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文檔簡介

1、BCA法測定蛋白濃度主講人：周芳亮【原理】：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度?！局饕攸c】1. 不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響。2. 檢測不同蛋白質分子的變異系數(shù)遠小于考馬氏亮藍。3. 快速：45分鐘內完成測定。4. 準確靈敏, 線性范圍廣。5. 經(jīng)濟實用：在微孔板中進行測定，可大大節(jié)約樣品和試劑用量。 【實驗器材與試劑】1器材: 分光光度計、恒溫水浴鍋。2. 試劑: BCA試劑盒；待測樣品?！静僮鞑襟E】 1.配制BCA工作液: 根據(jù)標準品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑

2、加1體積Cu試劑（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。 2. 稀釋標準品：用生理鹽水稀釋蛋白標準品BSA。實驗步驟實驗步驟實驗步驟實驗步驟200蛋白液稀釋5、按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液，1：10,1:100稀釋液）各150 l分別加到作好標記的試管中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。6、向每個試管中各加入3 ml BCA工作液，充分混勻，37水浴中孵育30分鐘 ，將各管冷卻至室溫，須在3-5分鐘內完成檢測。7、用分光光度計在562 nm處，測定每個樣品及BSA標準品的吸光值，同時做好記錄。8、繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度?！咀⒁馐马棥浚?1.標本的充分混勻。 2.要得到更為精確的蛋白濃度結果，每個蛋白樣品均需做復孔, 每次均應做標準

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