生物2、

9、制備選擇培育基、制備選擇培育基參照課本參照課本29頁(yè)旁欄中的比例配置，回答以下問(wèn)題頁(yè)旁欄中的比例配置，回答以下問(wèn)題a、旁欄中的配方是液體培育基還是固體培育基？為什么？、旁欄中的配方是液體培育基還是固體培育基？為什么？b、這個(gè)培育基對(duì)微生物能否具有選擇作用？假設(shè)具、這個(gè)培育基對(duì)微生物能否具有選擇作用？假設(shè)具 有，是有，是如何進(jìn)展選擇的？如何進(jìn)展選擇的？ c、他能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，闡明選擇培育基的作用、他能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，闡明選擇培育基的作用是液體培育基，緣由是配方中無(wú)凝固劑是液體培育基，緣由是配方中無(wú)凝固劑有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，所以能有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，所以能

10、分解纖維素的分解纖維素的 微生物可以大量繁衍微生物可以大量繁衍用牛肉膏蛋白胨培育基與之對(duì)照用牛肉膏蛋白胨培育基與之對(duì)照酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸3、詳細(xì)操作：、詳細(xì)操作：將土樣參與裝有將土樣參與裝有30ml選擇培育基的錐形瓶中，將錐選擇培育基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培育形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培育12天，天，直至培育液變渾濁。也可反復(fù)選擇培育直至培育液變渾濁。也可反復(fù)選擇培育在選擇培育的條件下，可以使那些可以順應(yīng)在選擇培育的條件下，可以使那些可以順應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁衍，而那這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁衍，而那些不順應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微

11、生物的繁衍被抑些不順應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁衍被抑制，因此可以起到制，因此可以起到“濃縮的作用濃縮的作用旁欄思索旁欄思索4為什么選擇培育可以為什么選擇培育可以“濃縮所需的微生物？濃縮所需的微生物？酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸梯度稀釋梯度稀釋 按照課題按照課題1 的稀釋操作方法，將選擇培的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培育基進(jìn)展等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)養(yǎng)后的培育基進(jìn)展等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)到到106酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸將樣品涂布到鑒別纖維將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上素分解菌的培育基上1、制備培育基、制備培育基:參照旁欄中的比例參照旁欄中的比例2、涂布平板：將稀釋度

12、為、涂布平板：將稀釋度為104106的菌懸液的菌懸液各取各取0.1ml涂布在培育基上，涂布在培育基上，30倒置培育倒置培育酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸挑選產(chǎn)生透挑選產(chǎn)生透明圈的菌落明圈的菌落 參照課本剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透參照課本剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，普通即為分解纖維素的菌落明圈的菌落，普通即為分解纖維素的菌落酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸剛果紅染色法剛果紅染色法方法一：先培育微生物，再參與剛果方法一：先培育微生物，再參與剛果紅進(jìn)展顏色反響紅進(jìn)展顏色反響方法二：在倒平板時(shí)就參與剛果紅方法二：在倒平板時(shí)就參與剛果紅旁欄思索旁欄思索5這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與缺乏這兩種

13、方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與缺乏酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸染色法染色法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)方法方法一一方法方法二二顏色反響根顏色反響根本上是纖維本上是纖維素分解菌的素分解菌的作用作用操作繁瑣操作繁瑣剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜生混雜操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便不存在菌落不存在菌落混雜問(wèn)題混雜問(wèn)題 產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，也產(chǎn)生模糊透明圈， 有些微生物能降解色素，有些微生物能降解色素，構(gòu)成明顯的透明圈。構(gòu)成明顯的透明圈。酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸練一練練一練1、在富含纖維素的環(huán)境中尋覓纖維素分解菌，符合以下哪終身物、在富含纖維素的環(huán)境中尋覓纖維素分解菌，

14、符合以下哪終身物學(xué)觀念？學(xué)觀念？ A、生物構(gòu)造與功能相順應(yīng)的觀念、生物構(gòu)造與功能相順應(yīng)的觀念 B、生物構(gòu)造與功能整體性觀念、生物構(gòu)造與功能整體性觀念C、生物與環(huán)境相順應(yīng)的觀念、生物與環(huán)境相順應(yīng)的觀念 D、生物開(kāi)展進(jìn)化的觀念、生物開(kāi)展進(jìn)化的觀念2、從土壤中分別獲得某種微生物的步驟是、從土壤中分別獲得某種微生物的步驟是 土壤取樣土壤取樣 梯度稀釋梯度稀釋 選擇培育選擇培育 菌懸液涂布平板菌懸液涂布平板 挑選出單個(gè)菌落挑選出單個(gè)菌落A、 B、C、 D、3、有關(guān)選擇培育正確的表達(dá)是、有關(guān)選擇培育正確的表達(dá)是 A、可以添加纖維素分解菌的濃度、可以添加纖維素分解菌的濃度B、可以減少纖維素分解菌的濃度、可以

15、減少纖維素分解菌的濃度C、所用培育基是固體培育基、所用培育基是固體培育基D、所用培育基是平板培育基、所用培育基是平板培育基CBA酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)一培育基的制造能否合格以及選擇培育基能否挑選出一培育基的制造能否合格以及選擇培育基能否挑選出菌落菌落二分別的結(jié)果能否一致二分別的結(jié)果能否一致 設(shè)置對(duì)照，假設(shè)對(duì)照的培育基在培育過(guò)程中無(wú)菌落設(shè)置對(duì)照，假設(shè)對(duì)照的培育基在培育過(guò)程中無(wú)菌落生長(zhǎng)那么闡明培育基制造合格。假設(shè)察看到產(chǎn)生透明圈生長(zhǎng)那么闡明培育基制造合格。假設(shè)察看到產(chǎn)生透明圈的菌落，那么闡明能夠獲得了分解纖維素的微生物。的菌落，那么闡明能夠獲得了分

16、解纖維素的微生物。假設(shè)不同，分析產(chǎn)生不同結(jié)果的緣由。假設(shè)不同，分析產(chǎn)生不同結(jié)果的緣由。酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸五、課題延伸五、課題延伸 本課題對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)展了初步的本課題對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)展了初步的挑選，但是這只是分別純化的第一步。挑選，但是這只是分別純化的第一步。 為確定得到的是纖維素分解菌，還需求進(jìn)展為確定得到的是纖維素分解菌，還需求進(jìn)展發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有 液體液體 發(fā)酵和發(fā)酵和 固體固體 發(fā)酵。發(fā)酵。 纖維素酶的測(cè)定方法普通是對(duì)纖維素酶分解纖維素酶的測(cè)定方法普通是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生

17、的葡萄糖進(jìn)展定量的測(cè)定。濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)展定量的測(cè)定。酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸課堂總結(jié)課堂總結(jié)纖纖維維素素分分解解微微生生物物的的分分別別纖維素酶纖維素酶種類、作用、最適種類、作用、最適pH、催化活力、催化活力剛果紅染色剛果紅染色挑選原理挑選原理實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤取樣土壤取樣選擇培育選擇培育涂布培育涂布培育純化培育純化培育前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纖維素土壤富含纖維素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鑒別染色鑒別分別出分解菌分別出分解菌酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸 【練一練】【練一練】 有些微生物能合成纖維素酶，經(jīng)過(guò)對(duì)這些有些微生物能合成

18、纖維素酶，經(jīng)過(guò)對(duì)這些微生物的研討和作用，使人們可以利用秸稈等微生物的研討和作用，使人們可以利用秸稈等廢棄物消費(fèi)酒精，用纖維素酶處置服裝面料等。廢棄物消費(fèi)酒精，用纖維素酶處置服裝面料等。研討人員用化合物研討人員用化合物A、硝酸鹽、磷酸鹽以及微、硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制的培育基，勝利的挑選到能產(chǎn)生纖量元素配制的培育基，勝利的挑選到能產(chǎn)生纖維素酶的微生物。分析回答以下問(wèn)題。維素酶的微生物。分析回答以下問(wèn)題。 (1)培育基中參與的化合物培育基中參與的化合物A是是_，為微，為微生物的生長(zhǎng)提供生物的生長(zhǎng)提供_，這種培育基屬于，這種培育基屬于_培育基。培育基。 (2)為了挑選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物，向培為了挑選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物，向培育基中參與育基中參與_。纖維素纖維素碳源碳源選擇選擇剛果紅剛果紅酶酶篩選篩選操作操作結(jié)果結(jié)果延伸延伸 (3)在挑選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物之前，可在挑選出能產(chǎn)生纖維素酶的微